一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，包括基础添加剂和作为活性成分的干细胞外泌体，其中，干细胞外泌体由以下方法制备得到：将干细胞接种于诱导培养基中进行诱导培养，诱导培养基中添加的诱导培养试剂为活性肽、植物硫肽激素

【技术实现步骤摘要】
一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其是涉及一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂。

技术介绍

[0002]皮肤是对身体起保护作用的防御膜，是对于疾病的第一道防线，并且，表皮起到防止微生物侵入的屏障的作用。由此，在创伤、烧伤、擦伤、刮伤以及其他皮肤损伤的治疗过程中，首要目的是迅速缝合以预防感染，以及治疗创伤。
[0003]最轻度的创伤仅限于皮肤表皮层，稍重者有皮肤和皮下组织断裂，并出现伤口；严重的创伤可有肌肉、肌键、神经的断裂及骨折。轻度创伤可通过上皮再生愈合，后两者由于创伤严重，会引起正常皮肤组织的外观形态和组织病理学改变而形成瘢痕，瘢痕生长超过一定的限度，就会发生各种并发症，诸如外形的破坏及功能活动障碍等，给患者带来巨大的肉体痛苦和精神痛苦，尤其是烧伤、烫伤、严重外伤后遗留的瘢痕。
[0004]各种创伤均会造成不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损，必须通过细胞增生和细胞间基质的形成来进行组织修复。在此修复过程中，成纤维细胞起着十分重要的作用，在创伤修复的后期，成纤维细胞通过分泌胶原酶参与修复后组织的改建。
[0005]外泌体(Exosome)是细胞向胞外分泌的囊泡类小体，直径为30～150纳米，具有典型的脂质双分子层膜结构。干细胞来源的外泌体不仅含有受体即蛋白质，还含有核成分，因此能够起到细胞间交流的作用。因此，如何利用干细胞外泌体提供一种能够更好的修复皮肤的制剂是目前需要解决的问题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术旨在提出一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，以解决上述问题。
[0007]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0008]一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，包括基础添加剂和作为活性成分的干细胞外泌体，其中，干细胞外泌体由以下方法制备得到：
[0009]1)将人脐带血间充质干细胞在培养基中进行传代培养，选择3
‑
5代间充质干细胞在DMEM/F12培养基培养待细胞融合率达到90
‑
95％，消化回收细胞；
[0010]2)将消化后的细胞接种于诱导培养基中进行诱导培养，诱导培养基中添加的诱导培养试剂为10
‑
15ng/ml活性肽、1
‑
5ng/ml植物硫肽激素
‑
α、50
‑
100ng/ml表皮生长因子、0.1
‑
0.3μmol/ml的3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤，将接种了间充质干细胞的培养基与5％CO2、37℃的条件下培养48
‑
72h回收培养上清，过滤后通过超速离心法分离纯化得到干细胞外泌体。
[0011]进一步，干细胞外泌体以蛋白质质量计的质量百分比用量为0.007
‑
0.012％。
[0012]进一步，干细胞外泌体以蛋白质质量计的质量百分比用量为0.0095％。
[0013]进一步，活性肽为谷胱甘肽。
[0014]进一步，按重量百分比计，基础添加剂包括0.5
‑
0.8％海茴香提取物、0.1
‑
0.3％神经酰胺、0.05
‑
0.2％虾青素、1
‑
3％枸杞多糖、0.5
‑
1％维生素E、0.5
‑
1％卡波姆。
[0015]进一步，分离纯化方法包括如下步骤：
[0016]1)将收集的培养上清液500
‑
700g离心8
‑
10min，保留上清液，弃沉淀，去除培养液中的细胞；
[0017]2)将得到的上清液1500
‑
2000g离心15
‑
20min，保留上清液，弃沉淀，去除细胞碎片；
[0018]3)将得到的上清液10000
‑
20000g离心50
‑
90min，保留上清液，弃沉淀，去除细胞碎片；
[0019]4)将得到的上清液120000
‑
200000g离心80
‑
130min，弃上清液，保留沉淀作为提取的干细胞外泌体。
