【技术实现步骤摘要】
一种采用少量简并引物全面扩增humanTCR
β
链文库的制备方法
[0001]本专利技术涉及免疫组库测序文库的扩增制备
，具体为一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法。
技术介绍
[0002]免疫组库(Immune Repertoire，IR)是指在任何指定时间，个体的循环系统内所有功能多样性B细胞和T细胞的总和，免疫系统的多样性对机体健康至关重要，其多样性越丰富，机体的免疫系统就越健康，识别并清除抗原的能力就越强，机体的获得性免疫能识别无数种抗原分子，并随之做出反应，其分子基础为T细胞表面受体和B细胞表面受体(TCR和BCR)特异性识别抗原区段，激活免疫应答，免疫系统中T细胞库和B细胞库分别包含了所有特异性不同的T细胞克隆和B细胞克，这种识别受体的多样性在基因重排过程中产生，多样性体现为受体基因V(D)J片段重组，TCRβ基因群可变区包括V β、Dβ、Jβ三类基因片段，TCRα基因群包括Vα、Jα两类基因片段，不同基因片段及不同链的组合可产生1016种可能性，因此分析多样性主...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、淋巴细胞裂解和总RNA提取：将样本预处理后，进行RNA提取；S2、逆转录：对获得的淋巴细胞的总RNA进行逆转录，获得cDNA；S3、多重PCR：通过对cDNA进行第一轮PCR和第二轮PCR，对cDNA的TCRβ链基因进行特异性扩增；S4、添加测序接头序列及index；S5、测序结果分析：高通量测序完成后，使用fastq文件进行数据分析，采用以MIXCR为核心的独特的分析工具将测序结果比对到T细胞受体的V、D、J、C基因参考序列上，利用前一步骤获得的比对结果拼接clonotypes，输出比对结果，最后生成免疫组库多样性图谱。2.根据权利要求1所述的一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，根据S1中的操作步骤，包括以下步骤：S101、取250μL血液转移至1.5mL的RNase
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free离心管中，加入750μL裂解液，反复吹打，并剧烈振荡混匀后，室温静置5min；S102、加入200μL氯仿，剧烈振荡15sec混匀后，制得样品，室温静置2min；S103、将样品置于离心机中，使混合溶液分层，取上层水相转移至1.5mL的RNase
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free离心管中，加入0.5倍体积无水乙醇，颠倒混匀，获得预处理混合液；S104、将RNA吸附柱套入2mL收集管中，将预处理混合液加入到RNA吸附柱中，离心，弃掉废液；S105、加入500μL去蛋白液，离心，弃废液；S106、将RNA吸附柱放回收集管，加入500μL漂洗液，室温离心30sec，弃废液，重复循环一次；S107、将RNA吸附柱放回收集管，空柱室温离心2min，除去残留的漂洗液；S108、将RNA吸附柱放入新的1.5mL RNase
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free离心管中，RNase
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freeH2O洗脱，室温放置2min，然后通过离心1min，收集滤液，即为RNA溶液，然后通过离心1min，收集滤液，即为RNA溶液。3.根据权利要求2所述的一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，所述离心机设置温度为4℃，转速为12000rpm，离心10min。4.根据权利要求1所述的一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，根据S2中的操作步骤，包括以下步骤：S201、在RNase
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free离心管中配置混合液，将配置的混合液，在温度为65℃的温度下，加热5min，迅速置于冰上骤冷；S202、配制第一链cDNA合成反应液，用移液器轻轻吹打混匀后，进行第一链cDNA合成反应。5.根据权利要求4所述的一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，所述混合液为RNase
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freeddH2O、Gene
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Specific
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Primers和TotalRNA混合制得混合液。6.根据权利要求4所述的一种采用少量简并引物全面扩增humanTCRβ链文库的制备方法，其特征在于，所述第一链cDNA合成反应液为混合液、2
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RTMix和EnzymeMix混合制得。
7.根据权利要求1所述的一种采用少量简并引物全面扩增human...
【专利技术属性】
技术研发人员：张翼冠，赵海洋，魏平，
申请(专利权)人：云测智能科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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