用于快速检测急性期反应物和白细胞的设备和方法技术

本发明专利技术提供了用于量化体液样品中的急性期反应物(例如，C反应蛋白(CRP)或血清淀粉样蛋白A(SAA))的量和/或血液样品中的白细胞计数的诊断装置和方法。特别地，本发明专利技术提供了以高灵敏度和特异性检测血液中CRP、SAA和/或白细胞的快速测定法。细胞的快速测定法。细胞的快速测定法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于快速检测急性期反应物和白细胞的设备和方法
[0001]相关申请案的交叉引用
[0002]本申请要求于2018年11月20日提交的美国临时专利申请第62/769,977号的优先权权益，并且通过引用将其整体并入。本文提及的任何出版物或专利文献的全部公开内容通过引用整体并入。


[0003]除其他事项外，本专利技术涉及进行生物和化学测定(如免疫测定)的装置和方法。

技术介绍

[0004]急性期反应物(APRs)传统上已被用作炎症的生物标记物和在感染期间作为“疾病指数”的测量。ARPs有多种，包括C反应蛋白(CRP)、甘露糖结合蛋白、补体因子、铁蛋白、血浆铜蓝蛋白、血清淀粉样蛋白A、结合珠蛋白等。CRP，主要在肝脏中产生的急性期反应物，通常被称为炎症的生物标记物。CRP被认为是细菌感染的特异性生物标记物，因为病毒感染不会导致从肝细胞产生CRP。另外，CRP可用于区分炎性疾病(例如，炎性肠病、肠淋巴瘤或肠结核)。血清淀粉样蛋白A(SAA)代表另一示例性急性期反应物。SAA在人血清中富含天然的高密度脂蛋白(HDL)。细菌感染通常导致血液中WBC增加。检测和测量急性期反应物(例如，CRP和SAA)和WBC可用于确定疾病进展或治疗的有效性。当前急性期反应物和WBC测定的方法包括ELISA、免疫比浊法、比浊法、快速免疫扩散法、视觉凝集法、血细胞计数器和流式细胞术。尽管用于检测血液中的急性期反应物(例如，CRP或SAA)的许多免疫测定是已知的，但仍然需要快速且灵敏的测定来准确地检测体液样品中急性期反应物的存在，并且如果存在的话，量化其存在。还需要在感染期间测量白细胞和相应的急性期反应物水平。

