工程化的嵌合融合蛋白组合物及其使用方法技术

本公开提供了用于制备和使用工程化吞噬细胞的组合物和方法，所述工程化吞噬细胞表达具有增强的吞噬活性的嵌合抗原受体，用于癌症或感染的免疫治疗。或感染的免疫治疗。或感染的免疫治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化的嵌合融合蛋白组合物及其使用方法
交叉引用
[0001]本申请要求2019年4月30日提交的美国临时申请号62/841,190、2019年4月30日提交的美国临时申请号62/841,183、2020年3月23日提交的美国非临时申请号16/827,381和2020年3月23日提交的美国非临时申请号16/827,302的权益，每个申请的全部内容通过引用并入本文。

技术介绍

[0002]细胞免疫疗法是一种很有前景的新技术，可用于对抗难以治疗的疾病，例如癌症和持续感染以及对其他形式的治疗难以治愈的某些疾病。CAR
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T细胞的发现及其在免疫治疗中的潜在用途取得了重大突破。CAR
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T细胞是表达嵌合抗原受体的T淋巴细胞，嵌合抗原受体有助于将T细胞靶向特定的患病细胞，例如癌细胞，并且取决于所使用的胞内结构域和共表达的免疫抑制细胞因子可以诱导旨在杀死靶癌细胞或免疫抑制和/或耐受的细胞毒反应。然而，在这个过程中有几个限制减缓了CAR
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T细胞的进展，并削弱了其在临床试验中的前景。
[0003]了解CAR
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T细胞的局限性是利用该技术并继续创新以获得更好的免疫治疗模型的关键。具体地，在T细胞恶性肿瘤中，CAR
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T细胞似乎面临着一个主要问题。CAR
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T细胞和恶性T细胞在大多数T细胞淋巴瘤(TCL)中共享表面抗原，因此，CAR
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T细胞与癌细胞一样受到细胞毒性的影响。在某些情况下，CAR
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T产品可能会被恶性T细胞污染。此外，由于CAR
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T细胞的长期存在，T细胞发育不全是一个潜在的问题。其他限制包括CAR
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T细胞穿透实体瘤的能力较差，以及强大的肿瘤微环境会下调其抗肿瘤潜力。CAR
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T细胞功能也受到免疫抑制性肿瘤微环境(TME)的负面影响，导致内源性T细胞失活和衰竭。
[0004]髓系细胞，包括巨噬细胞，是源自骨髓谱系的细胞，并且属于先天免疫系统。它们源自骨髓干细胞，骨髓干细胞会进入血液并迁移到组织中。它们的一些主要功能包括吞噬作用、T细胞反应的激活以及细胞碎片和胞外基质的清除。它们还在维持体内平衡以及引发和解决炎症方面发挥重要作用。此外，髓系细胞可以分化为许多下游细胞，包括巨噬细胞，根据它们从周围微环境中接收到的刺激类型，它们可以表现出从促炎到抗炎的不同反应。此外，组织巨噬细胞已被证明对其他免疫细胞类型(包括CDT效应细胞、NK细胞和T调节细胞)发挥广泛的调节和激活作用。巨噬细胞已被证明是恶性肿瘤中的主要免疫浸润，并已被证明对效应免疫浸润和功能具有广泛的免疫抑制影响。
[0005]髓系细胞是免疫系统的主要细胞区室，包括单核细胞、树突细胞、组织巨噬细胞和粒细胞。在过去的几年里，人们重新审视了髓系细胞的细胞个体发育、激活、分化和组织特异性功能的模型，并取得了令人惊讶的结果。然而，它们在体内平衡和疾病过程中的巨大适应性和异质性尚不清楚。尽管髓系细胞具有许多功能，包括吞噬作用及其激活T细胞的能力，但利用这些功能进行治疗用途仍然难以解决。因此，寻求使用其他细胞类型开发包括但不限于T细胞恶性肿瘤的改进的疗法的新途径。
[0006]工程化的髓系细胞在体内也可能寿命很短、表型多样、敏感、有适应性，并且通常
难以在体外进行操作。例如，与非造血细胞中的外源基因表达相比，单核细胞中的外源基因表达一直很困难。与转染髓系细胞(例如，单核细胞/巨噬细胞)相关的技术困难很大。作为专职吞噬细胞，髓系细胞，如单核细胞/巨噬细胞，包含许多有效的降解酶，这些降解酶可以破坏核酸完整性并使基因转移到这些细胞中成为一个低效的过程。激活的巨噬细胞尤其如此，它们在暴露于免疫或炎症刺激后，其生理机能会发生巨大变化。这些细胞的病毒转导受到阻碍，因为巨噬细胞是通常不分裂的终末期细胞；因此，依赖于整合到复制基因组中的一些载体取得了有限的成功。此外，巨噬细胞对“危险信号”非常敏感，因此一些用于基因转移的原始病毒载体在这些细胞中诱导了有效的抗病毒反应，使这些载体不适用于基因传递。

技术实现思路

[0007]髓系细胞的多样化功能使它们成为理想的细胞疗法候选，可以工程化为具有多种治疗效果。本公开涉及使用免疫系统的髓系细胞(例如，CD14+细胞)，特别是吞噬细胞的免疫疗法。使用髓系细胞可以考虑许多治疗适应症。例如，髓系细胞免疫疗法在癌症、自身免疫、纤维化疾病和感染中可能极其重要。本公开涉及使用髓系细胞的免疫疗法，包括免疫系统的吞噬细胞，特别是巨噬细胞。本文公开的本专利技术的一个目的是利用髓系细胞的这些功能中的一种或多种用于治疗的用途。例如，本文公开的本专利技术的一个目的是利用髓系细胞(包括工程化髓系细胞)的吞噬活性用于治疗用途。例如，本文公开的本专利技术的一个目的是利用髓系细胞(包括工程化髓系细胞)促进T细胞激活的能力。例如，本文公开的本专利技术的一个目的是利用髓系细胞(包括工程化髓系细胞)促进杀肿瘤分子分泌的能力。例如，本文公开的本专利技术的一个目的是利用髓系细胞(包括工程化髓系细胞)促进免疫细胞和分子的募集和运输的能力。本公开提供了创新的方法和组合物，其可以成功地转染或转导髓系细胞，或以其他方式在髓系细胞中诱导基因修饰，目的是增加髓系细胞的功能方面，另外，不损害细胞的分化能力、成熟潜力和/或其适应性。
[0008]本公开涉及制造和使用工程化的髓系细胞(例如，CD14+细胞，例如巨噬细胞或其他吞噬细胞，其可以直接和/或间接地攻击和杀死(ATAK)患病细胞，例如癌细胞和受感染的细胞。工程化的髓系细胞，例如巨噬细胞和其他吞噬细胞，可以通过使用例如重组核酸技术、合成核酸、基因编辑技术(例如，CRISPR)、转导(例如，使用病毒构建体)、电穿孔或核转染将编码嵌合融合蛋白(CFP)的核酸序列(例如，mRNA、质粒、病毒构建体)掺入细胞中来制备，该嵌合融合蛋白具有对疾病相关抗原(例如，癌抗原)具有特异性的胞外结合结构域。已经发现，髓系细胞可以被工程化为具有广泛且多样的活性范围。例如，已经发现髓系细胞可以被工程化为表达含有抗原结合结构域的嵌合融合蛋白(CFP)以具有广泛且多样的活性范围。例如，已经发现髓系细胞可以被工程化为具有增强的吞噬活性，使得在CFP与靶细胞上的抗原结合后，该细胞表现出对靶细胞的吞噬作用增加。还发现，髓系细胞可以被工程化以促进T细胞激活，使得在CFP与靶细胞上的抗原结合后，该细胞促进T细胞的激活，例如肿瘤微环境中的T细胞。工程化的髓系细胞可以被工程化为促进杀肿瘤分子的分泌，使得在CFP与靶细胞上的抗原结合后，细胞促进附近细胞的杀肿瘤分子的分泌。工程化的髓系细胞可以被工程化为促进免疫细胞和分子的募集和运输，使得在CFP与靶细胞上的抗原结合后，该细胞促进免疫细胞和分子向靶细胞或肿瘤微环境的募集和运输。
