糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法技术

本发明专利技术属于体外诊断试剂技术领域，为克服糖化白蛋白校准品、质控品生产过程繁杂，成本高，液体形态产品测值容易变化的缺点，提供糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，包括以下步骤：以人重组白蛋白或者血清为原料，进行糖基化；加入糖基化反应抑制剂或终止剂，抑制剂或终止剂选自金属螯合剂、硫辛酸或肌肽中的一种或几种，金属螯合剂浓度0.1

【技术实现步骤摘要】
糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法。

技术介绍

[0002]人体中的葡萄糖与血清蛋白的N
‑
末端发生非酶促的糖基化反应,其中90％与血清蛋白链内第189位赖氨酸结合,形成高分子的酮胺结构,总称为糖化血清蛋白，其中90％以上为糖化血清白蛋白，因此糖化血清白蛋白(Glycated Albumin，GA)可以反映糖化血清蛋白的总体水平。糖化白蛋白是反映过去2
‑
3周平均血糖水平的一项指标，比血糖检测“金标准”糖化血红蛋白的反映周期要短一些。因此，GA在治疗效果的确认以及临床用药量的调整方面比糖化血红蛋白具有优势。
[0003]但是传统的糖化白蛋白校准品的制备过程，一般都是经过糖基化后，进行过滤或透析，以除去未反应的葡萄糖，避免进一步糖基化带来测值的改变，而且透析后，都是做成冻干粉的形式，工艺繁杂，不利于量产。例如专利CN105092336A采用血清为原料，经过离心、糖基化、透析纯化然后冷冻干燥，得到成品；CN1103076213A采用人重组白蛋白为原料，经过糖基化、透析纯化，然后冷冻干燥，得到成品；CN104764638A，同样采用人重组白蛋白为原料，进行糖基化，提纯过程采用了切向流过滤技术，上述专利再做成成品前，都需要经过纯化的步骤，目的是除去未反应的葡萄糖和小分子糖化多肽，避免糖基化反应的持续进行改变试剂测值。而且最后都是做成冻干粉的形式，工艺流程比较复杂。鉴于校准品、质控品制备糖基化过程受干扰因素较多，液体形态产品测值容易发生变化，因此目前尚未见液态糖化白蛋白校准品、质控品相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在克服上述冻干粉形态的糖化白蛋白校准品、质控品生产过程中的流程繁杂,液体形态产品测值容易变化的的缺点，提供一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，通过在糖基化的反应液中添加糖基化反应抑制剂和终止剂，来提供一种糖基化后无需纯化和冻干的液态糖化白蛋白校准品和质控品，生产工艺大大简化，试剂的稳定性好，使用方便。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)以人重组白蛋白或者血清为原料，进行糖基化，糖基化程度依据校准品或质控品的浓度而定；
[0008](2)加入糖基化反应抑制剂或终止剂，从而使已经糖基化的蛋白质维持在一定浓度，所述抑制剂或终止剂选自金属螯合剂、硫辛酸或肌肽中的一种或几种，所述金属螯合剂终浓度0.1
‑
3g/L,硫辛酸终浓度0.1
‑
1g/L，肌肽终浓度0.05
‑
1g/L；
[0009](3)加入不冻液，不冻液与糖基化反应液之间的体积比为1:3
‑
1:1，所述不冻液为
1,2
‑
丙二醇或1,3
‑
丙二醇或者其组合；
[0010](4)将制得的糖化白蛋白校准品或质控品在
‑
20℃以下保存。
[0011]进一步的，所述步骤(2)金属螯合剂终浓度0.5g/L，硫酸锌终浓度0.35g/L，肌肽终浓度0.75g/L。
[0012]进一步的，所述步骤(2)金属螯合剂为次氮基三乙酸。
[0013]进一步的，还包括步骤(4)将糖化白蛋白校准品或质控品在
‑
20℃到
‑
30℃范围内保存。
[0014]进一步的，所述步骤(4)保存时间最长为12个月。
[0015]有益效果：
[0016](1)通过加入抑制剂或终止剂，抑制糖基化反应的进行，通过低温保存，进一步抑制糖基化反应的进行，确保试剂的稳定性；
