用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒属于免疫学检测邻域。一种用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括固相载体和包被在固相载体上的肿瘤相关抗原对应的一抗，所述肿瘤相关抗原为膀胱肿瘤抗原(BTA)、CD44和存活素(Survivin)。本发明专利技术提供了一种用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、性能稳定的特点。点。点。
【技术实现步骤摘要】
用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒
[0001]本专利技术是一种用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，所用方法是双抗体夹心酶联免疫法以及生物素－亲和素生物反应放大系统，属于免疫学检测邻域。
技术介绍
[0002]膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是世界范围内常见恶性肿瘤，在男性全身肿瘤中发病率居第7位。一般来说，膀胱癌在中后期才能被诊断出来，约75％为非肌层浸润型膀胱癌，5年生存率为88％
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98％，而肌层浸润型膀胱癌5年生存率仅46％
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63％，且超过70％患者经治疗后仍会复发，给患者带来了巨大的身心伤害。因此，对膀胱癌患者的早期诊断至关重要。
[0003]膀胱癌的传统诊断手段很多，目前早期诊断方法主要有临床表现、尿脱落细胞学检查、光学成像、肿瘤标志物检测、影像学检查、膀胱镜检查活检、诊断性电切术后行病理学检查等。在临床中，膀胱镜检查是膀胱癌诊断的金标准，但这种方法具有一定的侵入性，操作复杂，并且在膀胱癌的早期诊断中，灵敏度和特异性较低，容易出现较高的假阳性率。且膀胱镜是有创操作，属侵入性检查,病人较为痛苦,在患者存在泌尿系统感染时不宜行此操作，甚至膀胱镜检查本身有导致泌尿系统感染的可能性。
[0004]膀胱癌的发生会对血液和尿液的成分产生直接影响，因此非侵入性的液体活检将为膀胱癌的早期诊断带来新的检测方法。液体活检是一种具有非常好的发展前景的膀胱癌生物标志物检测方法，它可以对多种生物标志物联合分析检测，进一步提高检测结果的灵敏度和特异性。液体活检具有较高的效率，检测时间一般在几分钟之内，可以实现对肿瘤标志物的快速检测。除此之外，液体活检还容易实现便携化，已经被广泛应用于疾病诊断，具有非常好的应用前景。近年来随着分子生物学的发展，膀胱癌分子生物学诊断方面有了重大的进步，为膀胱癌液体活检技术提供了有力的支持。
[0005]膀胱肿瘤抗原是近年来临床中研究最多的膀胱癌肿瘤标志物之一。膀胱肿瘤细胞可以降解膀胱基底膜，形成基底膜复合物，这些降解产物被排到膀胱中,就形成了膀胱肿瘤抗原(Bladder tumor antigen，BTA)，又称为补体因子H相关蛋白(human complement factor H related protein，HCFHrp)。目前FDA批准的有两种BTA检测试剂，BTA
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Stat和BTA
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Trak，研究显示其中BTA
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Stat的敏感性和特异性分别是64％，77％，BTA
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Trak的灵敏度与特异度分别为65％，74％。因此BTA是一种非常有潜力的肿瘤标志物。
[0006]存活素(Survivin)蛋白，是分子量为16.5kD的一种胞浆蛋白，是凋亡抑制蛋白家族中抗凋亡活性最强的蛋白，它在人的各种恶性肿瘤组织中如胃癌、前列腺癌等表达高，在分化差的组织中表达更加明显，而在正常细胞及组织中不表达，Survivin可直接作用Caspase,主要通过抑制Caspase
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3，
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7而阻断细胞凋亡。生存素在膀胱癌组织中的表达水平高于癌旁组织，随着肿瘤分级和分期的增加，其表达水平也相应增加。研究表明，肌层浸润性膀胱癌生存素的表达发生率高于非肌层浸润性膀胱癌，低分化肿瘤中生存素的表达发生率高于中分化肿瘤，这提示生存素的表达与肿瘤分期和分级密切相关，对膀胱肿瘤的早期
诊断是一个非常重要的参考指标。
[0007]CD44是在细胞之间、细胞的粘附和迁移过程中起作用的一种糖蛋白，参与了多种细胞功能，通常在许多肿瘤的发生、发展以及转移的过程中伴随着CD44的异常表达。研究发现，膀胱肿瘤患者尿液中CD44的水平明显超过了健康志愿组，正常人的尿路上皮中CD44少量表达，当尿路上皮发生早期恶变时，CD44的表达会逐渐增加，之后又随着肿瘤发展侵袭，CD44表达又逐渐减少，其敏感性可达到81.1％，而特异性接近100％，因此，CD44是膀胱癌早期诊断的一个重要指标。
