一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法技术

本发明专利技术公开了一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，具体包括：1）将氢键受体与氢键供体共熔，得到DES，静置过夜；2）将DES与水配成提取溶剂，再将藤茶粉末与提取溶剂混合均匀，震荡提取，得到二氢杨梅素的提取液；3）取二氢杨梅素的提取液，上样于大孔树脂，依次用蒸馏水、80%的乙醇、95%乙醇洗脱，收集获得80%乙醇洗脱液A，浓缩洗脱液A获得浓缩物B，即为二氢杨梅素单体成分。本发明专利技术能够简便、高效地从藤茶中获得二氢杨梅素化合物，提取的二氢杨梅素得率高，比传统有机溶剂提取率高10

【技术实现步骤摘要】
一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法


[0001]本专利技术属于天然产物提取与分离
，具体涉及一种利用深度共熔溶剂结合大孔树脂层析柱技术，从藤茶中得到二氢杨梅素的方法。

技术介绍

[0002]藤茶是葡萄科Vitaceae michx蛇葡萄属Ampelopsis野生木质落叶藤本植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand
‑
Mazz)W.T.，原产于中国江南山区各地，作为茶类饮品在民间已有数百年的饮用历史，2013年被卫计委批准为新资源食品原料。近年来的研究表明，藤茶富含黄酮类功能活性成分，包括二氢杨梅素、杨梅素、杨梅苷等，其中二氢杨梅素在藤茶中的含量可高达30
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40％；它具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗老年痴呆症等多种生物活性。因此，开发藤茶中二氢杨梅素的提取方法具有很大的实用价值。
[0003]二氢杨梅素传统的提取方法主要有有机溶剂提取法、碱性提取法、酶提取法和水提取法，其中有机溶剂提取目前最常用，然而，有机溶剂有许多缺点，如不环保、易燃、限制某些食品的使用等。因此，尝试新型绿色溶剂替代有机溶剂提取藤茶中二氢杨梅素的绿色方法是亟需解决的问题。
[0004]深度共熔溶剂(Deep Eutectic Solvents，DES)，于2001年首次提出，它将两种具有较高熔点的固体物质混合加热一段时间，合成了均匀的混合溶液，且发现其物理状态由固态变成液体，混合物的熔点远低于合成所用的两种固体组成物。它作为一种新型溶剂还具有低毒性、不易挥发的显著优点。中国专利申请号201610209945.3的专利技术专利中，公开了一种利用氢键受体为季铵盐的深度共熔溶剂提取花青素的方法，季铵盐与氢供体的摩尔比为1:5。中国专利申请号202010351893.X的专利技术专利中，公开了一种深度共熔溶剂提取辣木总黄酮的方法，氢键受体为氯化胆碱，供体为丙三醇、尿素、乳酸。虽然深度共熔溶剂运用于天然活性物质的提取有诸多报道，但是针对藤茶中含量丰富的二氢杨梅素的提取制备目前还没有报道。
[0005]此外，大孔吸附树脂是常用于与天然产物分离的材料，具有吸附选择好、成本低、操作简便等多方面优点。中国专利申请号CN201811393143.8的专利技术专利中，公开了一种从藤茶水提液中使用大孔树脂进行吸附分离二氢杨梅素的方法。中国专利申请号CN200710026288.X中，公开了一种从枳椇子中提取二氢杨梅素的方法。因而大孔树脂应用于DES提取后二氢杨梅素的富集与DES的回收具有可行性。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种应用DES和大孔树脂从藤茶中提取高纯度二氢杨梅素的方法的技术方案。该方法首先通过优选的深度共熔溶剂与提取条件优化，高效获得二氢杨梅素；然后采用大孔树脂进行吸附分离，从二氢杨梅素提取物中分离获得高纯度的二氢杨梅素。该方法充分发挥了DES和大孔树脂的特点，能够有效获得二氢杨梅素。
[0007]本专利技术具体通过以下技术方案实现：
[0008]所述的一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，其特征在于包括以下步骤：
[0009]1)制备DES：将氢键受体与氢键供体共熔，得到DES，静置过夜；
[0010]2)DES提取：取步骤1)得到的DES与水配成提取溶剂，再将藤茶粉末与提取溶剂混合均匀，震荡提取，得到二氢杨梅素的提取液；
[0011]3)大孔树脂吸附分离：取步骤2)得到的二氢杨梅素的提取液，上样于大孔树脂，依次用蒸馏水、80％的乙醇、95％乙醇洗脱，收集获得80％乙醇洗脱液A，浓缩洗脱液A获得浓缩物B，即为二氢杨梅素单体成分。