[0009]本公开基于以下重要发现，即，工程化髓系细胞克服了CAR
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T细胞的至少一些限
制，包括容易被招募到实体瘤；具有可设计的生存时间，因此降低了导致发本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；其中所述抗原不是CD19或CD22抗原，并且其中在所述CFP与所述靶细胞的抗原结合后，与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤或吞噬活性增加至少20％CFP，其中杀伤或吞噬活性通过流式细胞术测量。2.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；并且其中在所述CFP与所述靶细胞的抗原结合后，与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤或吞噬活性增加至少10倍，其中杀伤或吞噬活性计算为每100个表达所述CFP的细胞的吞没。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自吞噬细胞或栓系受体，或者其中胞内信号传导结构域包含吞噬激活结构域。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自除选自Megf10、MerTk、FcR或Bai1的吞噬细胞受体之外的受体。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自一种受体，所述受体选自表2中列出的受体。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含促炎信号传导结构域。7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含不是PI3K募集结构域的促炎信号传导结构域。8.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；和其中所述胞内信号传导结构域衍生自除选自Megf10、MerTk、FcRα和Bai1的吞噬细胞受体之外的吞噬细胞受体。9.根据权利要求8所述的组合物，其中在所述CFP与所述靶细胞的抗原结合后，与不表
达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤活性增加至少大于20％，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤或吞噬活性增加至少20％，其中杀伤或吞噬活性通过流式细胞术测量。10.根据权利要求8或9所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自选自凝集素、dectin 1、CD206、清道夫受体A1(SRA1)、MARCO、CD36、CD163、MSR1、SCARA3、COLEC12、SCARA5、SCARB1、SCARB2、CD68、OLR1、SCARF1、SCARF2、CXCL16、STAB1、STAB2、SRCRB4D、SSC5D、CD205、CD207、CD209、RAGE、CD14、CD64、F4/80、CCR2、CX3CR1、CSF1R、Tie2、HuCRIg(L)、CD64、CD32a、CD16a、CD89、Fc
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α受体I、CR1、CD35、CD3ζ、CR3、CR4、Tim
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1、Tim
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4、TNFR1、MDA5、CD40和CD169的蛋白质。11.根据权利要求8
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10中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含促炎信号传导结构域。12.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；和其中所述胞内信号传导结构域衍生自选自凝集素、dectin 1、CD206、清道夫受体A1(SRA1)、MARCO、CD36、CD163、MSR1、SCARA3、COLEC12、SCARA5、SCARB1、SCARB2、CD68、OLR1、SCARF1、SCARF2、CXCL16、STAB1、STAB2、SRCRB4D、SSC5D、CD205、CD207、CD209、RAGE、CD14、CD64、F4/80、CCR2、CX3CR1、CSF1R、Tie2、HuCRIg(L)、CD64、CD32a、CD16a、CD89、Fc
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α受体I、CR1、CD35、CD3ζ、CR3、CR4、Tim
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1、Tim
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4、TNFR1、MDA5、CD40和CD169的噬菌受体。13.根据权利要求12所述的组合物，其中在所述CFP与所述靶细胞的抗原结合后，与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤或吞噬活性增加至少55％。14.根据权利要求12或13所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自除选自Megf10、MerTk、FcRα或Bai1的吞噬细胞受体之外的吞噬细胞受体。15.根据权利要求12
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14中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含促炎信号传导结构域。16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含不是PI3K募集结构域的促炎信号传导结构域。17.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；和其中所述胞内信号传导结构域包含不是PI3K募集结构域的促炎信号传导结构域。
18.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；其中所述胞内信号传导结构域包含衍生自TFNR1受体的信号传导结构域。19.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；其中所述胞内信号传导结构域包含衍生自CD40受体的信号传导结构域。20.一种包含编码嵌合融合蛋白(CFP)的重组核酸的组合物，所述嵌合融合蛋白(CFP)包含：(a)吞噬细胞或栓系受体(PR)亚基，所述亚基包括：(i)跨膜结构域，和(ii)包含胞内信号传导结构域的胞内结构域；和(b)包含对靶细胞抗原特异的抗原结合结构域的胞外结构域；其中所述跨膜结构域和所述胞外结构域可操作地连接；其中所述胞内信号传导结构域包含衍生自MDA5受体的信号传导结构域。21.根据权利要求17