[0008]BTA、CD44和Survivin已有文献报道与膀胱癌的诊断相关，但3者联合检测膀胱癌还未见报道。目前已公开的与膀胱癌诊断相关的试剂盒多以血液或血清为检测物，尿液中肿瘤标志物检测膀胱癌还未见报道。
技术实现思路
[0009]针对现有技术中存在的问题和不足，本专利技术提供了一种用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、性能稳定的特点。
[0010]本专利技术所采取的技术方案是：尿样中BTA、Survivin和CD44三种蛋白的联合诊断的组合在用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒中的应用。
[0011]用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒包括酶标板、标准品、稀释瓶、洗涤液、链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶工作液、生物素标记的第二抗体，显色液和终止液。所述样品稀释液为含有1％(W/V)BSA的PBST(磷酸盐吐温)缓冲液；所述显色液液由显色液A和显色液B组成，所述显色液A为0.02％(W/V)TMB(3,3
’
,5,5
’‑
四甲基联苯胺)，所述显色液B为0.006％(W/V)过氧化脲；所述终止液为2mol/L的硫酸；所述洗涤液为含0.2％吐温
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20的PBST(磷酸盐
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吐温)缓冲液。
[0012]用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，所述的第二抗体与生物素偶联，有放大反应的作用。
[0013]用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，所述的标记物为与链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶。
[0014]用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，内含三块已经包被的96孔酶标板，分别包被有第一抗人BTA、第一抗人CD44和第一抗人Survivin，孔板可拆卸。使用时必须同时使用三块板，可根据样本数目选择板条数。
[0015]用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，检测样本为人的尿液样本。
[0016]与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案具有以下优点：
[0017](1)当前市面上的试剂盒多是以一种指标作为检测对象，单一的标记物很难同时达到较高的灵敏度和特异性来检测膀胱癌的发生，而本专利技术制备的用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒可同时检测尿液样品中Survivin、CD44和BTA这3种蛋白的表达水平，与单一标志物检测相比，三者联合检测，检出成功率高，技术重现性好，且对于膀胱癌诊断的敏感度为96.8％特异性为80.0％，能够对膀胱癌患者的早期诊断和治疗提供临床参考价值。
[0018](2)本专利技术提供的用于早期膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，以尿液作为检测对象，而市面上用于膀胱癌诊断的试剂盒多以血清、血浆或组织匀浆作为检测对象，而血浆或血清中蛋白的含量较多，可能会对检测过程产生干扰，造成假阳性或假阴性，导致检测结果
的不准确。而与血清标志物相比，尿液标志物有更多优势，尿液容易收集、可反复检测，又本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.胱肿瘤尿液标志物BTA、CD44和Survivin的组合在制备用于膀胱癌早期诊断的试剂盒中的应用。2.一种用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括固相载体和包被在固相载体上的肿瘤相关抗原对应的一抗，所述肿瘤相关抗原为膀胱肿瘤抗原(BTA)、CD44和存活素(Survivin)。3.用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，其特征在于，包括酶标板、标准品、稀释液、洗涤液、链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶工作液、生物素标记的第二抗体，显色液和终止液。4.根据权利要求3所述的用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，其特征在于，内含三块已经包被的96孔酶标板，分别包被有第一抗人BTA单克隆抗体、第一抗人CD44单克隆抗体和第一抗人Survivin单克隆抗体，孔板可拆卸：a)包被有第一抗人BTA单克隆抗体的96孔板；b)包被有第一抗人CD44单克隆抗体的96孔板；c)包被有第一抗人Survivin单克隆抗体的96孔板。5.根据权利要求3所述的用于膀胱癌诊断的多联ELISA试剂盒，其特征在于，标准品溶液...
【专利技术属性】
技术研发人员：李劲涛，袁闻浚，王丽，王明连，王小利，李长硕，杨怡姝，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：
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