技术实现思路

[0005]本专利技术涉及用于快速检测和量化急性期反应物的量的诊断装置和方法，例如存在于体液样品(例如血液)中的C反应蛋白(CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)和/或白细胞(WBC)。此外，本专利技术涉及制造这种装置的方法。
[0006]在一个方面，本专利技术提供一种用于测量血液样品中的第一分析物和第二分析物的设备，包含：(a)第一板；(b)第二板；(c)固定到所述第一板和所述第二板中的至少一个的多个间隔件；和(d)设置在第一板和第二板中的至少一个上的样品接触区域；其中所述多个间隔件具有：(i)柱状形状；(ii)基本上平顶表面，(iii)基本上均匀的高度，以及(iv)恒定间隔距离，其中该样品接触区域被配置为保持含有或疑似含有第一分析物和第二分析物的血液样品，并且其中该样品接触区域包含：(i)固定在所述样品接触区域上的捕获试剂，其中所述捕获试剂被配置为结合到所述第一分析物以形成复合物，(ii)固定在所述样品接触区域上的检测试剂，其中所述检测试剂被配置为在所述样品中可扩散并结合至所述复合物，以及(iii)固定在所述样品接触区域上的染色试剂，其中所述染色试剂被配置为染色所述第二分析物。在一些实施例中，所述第一分析物是急性期反应物。更在一些实施例中，急性
期反应物是选自CRP或SAA的至少一种化合物。在一些实施例中，所述第二分析物是WBC。在一些实施例中，板中的一个或两个具有多个间隔件。这些间隔件具有5至30μm的基本上均匀的高度。在一些实施例中，间隔件具有10μm的基本上均匀的高度。在一些实施例中，捕获试剂是抗体或适体。抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体结合CRP或SAA。在一些实施例中，抗体与固定在样品接触区域上的微结构缀合。微结构可以是多个珠粒。在一些实施例中，多个珠粒由聚苯乙烯或二氧化硅制成。在一些实施例中，多个珠粒具有2至30μm的直径。更在一些实施例中，多个珠粒具有10μm的直径。在一些实施例中，检测试剂是抗体。抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体与捕获试剂和CRP的复合物或捕获试剂和SAA的复合物结合。
[0007]在一些实施例中，检测试剂用荧光标记。荧光可以是FITC、罗丹明或Cy5。染色试剂可以是SYTO 9。在一些实施例中，所述设备可以进一步包含固定在样品保持器上的蛋白质稳定剂。在一些实施例中，该设备可以进一步包含移动装置，其中包含成像器的所述移动装置被配置为捕获该样品的图像。在一些实施例中，所述设备进一步包含适配器，其中，所述适配器被配置为容纳所述样品保持器，并且当所述适配器附接到所述移动装置并且附接到移动装置时，将所述样品定位在所述成像器的视场(FOV)中。在一些实施例中，适配器具有能够发射波长为400nm至700nm的光的光源。更在一些实施例中，适配器具有能够发射650nm波长的光的光源。更在一些实施例中，适配器具有能够发射450nm波长的光的光源。在一些实施例中，移动装置是iPhone。更在一些实施例中，iPhone是iPhone6S或iPhone 10。在另一方面，本专利技术提供一种用于测量血液样品中的第一分析物和第二分析物的设备，包含：(A)第一板；(b)第二板；(c)固定到所述第一板和所述第二板中的至少一个的多个间隔件；以及(d)设置在第一板和第二板中的至少一个上的样品接触区域；其中所述多个间隔件具有(i)柱状形状；(ii)基本上平顶表面，(iii)基本上均匀的高度，以及(iv)恒定间隔距离，并且其中该样品接触区域被配置为保持含有或疑似含有第一分析物和第二分析物的血液样品，并且所述样品接触区域包含：(i)固定在所述样品接触区域上的第一捕获试剂，其中所述第一捕获试剂被配置为结合到所述第一分析物以形成第一复合物，(ii)固定在所述样品接触区域上的第一检测试剂，其中所述检测试剂被配置为可扩散到所述样品中且结合到所述第一复合物，(iii)固定在所述样品接触区域上的第二捕获试剂，其中所述第二捕获试剂被配置为结合到所述第二分析物以形成第二复合物，以及(iv)固定在所述样品接触区域上的第二检测试剂，其中所述第二检测试剂被配置为可扩散到所述样品中且结合到所述第二复合物。在一些实施例中，第一分析物是CRP。在一些实施例中，第二分析物是SAA。更在一些实施例中，第一分析物是CRP并且第二分析物是SAA。在一些实施例中，板中的一个或两个具有多个间隔件。这些间隔件具有5至30μm的基本上均匀的高度。在一些实施例中，该多个间隔件具有10μm的基本上均匀的高度。在一些实施例中，第一捕获试剂是抗体或适体。所述抗体为单克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体结合CRP。在一些实施例中，第二捕获剂是抗体或适体。所述抗体为单克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体与SAA结合。在一些实施例中，抗体与固定在样品接触区域上的微结构缀合。在一些实施例中，该微结构是多个珠粒。在一些实施例中，多个珠粒由聚苯乙烯或二氧化硅制成。在一些实施例中，该多个珠粒具有2至30μm的直径。更在一些实施例中，该多个珠粒具有10μm的直径。在一些实施例中，第一检测试剂是抗体。在一些实施例中，抗体是单克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体可以结合