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20中任一项所述的组合物，其中在所述CFP与所述靶细胞的抗原结合后，与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞的杀伤或吞噬活性增加至少大于20％，其中杀伤或吞噬活性通过流式细胞术测量。22.根据权利要求17
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21中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自吞噬细胞受体。23.根据权利要求17
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22中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自除选自Megf10、MerTk、FcR或Bai1的吞噬细胞受体之外的吞噬细胞受体。24.根据权利要求17
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23中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自选自凝集素、dectin 1、CD206、清道夫受体A1(SRA1)、MARCO、CD36、CD163、MSR1、SCARA3、COLEC12、SCARA5、SCARB1、SCARB2、CD68、OLR1、SCARF1、SCARF2、CXCL16、STAB1、STAB2、SRCRB4D、SSC5D、CD205、CD207、CD209、RAGE、CD14、CD64、F4/80、CCR2、CX3CR1、CSF1R、Tie2、HuCRIg(L)、CD64、CD32a、CD16a、CD89、Fc
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α受体I、CR1、CD35、CD3ζ、CR3、CR4、Tim
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1、Tim
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4、TNFR1、MDA5、CD40和CD169的吞噬细胞受体。25.根据权利要求1
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15中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含PI3K募集结构域。
26.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域包含FcRγ胞内结构域。27.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以N到C的顺序包含FcRγ胞内结构域和CD40受体胞内信号传导结构域。28.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以C到N的顺序包含FcRγ胞内结构域和CD40受体胞内信号传导结构域。29.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以N到C的顺序包含FcRγ胞内结构域和TNFR1受体胞内信号传导结构域。30.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以C到N的顺序包含FcRγ胞内结构域和TNFR1受体胞内信号传导结构域。31.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以N到C的顺序包含FcRγ胞内结构域和MDA5信号传导结构域。32.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以C到N的顺序包含FcRγ胞内结构域和MDA5信号传导结构域。33.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以N到C的顺序包含FcRγ胞内结构域和PI3K募集结构域。34.根据权利要求26所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域以C到N的顺序包含FcRγ胞内结构域和PI3K募集结构域。35.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中当所述CFP在所述细胞中表达时，所述CFP功能性地掺入细胞的细胞膜中。36.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出表达所述抗原的靶细胞的吞噬作用增加。37.根据权利要求36所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出表达所述抗原的靶细胞的吞噬作用增加至少1.1倍，其中吞噬作用通过流式细胞术测量。38.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出表达所述抗原的靶细胞的吞噬作用增加至少1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍或50倍，其中吞噬作用通过流式细胞术测量。39.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中表达所述抗原的靶细胞是癌细胞。40.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中表达所述抗原的所述靶细胞的直径为至少0.8微米。41.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞内信号传导结构域衍生自清道夫受体。42.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出细胞因子产生的增加。43.根据权利要求42所述的组合物，其中所述细胞因子选自IL
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1、IL3、IL
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6、IL
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12、IL
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13、IL
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23、TNF、CCL2、CXCL9、CXCL10、CXCL11、IL
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18、IL
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23、IL
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27、CSF、MCSF、GMCSF、IL17、IP