[0017](2)不用进行透析或过滤，避免了制作成冻干粉的繁杂步骤，生产工艺更简单，且成本低，更适合量产；
[0018](3)冻干粉复溶过程，由于添加复溶液时体积有可能有偏差，再就是每批次冻干粉的含水量也有可能有差异，还有就是开盖的过程中有可能有粉尘扑出，因此，有带来误差的可能性，该试剂为液体试剂，从而避免了这一问题；
[0019](4)液态试剂，取用更方便。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。
[0021]糖基化反应液糖基化进行的具体程度根据所需的校准、质控浓度值确定，其中前期糖基化的过程，不在本专利技术的
技术实现思路
之列，本专利技术旨在解决的问题是，通过加入糖基化反应抑制剂或终止剂，来避免纯化的过程，并且通过做成液体的形式，简化生产工艺，本文只是通过具体实施例，来说明本专利技术提供的简化生产工艺的可行性。因此任何其他形式的抑制和终止糖基化反应的行为，可以通过本专利技术得到启发，也在本专利技术保护之列。
[0022]实施例1：
[0023][0024][0025]将上述溶液置于37℃，糖基化反应36h，混匀后，用糖化白蛋白检测试剂盒测试，溶液中糖化白蛋白浓度为7.31
±
0.54g/L，向上述溶液中加入金属螯合剂次氮基三乙酸，0.5g/L，充分混匀后，再与1,3丙二醇，按体积比1：1混合，再次充分混匀，然后分装于1mL的小瓶，置于
‑
20℃保存，分别于不同时间段分别取出一瓶，测试其糖化白蛋白含量，测值见下表：
[0026]表1实施例1糖化白蛋白试剂的稳定性
[0027]时间7天1个月3个月6个月12个月糖化白蛋白浓度(g/L)7.327.297.257.337.31
[0028]本实施例制得的糖化白蛋白校准品或质控品，
‑
20℃保存的12个月内，状态均匀，测值稳定(均未超出靶值范围)，适合量产。
[0029]实施例2
[0030][0031]将上述溶液置于37℃，糖基化反应72h，混匀后，用糖化白蛋白检测试剂盒测试，溶液中糖化白蛋白浓度为21.43
±
1.61g/L，向上述溶液中加入α
‑
硫辛酸，终浓度0.35g/L，充分混匀后，与1,3丙二醇，按体积比1：2混合，再次充分混匀，然后分装于1mL的小瓶，置于
‑
20℃保存,分别于不同时间段分别取出一瓶，测试其糖化白蛋白含量，测值见下表：
[0032]表2实施例2糖化白蛋白试剂的稳定性
[0033]时间7天1个月3个月6个月12个月糖化白蛋白浓度(g/L)21.4121.3821.4621.4521.52
[0034]该法制得的糖化白蛋白校准品或质控品，
‑
20℃保存的12个月内，状态均匀，测值稳定(均未超出靶值范围)，适合量产。
[0035]实施例3：
[0036][0037]将上述溶液置于37℃，糖基化反应36h，混匀后，用糖化白蛋白检测试剂盒测试，溶液中糖化白蛋白浓度为7.79
±
0.57g/L，向上述溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化白蛋白校准品或质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以人重组白蛋白或者血清为原料，进行糖基化，糖基化程度依据校准品或质控品的浓度而定；(2)加入糖基化反应抑制剂或终止剂，从而使已经糖基化的蛋白质维持在一定浓度，所述抑制剂或终止剂选自金属螯合剂、硫辛酸或肌肽中的一种或几种，所述金属螯合剂终浓度0.1
‑
3g/L，硫辛酸终浓度0.1
‑
1g/L，肌肽终浓度0.05
‑
1g/L；(3)加入不冻液，不冻液与糖基化反应液之间的体积比为1:3
‑
1:1，所述不冻液为1,2
‑
丙二醇或1,3
‑
丙二醇或者其组合；(4)将制得的糖化白蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，宋金玲，顾晓云，贾培艳，刘美雪，
申请(专利权)人：青岛汉唐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：