第一捕获试剂和CRP的第一复合物。在一些实施例中，第二检测试剂是单克隆抗体。在一些实施例中，单克隆抗体结合第二捕获试剂和SAA的第二复合物。在一些实施例中，第二检测试剂用荧光标本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于测定血液样品中的靶细胞和非细胞分析物的方法，包含：(a)具有两个彼此面对并由间隙隔开的板，其中每个所述板具有用于接触样品的样品接触区域；(b)将细胞染色试剂、捕获剂和样品限定在两个所述板的所述样品接触区域之间并形成薄样品层，其中所述样品含有或疑似含有靶细胞和非细胞分析物，所述样品具有由间隙限定的厚度，所述染色试剂染色靶细胞，并且所述捕获剂特异性结合所述非细胞分析物；以及(c)在(b)之后，对所述薄样品层成像以检测和计数所述靶细胞，并检测和量化所述分析物；其中所述间隙具有被配置为使靶细胞在所述薄样品层中具有单层的尺寸，且其中在所述单层中，所述靶细胞不具有显著重叠性。2.如权利要求1所述的方法，其中在限定所述样品的步骤(b)之前，将所述捕获剂涂覆在所述样品接触区域中的一个或两个上。3.如权利要求1所述的方法，其中在限定所述样品的步骤(b)之前，将所述染色剂涂覆在所述样品接触区域中的一个或两个上。4.如权利要求1所述的方法，其中在限定所述样品的步骤(b)之前，将所述染色剂和所述捕获剂涂覆在所述样品接触区域中的一个或两个上。5.一种用于测定血液样品中的靶细胞和非细胞分析物的装置，包含：(a)两个彼此面对并由间隙隔开的板，其中每个所述板具有用于接触含有或疑似含有靶细胞和非细胞分析物的样品的样品接触区域；(b)在所述样品接触区域的一个或两个中涂覆细胞染色试剂和/或捕获剂；其中所述板的所述样品接触区域将样品限定为薄样品层；其中所述薄样品层具有由所述间隙限定的厚度，所述染色试剂染色所述靶细胞，并且所述捕获剂特异性结合所述非细胞分析物；其中所述间隙具有被配置为使靶细胞在所述薄样品层中具有单层的尺寸，且其中在所述单层中，所述靶细胞不具有显著重叠性。6.一种用于测定血液样品中的靶细胞和非细胞分析物的装置，包含：(a)两个彼此面对并由间隙隔开的板，其中每个所述板具有用于接触含有或疑似含有靶细胞和非细胞分析物的样品的样品接触区域；(b)在两个所述板的所述样品接触区域之间的微结构；(c)涂覆在所述微结构的表面上或所述样品接触区域中的一个或两个中的细胞染色剂和/或捕获剂；其中所述板的所述样品接触区域将所述样品限定为薄样品层；其中所述薄样品层具有由所述间隙限定的厚度，所述染色试剂染色所述靶细胞，并且所述捕获剂特异性结合所述非细胞分析物；其中所述间隙具有被配置为使靶细胞在所述薄样品层中具有单层的尺寸，且其中在所述单层中，所述靶细胞不具有显著重叠性。7.如权利要求5所述的装置，进一步包含成像器，所述成像器拍摄所述样品层的一个或多个图像以用于检测和计数所述血细胞，并且检测和/或量化所述分析物。8.如任一前述权利要求所述的方法，进一步包含在所述两个板的所述样品接触区域之间放置微结构。
9.如任一前述权利要求所述的方法，进一步包含使用检测剂检测所述非细胞分析物，其中所述检测剂特异性结合所述非细胞分析物。10.如任一前述权利要求所述的装置，进一步包含检测剂，其中所述检测剂特异性地结合所述非细胞分析物。11.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述两个板是相对于彼此可移动的，其中所述两个板之间的间隙是由间隔件调节的，其中所述间隔件中的至少一个在所述样品接触区域中。12.如权利要求1所述的方法，其中检测所述细胞和检测所述非细胞分析物在100秒或更短的时间段内完成。13.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述血液是全血。14.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述靶细胞是白细胞。15.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述分析物是急性期反应物。16.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述非细胞分析物是选自CRP或SAA的至少一种化合物的急性期反应物。17.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述捕获剂或所述检测试剂是抗体、核酸或适体。18.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述抗体是单克隆抗体。19.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述捕获或检测剂是结合CRP或SAA的单克隆抗体。20.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述微结构与抗体缀合。21.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述微结构是多个珠粒。22.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述多个珠粒是由聚苯乙烯或二氧化硅制成的。23.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述多个珠粒具有2μm至30μm的直径。24.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述多个珠粒具有10μm的直径。25.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中检测试剂是抗体。26.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述抗体是单克隆抗体。27.如权利要求16所述的方法设备，其中所述单克隆抗体结合所述捕获试剂和CRP的复合物，或所述捕获试剂和SAA的复合物。28.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述检测剂用荧光标签标记。29.如权利要求18所述的方法设备，所述荧光标签是FITC、罗丹明或Cy5。30.如任一前述权利要求所述的方法和装置，其中所述染色试剂是SYTO 9或YOYO。31.一种用于测定血细胞和血液中的分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬，
申请(专利权)人：ESSENLIX公司，
类型：发明
国别省市：