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10、RANTES、干扰素及其组合。
44.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出效应物活性的增加。45.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出交叉呈递的增加。46.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出MHCII类蛋白的表达增加。47.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD80的表达的增加。48.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD86的表达的增加。49.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出MHCI类蛋白的表达增加。50.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出TRAIL/TNF家族死亡受体的表达的增加。51.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出B7
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H2的表达的增加。52.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出LIGHT的表达的增加。53.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出HVEM的表达的增加。54.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD40的表达的增加。55.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出TL1A的表达的增加。56.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出41BBL的表达的增加。57.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出OX40L的表达的增加。58.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出GITRL死亡受体的表达的增加。59.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD30L的表达的增加。60.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出TIM4的表达的增加。61.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出TIM1配体的表达的增加。62.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出SLAM的表达的增加。63.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表
达所述CFP的细胞表现出CD48的表达的增加。64.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD58的表达的增加。65.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD155的表达的增加。66.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出CD112的表达的增加。67.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出PDL1的表达的增加。68.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出B7
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DC的表达的增加。69.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出呼吸爆发的增加。70.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出ROS产生的增加。71.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出iNOS产生的增加。72.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出iNOS产生的增加。73.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出细胞外囊泡产生的增加。74.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出表达所述抗原的靶细胞的胞啃作用的增加。75.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出对CD47介导的吞噬作用抑制的抗性的增加。76.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中与不表达所述CFP的细胞相比，表达所述CFP的细胞表现出对LILRB1介导的吞噬作用抑制的抗性的增加。77.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞内结构域包含Rac抑制结构域、Cdc42抑制结构域或GTP酶抑制结构域。78.根据权利要求64所述的组合物，其中所述Rac抑制结构域、所述Cdc42抑制结构域或所述GTP酶抑制结构域在表达所述CFP的细胞的吞噬杯处抑制Rac、Cdc42或GTP酶。79.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞内结构域包含F
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肌动蛋白分解激活结构域、ARHGAP12激活结构域、ARHGAP25激活结构域或SH3BP1激活结构域。80.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中表达所述CFP的细胞表现出磷脂酰肌醇3,4,5
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三磷酸产生的增加。81.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含Ig结合结构域。82.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、FcRγI、FcRγIIA、FcRγIIB、FcRγIIC、FcRγIIIA、FcRγIIIB、FcRn、
TRIM21、FcRL5结合结构域。83.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcR胞外结构域。84.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcR
