生物制导溶瘤病毒制剂及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种生物制导溶瘤病毒制剂及应用，所述病毒为包含重组NDV

【技术实现步骤摘要】
生物制导溶瘤病毒制剂及应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种生物制导溶瘤病毒制剂及应用。

技术介绍

[0002]内皮糖蛋白(CD105)是转化生长因子
‑
β超家族的受体，被认为是血管生成的一个强有力的标记物。肿瘤新生血管内皮细胞表面高表达Endoglin，而其它正常血管内皮细胞几乎不表达，是血管性疾病发病机制和肿瘤进展的重要参与因素，是实体瘤治疗的靶标。
[0003]PD
‑
1(programmed cell death protein 1)程序性死亡受体1，是一种重要的免疫抑制分子。癌细胞表面的PD
‑
L1和T细胞表面的PD
‑
1结合，会诱导T细胞凋亡瓦解、抑制T细胞的增殖。“溶瘤病毒+免疫检验点抗体”原位协同增效的治疗策略，在肿瘤内靶向递送免疫检验点抗体，具有逆转T细胞耗竭的优点。
[0004]成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein FAP)是基质中的一种表面抗原，多种恶性肿瘤都有表达。肿瘤组织需要通过新生血管与活化的成纤维细胞等基质形成来获取肿瘤细胞存活和生长所必需的营养物质。肿瘤相关成纤维细胞中FAP含量丰富,可以激活基质中的生长因子等，以利于血管生成，从而促进肿瘤生长、转移。在以肿瘤基质为靶点的抗肿瘤免疫治疗中发挥作用，显著诱导肿瘤相关成纤维细胞的凋亡。FAP在肿瘤的发生、发展及转移中发挥着重要作用，同时作为一种理想的抗肿瘤靶分子。将FAPscFv重组入NDV，溶解肿瘤细胞的同时，破坏了肿瘤生长的外基质，破坏了种子成长所需要的土壤，干扰肿瘤细胞的生长和侵袭。
[0005]超敏溶瘤病毒(oncolytic virus)是能特异性感染癌细胞并大量复制，最终裂解癌细胞后释放出来，再感染更多癌细胞的一类病毒，进入肿瘤组织引起局部的超敏反应。新城疫病毒NDV是一种天然的单股负链RNA非致病性溶瘤病毒，在癌细胞内具有很高的复制效率(是正常细胞中的10000倍)和一定的溶瘤能力。NDV通过与癌细胞表面所分布丰富的NDV受体—唾液酸残基结合而进入细胞内。由于癌细胞缺乏抗病毒、凋亡途径和Ⅰ型INF信号传导通路，NDV选择性地只能在癌细胞内复制而不感染正常细胞，因而能广泛杀伤癌细胞，而不会伤及人类正常组织。此外，新城疫病毒使肿瘤细胞裂解后释放肿瘤特异性抗原，一定程度上能刺激免疫细胞活化而诱导肿瘤免疫反应。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术存在的不足，本专利技术的目的是提供一种生物制导溶瘤病毒制剂及应用(重组新城疫溶瘤病毒、制剂及应用)。
[0007]本专利技术提供了一种包含重组新城疫病毒NDV
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EPGPF质粒的重组新城疫溶瘤病毒，所述重组新城疫溶瘤病毒由重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒与辅助质粒共转染BSR细胞拯救获得。
[0008]本专利技术所述包含重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒的重组新城疫溶瘤病毒是指包含重组新城疫病毒NDV、CD105 scFv、PD
‑
1scFv、α1,3 GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因(简称
NDV
‑
EPGPF)质粒的重组病毒。
[0009]所述辅助质粒选自N、P、L等。
[0010]所述N具体指表达NDV的NP蛋白的质粒。
[0011]所述P具体指表达NDV的P蛋白的质粒。
[0012]所述L具体指表达NDV的L蛋白的质粒。
[0013]所述野生型新城疫病毒NDV的序列如GenBank FJ766530.1公布。
[0014]所述包含重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒的重组新城疫溶瘤病毒的序列是在野生型新城疫病毒的序列(GenBank FJ766530.1)中插入CD105 scFv、PD
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1scFv、α1,3 GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因的序列。
[0015]所述重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒是在NDV上重组包含CD105 scFv、PD
‑
1scFv、α1,3 GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒；
[0016]所述CD105 scFv基因的序列如SEQ ID NO:1所示；
[0017]所述PD
‑
1scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；
[0018]所述α1,3 GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示；
[0019]所述PD
‑
L1 scFv基因的序列如SEQ ID NO:4所示；
[0020]所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:5所示。
[0021]本专利技术还提供了所述的重组新城疫溶瘤病毒在制备预防和/或治疗痘苗病毒和新城疫病毒疫苗中的应用。
[0022]其中，所述重组病毒用于抑制肿瘤的生长、增殖、迁徙、转移，或促进肿瘤的凋亡。
[0023]本专利技术还提供了一种重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒，其为在NDV上重组包含CD105 scFv、PD
‑
1scFv、α1,3 GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒。
[0024]所述CD105scFv基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述PD
‑
1scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；所述α1,3 GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示；所述PD
‑
L1 scFv基因的序列如SEQ ID NO:4所示；所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:5所示。
[0025]所述野生型新城疫病毒NDV的序列如GenBank FJ766530.1公布。
[0026]本专利技术还提供了所述的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒在构建重组新城疫溶瘤病毒中的应用。
[0027]本专利技术还提供了一种制备上述重组新城疫溶瘤病毒的制备方法，所述方法包括如下步骤：
[0028]步骤一、构建所述重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒；
[0029]步骤二、提取包含测序正确的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒；
[0030]步骤三、BSR细胞复苏、换液、传代和铺板；
[0031]步骤四、利用痘苗病毒感染BSR细胞，然后用步骤二中提取的重组质粒对BSR细胞进行转染；
[0032]步骤五、取转染后的细胞上清接种到鸡胚中，提高病毒滴度；
[0033]步骤六、从步骤五中的鸡本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含重组NDV
‑
EPGPF质粒的重组新城疫溶瘤病毒，其特征在于，所述重组新城疫溶瘤病毒由重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒与辅助质粒共转染BSR细胞拯救获得。2.如权利要求1所述的重组新城疫溶瘤病毒，其特征在于，所述辅助质粒包括N、P、L。3.如权利要求1所述的重组新城疫溶瘤病毒，其特征在于，所述重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒是在NDV上重组包含CD105 scFv、PD
‑
1scFv、α1,3GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒；所述CD105 scFv基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述PD
‑
1scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；所述α1,3GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示；所述PD
‑
L1 scFv基因的序列如SEQ ID NO:4所示；所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:5所示。4.重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒，其特征在于，其为在NDV上重组包含CD105 scFv、PD
‑
1scFv、α1,3GT、PD
‑
L1 scFv和FAP scFv基因的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒。5.如权利要求4所述的重组新城疫病毒NDV
‑
EPGPF质粒，其特征在于，所述CD105 scFv基因的序列如SEQ ID NO:1所示；所述PD
‑
1scFv基因的序列如SEQ ID NO:2所示；所述α1,3GT基因的序列如SEQ ID NO:3所示；所述PD
‑
L1 scFv基因的序列如SEQ ID NO:4所示；所述FAP scFv基因的序列如SEQ ID NO:5所示。6.如权利要求4或5所述的重组NDV
‑
EPGPF质粒在构建重组新城疫溶瘤病毒中的应用。7.一种制备如权利要求1
‑
3之任一项所述的重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永祥，钟莉娉，
申请(专利权)人：钟莉娉，
类型：发明
国别省市：