[0012]进一步，所述步骤1)中所述氢键受体为四丁基溴化铵；所述氢键供体为丙酮酸；所述四丁基溴化铵与丙酮酸的摩尔比为1:2。
[0013]进一步，所述步骤1)中共熔处理条件为：80℃摇床中200rpm震荡3
‑
4小时。
[0014]进一步，所述步骤2)中DES与水配成体积浓度为60％
‑
80％的提取溶剂。
[0015]进一步，所述步骤2)中藤茶粉末的粒径小于1mm，藤茶粉末的含水率为10％～12％。
[0016]进一步，所述步骤2)中藤茶粉末与提取溶剂按料液比为10
‑
40g/mL。
[0017]进一步，所述步骤2)中震荡提取条件为：35
‑
55℃，转速150
‑
230rpm的摇床中震荡2
‑
3h。
[0018]进一步，所述步骤3)中大孔吸附树脂型号为AB
‑
8、DM301或XAD
‑
7HP。
[0019]进一步，所述步骤3)中大孔树脂吸附分离条件为：固液比为1
‑
2g/mL，初始上样浓度25
‑
100μg/mL，吸附温度为20
‑
30℃。
[0020]本专利技术能够简便、高效地从藤茶中获得二氢杨梅素化合物，提取的二氢杨梅素得率高，比传统有机溶剂提取率高10
‑
20％。本专利技术提供的提取方法，利用的DES是由两种或者几种廉价且安全的化合物通过彼此之间氢键作用相互结合形成的混合盐溶液。DES极性较大，物理化学性质接近于离子液体，但比离子液体更便宜、更安全、更容易制备，提取程序简单、提取效率高、分析时间短。相比传统有机溶剂，DES有着原料价格低廉、具有良好的生物相容性、不易挥发、过程操作简单、提取过程无副产物产生的优点，充分体现了绿色化学的特点。其次，本专利技术中所采用的大孔树脂可以反复利用至少6次以上，且操作过程简便，适用于小规模或工业化的应用，具有较好的应用前景。
附图说明
[0021]图1为藤茶二氢杨梅素对照品的HPLC谱图；
[0022]图2为深度共熔溶剂(DES)提取藤茶样品HPLC图；
[0023]图3为深度共熔溶剂(DES)含水率(a)、液料比(b)、提取温度(c)和提取时间(d)对藤茶二氢杨梅素提取得率的影响；
[0024]图4为响应面优化交互作用对藤茶中二氢杨梅素提取效率的影响；
[0025]图5为不同大孔树脂吸附二氢杨梅素回收率；
[0026]图6为考察DM301大孔树脂在料液比(a)、上样品初始浓度(b)、吸附温度(c)对二氢杨梅素的吸附率的影响；
[0027]图7为实施例3中DM301大孔树脂回收DES提取样品HPLC图。
具体实施方式
[0028]以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术。
[0029]本实施例所采用分析藤茶提取液中二氢杨梅素的HPLC条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶(C18)色谱柱(岛津WondaCract ODS
‑
2 4.6mm
×
250mm,5μm)为填充剂，以甲醇
‑
0.1％甲酸(30：70)为流动相；检测波长为292nm。流速1.0mL/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，其特征在于包括以下步骤：1）制备DES：将氢键受体与氢键供体共熔，得到DES，静置过夜；2）DES提取：取步骤1）得到的DES与水配成提取溶剂，再将藤茶粉末与提取溶剂混合均匀，震荡提取，得到二氢杨梅素的提取液；3）大孔树脂吸附分离：取步骤2）得到的二氢杨梅素的提取液，上样于大孔树脂，依次用蒸馏水、80%的乙醇、95%乙醇洗脱，收集获得80%乙醇洗脱液A，浓缩洗脱液A获得浓缩物B，即为二氢杨梅素单体成分。2.如权利要求1所述的一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，其特征在于所述步骤1）中所述氢键受体为四丁基溴化铵；所述氢键供体为丙酮酸；所述四丁基溴化铵与丙酮酸的摩尔比为1:2。3.如权利要求1所述的一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，其特征在于所述步骤1）中共熔处理条件为：80℃摇床中200rpm震荡3
‑
4小时。4.如权利要求1所述的一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法，其特征在于所述步骤2）中DES与水配成体积浓度为60%
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80%的提取溶剂。5.如权利要求1所述的一种从藤茶中提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽玲，黄旭波，秦玉川，王衍彬，方茹，童晓青，
申请(专利权)人：浙江省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：