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α、FcRβ、FcRε或FcRγ胞外结构域。85.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcRα(FCAR)胞外结构域。86.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcRβ胞外结构域。87.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcRε(FCER1A)胞外结构域。88.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含FcRγ(FDGR1A、FCGR2A、FCGR2B、FCGR2C、FCGR3A、FCGR3B)胞外结构域。89.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含整合素结构域。90.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含一种或多种整合素α1、α2、αIIb、α3、α4、α5、α6、α7、α8、α9、α10、α11、αD、αE、αL、αM、αV、αX、β1、β2、β3、β4、β5、β6、β7或β8结构域。91.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞内结构域包含CD47抑制结构域。92.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述PR亚基进一步包含与跨膜结构域和胞外抗原结合结构域可操作地连接的胞外结构域。93.根据权利要求92所述的组合物，其中所述胞外结构域还包含受体、铰链、间隔区或接头的胞外结构域。94.根据权利要求93所述的组合物，其中所述胞外结构域包含PR的胞外部分。95.根据权利要求94所述的组合物，其中所述PR的胞外部分衍生自与PR胞内信号传导结构域相同的PR。96.根据权利要求92
‑
95中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含清道夫受体的胞外结构域或免疫球蛋白结构域。97.根据权利要求96所述的组合物，其中所述免疫球蛋白结构域包含免疫球蛋白的胞外结构域或免疫球蛋白铰链区。98.根据权利要求92
‑
97中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含吞噬吞没标志物。99.根据权利要求92
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98中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含能够进行多聚体组装的结构。100.根据权利要求92
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98中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域包含用于多聚化的支架。101.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域的长度为至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、300、400或500个氨基酸。
102.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外结构域的长度为至多500、400、300、200或100个氨基酸。103.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域与所述靶细胞的抗原特异性结合。104.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域包含抗体结构域。105.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域包含受体结构域、抗体结构域，其中所述抗体结构域包含功能性抗体片段、单链可变片段(scFv)、Fab、单域抗体(sdAb)、纳米抗体、V
H
结构域、V
L
结构域、VNAR结构域、V
HH
结构域、双特异性抗体、双抗体或其功能片段或组合。106.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域包含配体、受体的胞外结构域或衔接子。107.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域包含对单一抗原特异的单一胞外抗原结合结构域。108.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述胞外抗原结合结构域包含至少两个胞外抗原结合结构域，其中至少两个胞外抗原结合结构域中的每一个对不同抗原具有特异性。109.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原是癌抗原或病原体抗原或自身免疫抗原。110.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原包括病毒抗原。111.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原是T淋巴细胞抗原。112.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原是胞外抗原。113.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原是胞内抗原。114.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述抗原选自胸苷激酶(TK1)、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、粘蛋白
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1、粘蛋白
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16(MUC16)、MUC1、表皮生长因子受体vIII(EGFRvIII)、间皮素、人表皮生长因子受体2(HER2)、间皮素、EBNA
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1、LEMD1、磷脂酰丝氨酸、癌胚抗原(CEA)、B细胞成熟抗原(BCMA)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、卵泡刺激素受体、成纤维细胞激活蛋白(FAP)、促红细胞生成素生成性肝细胞癌A2(EphA2)、EphB2、自然杀伤基团2D(NKG2D)配体、双唾液酸神经节苷脂2(GD2)、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44v6、CD45、CD56CD79b、CD97、CD117、CD123、CD133、CD138、CD171、CD179a、CD213A2、CD248、CD276、PSCA、CS
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1、CLECL1、GD3、PSMA、FLT3、TAG72、EPCAM、IL
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【专利技术属性】
技术研发人员：丹尼尔，
申请(专利权)人：美洛德生物医药公司，
类型：发明
国别省市：