一种梭曼中毒的特征肽段及梭曼中毒的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种梭曼中毒的特征肽段及梭曼中毒的鉴定方法，该特征肽段包括肽段A、肽段B、肽段C、肽段D、肽段E共5条膦酰化肽段且5条膦酰化肽段均位于白蛋白上。其将5条白蛋白上的特异性肽段作为靶向肽段，实现神经性毒剂中毒事件中梭曼中毒的精准确证，鉴定的时间窗口长且鉴定速度快，准确性高。准确性高。准确性高。

【技术实现步骤摘要】
一种梭曼中毒的特征肽段及梭曼中毒的鉴定方法


[0001]本专利技术属于梭曼中毒鉴定
，具体地涉及一种梭曼中毒的特征肽段及梭曼中毒的鉴定方法。

技术介绍

[0002]甲氟磷酸频哪酯，简称梭曼，是一种典型的甲基氟膦酸酯有机磷神经性毒剂。纯净的梭曼为无色液体，有微弱的水果香味，工业品呈黄色，有樟脑味；能溶于水，易溶于有机溶剂；能渗透皮肤和橡胶制品，易被多孔物质吸附。甲基氟膦酸酯可以通过皮肤、粘膜、眼睛和呼吸道进入人体，以高度血管化的呼吸道和粘膜吸收最快。它是不可逆的胆碱酯酶抑制剂。中毒者会产生胸闷、缩瞳、流涎、流涕、呼吸困难和全身痉挛等神经性毒剂中毒的症状，严重时，迅速死亡。据有关资料记载，人若吸入几口高浓度的梭曼蒸气后，在一分钟之内即可致死，中毒症状与沙林相似。其突出优点是挥发度适中，不仅初生云团在暴露1分钟的情况下很容易达到致死浓度，，再生云团在暴露20分钟的情况下也能达到一定的伤害作用。冬季其持久度在地面上能达到10
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15小时。众所周知，梭曼可与BChE和AChE快速作用产生剧烈的中毒症状，如呼吸窘迫、强直
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阵挛性惊厥、持久性皮质癫痫发作和死亡。非致命性接触梭曼中毒后，嚬呐基易脱烷基化，这使得膦酰化胆碱酯酶快速老化，老化后的胆碱酯酶无法被肟类药物重活化，造成脑损伤等不可逆的急性中毒症状。
[0003]梭曼的一个显著特点是中毒作用快，且无特效解药，其抑制的人胆碱酯酶的半衰期仅为2min，这造成梭曼中毒人员的给药治疗时间短，救治难度大，因此称其为“最难防治的毒剂”。<br/>[0004]白蛋白是血浆中丰度最高的蛋白质，是分子质量为65
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69KDa。它在肝脏合成，是参与药物可逆结合的血浆蛋白的主要成分。在体内，白蛋白分布在血浆、皮肤、肌肉和各种其他组织的细胞外液中。组织间液白蛋白的浓度约是其血浆浓度的60％。通常其浓度维持在相对恒定的水平，35
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55mg/mL。白蛋白有多个具有亲核活性的氨基酸残基，能被药物毒物修饰形成蛋白质加合物。
[0005]梭曼中毒后，在生物体内一般会代谢成原体和小分子降解产物等，它们在生物体内的存续时间比较短且特征性不明显；此外，梭曼还能与体内活性蛋白质共价结合形成加合物，其半衰期较长，例如白蛋白消除的半衰期是17～1天，可以在血液中存在数周之久，因此将白蛋白上作为梭曼中毒溯源研究的靶向蛋白，具有重要的理论和应用价值。梭曼中毒一般采用尿检等，其检测时间窗口短，现有技术无法追踪毒剂的指纹基团，难以确定毒剂结构，如何延长梭曼中毒的时间窗口且提高鉴定速度具体十分重要意义。

