一种基于稀土上转换纳米探针的甲型流感病毒核酸标记方法技术

本发明专利技术涉及一种基于稀土上转换纳米探针的病毒核酸标记方法。本发明专利技术利用链霉亲和素与生物素特征性反应将稀土上转换纳米探针与DNA茎环结构结合；借助甲型流感病毒繁殖过程中的自组装过程，稀土上转换纳米探针

【技术实现步骤摘要】
一种基于稀土上转换纳米探针的甲型流感病毒核酸标记方法


[0001]本专利技术属于生物技术和材料
，具体涉及一种基于稀土上转换纳米探针的甲型流感病毒核酸标记方法。

技术介绍

[0002]由于病毒的基因组被封装于完整的病毒颗粒内，所以无法通过常用的染料进行标记，目前主要利用嵌入性染料标记病毒核酸。有机荧光染料发射光谱宽、光稳定性较差，长时间实时荧光监测相对困难，并且对于病毒活性有一定的影响。也有研究使用茎环结构连接量子点通过碱基互补配对原则对病毒核酸进行标记，但是无论是有机染料或者量子点，对病毒标记之后比较适合用于病毒体外示踪，由于生物组织的存在以及光穿透性不好，限制了它们在体内的应用。上转换发光材料是一种吸收长波长光而发射出短波长光的一种材料，具有良好的组织穿透性。与传统的荧光探针相比，稀土上转换纳米粒子发光亮度高、荧光寿命长(毫秒量级)、光稳定性好、抗漂白性强、穿透深度深、无背景荧光干扰，更适用于体内病毒标记。我们研发一种基于稀土上转换纳米探针的病毒核酸标记方法，利用与甲型流感病毒编码NA的RNA互补配对的DNA茎环结构与稀土上转换纳米探本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于稀土上转换纳米探针的甲型流感病毒核酸标记方法；其特征是，包括如下步骤：(1)取表面羧基化稀土上转换纳米颗粒溶液，加入1
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(3
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二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和N
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羟基琥珀酰亚胺旋转过夜活化后离心后弃上清，加入ddH2O重悬后加入链霉亲和素，旋转混匀后离心加入ddH2O重悬即获得链霉亲和素化的稀土上转换纳米颗粒；(2)向链霉亲和素化的稀土上转换纳米颗粒溶液中加入茎环，旋转反应后即获得用于标记病毒核酸的稀土上转换纳米探针；(3)向培养犬肾细胞MDCK的小皿中加入甲型流感病毒放入二氧化碳培养箱中孵育；加入稀土上转换纳米探针后在共聚焦显微镜下观察细胞内稀土上转换纳米探针信号，在980nm激光激发下观察到稀土上转换纳米探针发出540nm绿色荧光；(4)将甲型流感病毒与MDCK细胞共孵育至50％细胞死亡，收集细胞和上清于离心管中，通过反复冻融裂解细胞，离心后使用滤膜过滤后离心除去细胞碎片，通过蔗糖密度梯度离心后重悬即获得核酸被稀土上转换纳米探针标记的甲型流感病毒。2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤(1)中，1
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(3

【专利技术属性】
技术研发人员：常津，庞高举，王汉杰，张英英，潘惠卓，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：