[0020]本专利技术还提供了一种如上述任一项所述的用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂在制备皮肤修复药物中的应用。
[0021]相对于现有技术，本专利技术所述的用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂具有以下优势：
[0022]本专利技术采用特定成分作诱导试剂对干细胞进行培养，能够影响干细胞产生的外泌体的活性及外泌体纯度，且本专利技术制备的干细胞外泌体能够有效促进胶原的分泌，添加了该外泌体的制剂也更适用于进行皮肤修复，更有利于淡化瘢痕。
具体实施方式
[0023]需要说明的是，在不冲突的情况下，本专利技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0024]下面将结合实施例来详细说明本专利技术。
[0025]实施例1
[0026]干细胞外泌体由以下方法制备得到：
[0027]1)将人脐带血间充质干细胞接种在DMEM/F12培养基中进行传代培养，接种密度为4
×
104个细胞/ml，培养条件为5％CO2、37℃；之后选择3
‑
5代间充质干细胞重新在DMEM/F12培养基培养，待细胞融合率达到90
‑
95％，用0.25％胰酶消化1min左右消化细胞，加终止液吹打收集细胞；
[0028]2)选择生长状态良好的消化后的细胞并接种于诱导培养基中，诱导培养基为添加了11ng/ml谷胱甘肽、2.5ng/ml植物硫肽激素
‑
α、100ng/ml表皮生长因子、0.15μmol/ml的3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤的DMEM/F12培养基，置于5％CO2、37℃的条件下培养72h，每24h更换一次培养基，培养结束回收培养上清；
[0029]3)过滤后通过超速离心法分离纯化得到干细胞外泌体；具体步骤为：将收集的培养上清液500g离心10min，保留上清液，弃沉淀，去除培养液中的细胞；将得到的上清液2000g离心20min，保留上清液，弃沉淀，去除细胞碎片；将得到的上清液20000g离心90min，保留上清液，弃沉淀，去除细胞碎片；将得到的上清液150000g离心120min，弃上清液，保留沉淀作为提取的干细胞外泌体，并于4℃以下保存备用。
[0030]人脐带血间充质干细胞购自武汉普诺赛生命科技有限公司，货号：CP
‑
H165。
[0031]实施例2
[0032]在上述实施例1的基础上，诱导培养基中添加的诱导培养试剂为10ng/ml谷胱甘肽、4ng/ml植物硫肽激素
‑
α、80ng/ml表皮生长因子、0.3μmol/ml的3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，其特征在于：包括基础添加剂和作为活性成分的干细胞外泌体，其中，干细胞外泌体由以下方法制备得到：1)将人脐带血间充质干细胞在培养基中进行传代培养，选择3
‑
5代间充质干细胞在DMEM/F12培养基培养待细胞融合率达到90
‑
95％，消化回收细胞；2)将消化后的细胞接种于诱导培养基中进行诱导培养，选择生长状态良好的消化后的细胞，并接种于诱导培养基中进行诱导培养，接种密度为4
×
104个细胞/ml，诱导培养基中添加的诱导培养试剂为10
‑
15ng/ml活性肽、1
‑
5ng/ml植物硫肽激素
‑
α、50
‑
100ng/ml表皮生长因子、0.1
‑
0.3μmol/ml的3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤，将接种了间充质干细胞的培养基与5％CO2、37℃的条件下培养48
‑
72h回收培养上清，过滤后通过超速离心法分离纯化得到干细胞外泌体。2.根据权利要求1所述的用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，其特征在于：干细胞外泌体以蛋白质质量计的质量百分比用量为0.007
‑
0.012％。3.根据权利要求2所述的用于皮肤修复的干细胞外泌体制剂，其特征在于：干细胞外泌体以蛋白质质量计的质量百分比用量为0.0095％...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蒙蒙，聂蓓蕾，张雪萍，
申请(专利权)人：洛阳市三启生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：