技术实现思路

[0006]为了解决现有梭曼中毒鉴定速度慢且鉴定方法时间窗口短的现象，本专利技术提供一种梭曼中毒的特征肽段及梭曼中毒的鉴定方法，其将5条白蛋白上的特异性肽段作为靶向肽段，实现神经性毒剂中毒事件中梭曼中毒的精准确证，鉴定的时间窗口长且鉴定速度快，
准确性高。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0008]本专利技术第一方面提供一种梭曼中毒的特征肽段，包括肽段A、肽段B、肽段C、肽段D、肽段E共5条膦酰化肽段且5条膦酰化肽段均位于白蛋白上；
[0009]所述肽段A为：Tyr
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Lys
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Ala
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Ile
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Leu
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Thr
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Glu
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Cys
‑
Cys
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Glu
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Ala
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Ala
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Asp
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Lys，所述肽段A的加合位点为K162；
[0010]所述肽段B为：Glu
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Lys
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Ala
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Leu
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Ile
‑
Ser
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Ala
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Ala
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Gln
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Glu
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Arg，所述肽段B的加合位点为K188；
[0011]所述肽段C为：Ala
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Asp
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Phe
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Thr
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Asp
‑
Ile
‑
Ser
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Lys
‑
Ile
‑
Val
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Thr
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Asp
‑
Leu
‑
Thr
‑
Lys，所述肽段C的加合位点为K233；
[0012]所述肽段D为：Asp
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Leu
‑
Phe
‑
Leu
‑
Gly
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Lys
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Phe
‑
Leu
‑
Tyr
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Glu
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Tyr
‑
Ser
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Arg，所述肽段D的加合位点为K329；
[0013]所述肽段E为：Lys
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Gln
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Thr
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Ala
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Leu
‑
Val
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Glu
‑
Leu
‑
Val
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Lys，所述肽段E的加合位点为K525。
[0014]本专利技术第二方面提供一种梭曼中毒的鉴定方法，包括以下步骤：
[0015]获取待检测染毒样品，所述待检测染毒样品为待检测对象的全血；
[0016]对全血进行稀释并量取血清，纯化分离出白蛋白；
[0017]白蛋白进行膦酰化肽段提取，得到膦酰化活性肽段的冻干粉；
[0018]将解冻的冻干粉制备成溶液，脱盐后，利用液相色谱
‑
质谱联用技术进行检测，得到与待检测染毒样品对应的质谱数据，所述质谱数据包括膦酰化肽段和加合位点；
[0019]判断质谱数据中是否具有第一方面中的所述的特征肽段，若存在，则鉴定为梭曼中毒，反之，则不是。
[0020]在一种可能的设计中，所述纯化分离出白蛋白包括：
[0021]采用白蛋白/IgG去除试剂盒纯化血清白蛋白。
[0022]在一种可能的设计中，所述对白蛋白进行膦酰化肽段提取，得到膦酰化活性肽段的冻干粉，包括：
[0023]在白蛋白条带中按比例加入胰蛋白酶溶液，旋涡振荡混匀，水浴酶解16h；将胰酶酶解后的反应液加入1.5mL截留分子量为10kDa的超滤管中，以转速14800rpm离心15min，再用200μL NH4HCO3清洗超滤管内壁2次，合并过滤液进行超滤和冷冻干燥。
[0024]在一种可能的设计中，所述利用液相色谱
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质谱联用技术进行检测时，利用Easy
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种梭曼中毒的特征肽段，其特征在于，包括肽段A、肽段B、肽段C、肽段D、肽段E共5条膦酰化肽段且5条膦酰化肽段均位于白蛋白上；所述肽段A为：Tyr
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Lys
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Ala
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Ile
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Leu
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Thr
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Glu
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Cys
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Cys
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Glu
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Ala
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Ala
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Asp
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Lys，所述肽段A的加合位点为K162；所述肽段B为：Glu
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Lys
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Ala
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Leu
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Ile
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Ser
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Ala
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Ala
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Gln
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Glu
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Arg，所述肽段B的加合位点为K188；所述肽段C为：Ala
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Asp
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Phe
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Thr
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Asp
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Ile
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Ser
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Lys
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Ile
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Val
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Thr
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Asp
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Leu
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Thr
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Lys，所述肽段C的加合位点为K233；所述肽段D为：Asp
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Leu
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Phe
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Leu
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Gly
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Lys
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Phe
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Leu
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Tyr
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Glu
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Tyr
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Ser
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Arg，所述肽段D的加合位点为K329；所述肽段E为：Lys
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Gln
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Thr
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Ala
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Leu
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Val
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Glu
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Leu
‑
Val
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Lys，所述肽段E的加合位点为K525。...

【专利技术属性】
技术研发人员：符飞燕，裴承新，王红梅，邹帅，余金，徐冬，张棽棽，
申请(专利权)人：中国人民解放军六一六九九部队，
类型：发明
国别省市：