表达PMT蛋白的培养基及培养方法技术

本发明专利技术涉及生物发酵领域，特别涉及表达PMT蛋白的培养基及培养方法。在使用LB培养基培养时，由于其营养物质匮乏，既不利于菌体生长也不利于目的蛋白的合成，每升发酵液中菌体含量仅为5g左右，每克菌体只能表达3.4～4.5mg目的蛋白，最终每升发酵液的目的蛋白含量仅为20～30mg/L，而使用本发明专利技术的培养基配方培养，由于其含有丰富的营养物质，且含有充足的金属离子维持菌体的渗透压，能够明显促进细菌的菌体生长和目的蛋白的合成，每升发酵液中含有70g左右菌体，每g菌体表达蛋白4～5mg/L，每升发酵液的目的蛋白含量能够达到200mg/L以上。发酵液的目的蛋白含量能够达到200mg/L以上。

【技术实现步骤摘要】
表达PMT蛋白的培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及生物发酵领域，特别涉及表达PMT蛋白的培养基及培养方法。

技术介绍

[0002]猪传染性萎缩性鼻炎是一种由支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀巴氏杆菌引起的猪呼吸道慢性传染病。该病主要引起猪只鼻炎、鼻甲骨萎缩等病理反应，同时可导致机体代谢障碍，严重影响猪只的生长速度，降低饲料转化率，随着规模化猪场的比率增大，猪场集约化程度的不断提高，该病对我国的养猪业的危害也日趋严重。疫苗的免疫接种是预防有效的方法，目前研究的疫苗包括全菌灭活苗、二联灭活苗、弱毒的疫苗和类毒素疫苗等，试验表明PMT类毒素疫苗的免疫效果最佳。而PMT亚单位疫苗由于产量较低，工艺复杂导致其成本较高。
[0003]以大肠杆菌为载体表达PMT毒素时，常使用LB培养基或TB培养基等培养基进行细菌培养，待细菌在培养基中积累一定生物量之后，加入诱导剂进行诱导，在适宜的时机收获菌液后进行下一步处理。
[0004]但是存在如下问题：
[0005]第一，使用LB培养基或TB培养基培养菌体，其营养成分和金属离子相对匮乏，难本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.发酵培养基，其特征在于，包括10～15g/L蔗糖，20～25g/L多价蛋白胨，20～25g/L酵母粉，5～10g/L KH2PO4，4～8g/L MgSO4。2.如权利要求1所述的发酵培养基，其特征在于，还包括消泡剂。3.如权利要求2所述的发酵培养基，其特征在于，所述消泡剂的体积百分含量为0.02％
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0.03％。4.培养基组合，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的发酵培养基以及种子培养基。5.如权利要求4所述的培养基组合，其特征在于，所述种子培养基包括甘油5g/L，胰蛋白胨12g/L，酵母浸粉24g/L，KH2PO
4 2.31g/L，K2HPO416.43g/L，pH调至7.5。6.如权利要求1至3任一项所述的发酵培养基、如权利要求4或5所述的培养基组合在发酵生产PMT蛋白或PMT类毒素疫苗中的应用。7.提高菌种表达PMT蛋白的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：挑取菌种接种于种子培养基，进行种子培养；步骤2：取步骤1制得的种子液接种于发酵培养基，进行发酵培养，收集培养液；所述种子培养基包括甘油5g/L，胰蛋白胨12g/L，酵母浸粉24g/L，KH2PO42.31g/L，K2HPO
4 16.43g/L，pH调至7.5；所述发酵培养基包括10～15g/L蔗糖，20～25g/L多价蛋白胨，20～25g/L酵母粉，5～10g/L KH2PO4，4～8g/L MgSO4。8.如权利要求7所述的培养方法，其特征在于，所述发酵培养包括如下步骤：步骤A：取所述种子液，接种于所述发酵培养基，pH7.0培养，通过20～200L/Min，转速100～800RPM维持溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：李国强，孙韫博，李海超，
申请(专利权)人：河南兴华生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：