一种标记蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了选择需要标记的蛋白，使用带有羧基或者硫代羧基的功能分子作为底物，使用不饱和锍盐作为羧基活化剂，在碱性缓冲溶液下，标记的蛋白发生固相肽键的生成反应；在缓冲溶液中，经过不饱和锍盐活化的胺酯交换反应和蛋白上的氨基形成特异性修饰反应；通过western blot或质谱手段鉴定特异性修饰情况。本发明专利技术使用含有羧基或硫代羧基的功能分子为底物，使用不饱和锍盐作用羧基活化剂，在不同类型的缓冲溶液中，能通过胺酯交换反应标记不同种类的各类蛋白。本发明专利技术使用安全低毒的锍盐活化酯作为标记分子，高效高选择性地可对蛋白标记，可用于基于活性的蛋白分析以及药物偶联抗体的中抗体分子的标记。抗体的中抗体分子的标记。抗体的中抗体分子的标记。

【技术实现步骤摘要】
一种标记蛋白的方法


[0001]本专利技术属于生物化学领域，涉及一种蛋白的标记方法，具体来说是一种通过不饱和锍盐活化羧酸，在不同生理环境的缓冲溶液下，对蛋白进行共价标记的方法。

技术介绍

[0002]通过位点特异性对天然蛋白质进行共价标记是最常用的方法。相比于基因工程，其拥有实验周期更短，实验中存在不确定性因素少等优点，因而成为了更受科研工作者们青睐的蛋白质标记方法。但由于生命体的环境相对温和，因而并不是所有有机化学反应均适用于蛋白标记。因此需要注意如下几点问题：其一，蛋白质标记的化学反应必须耐受生物环境条件(pH 6
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8，≤37℃，水性溶剂)；其二，蛋白质反应过程中底物浓度通常较低(μM及或nM级别)；其三，大多数在有机合成中广泛使用的保护基策略无法使用；其四，在复杂体系下保持对POI(protein of interest,POI)的高选择性。
[0003]其中，半胱氨酸是活性最高的氨基酸残基，因此也成为了迄今为止研究最广泛的蛋白质残基标记之一。但由于半胱氨酸在人类约20000种蛋白质中只有约200000个，占残本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蛋白标记的方法，其特征在于包括如下步骤：1)选择需要标记的蛋白，使用带有羧基或者硫代羧基的功能分子作为底物，使用不饱和锍盐作为羧基活化剂，在碱性缓冲液下，标记的蛋白发生酰胺键的缩合反应；2)在缓冲溶液中，经过不饱和锍盐活化的胺酯交换反应和蛋白上的氨基形成特异性修饰反应；3)通过western blot或质谱手段鉴定特异性修饰情况。2.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的用于标记的蛋白为经过纯化的蛋白、或者加入了细胞裂解液的蛋白、或者为在细胞培养环境中的蛋白中任意一种。3.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的缓冲溶液为水、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、二氯甲烷、甲醇、乙腈或者二甲基亚砜中的任意一种。4.根据权利要求1所述的一种蛋白标记的方法，其特征在于：所述的碱性缓冲溶液为硼酸
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氢氧化钠缓冲溶液、磷酸氢二钠
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【专利技术属性】
技术研发人员：李子刚，尹丰，万川，冯源，王蕊，孔凌微，
申请(专利权)人：北京大学深圳研究生院深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：