一种高产5-甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高产5

【技术实现步骤摘要】
一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]叶酸作为人体生长过程中必要的维生素，市场应用前景广阔，目前市场上叶酸主要以化学合成为主，但人工合成的叶酸和天然叶酸在人体中的代谢途径不同，具有一定的副作用，因而人工合成的叶酸产品的反作用不容忽视，而微生物发酵产生的叶酸安全性高，在吸收前已经被还原和甲基化，在一个很宽的安全摄入范围不会有副作用，并且具有更高的生物利用率，因此利用微生物合成叶酸倍受研究领域的关注，研究较多的菌种主要有酵母菌，乳酸菌，嗜热链球菌。
[0003]5‑
甲基四氢叶酸是叶酸在体内发挥作用的惟一活性形式，叶酸在人类饮食中无处不在，叶酸缺乏的问题仍然影响着全球数十亿人，叶酸作为食品添加剂已经成为必需品，成人建议摄取叶酸400微克/天，因此导致叶酸的市场需求不断增长。目前5
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MTHF生产主要以工业合成为主，但是存在拆分工艺复杂，难以纯化等问题。而且其前体物质叶酸也是通过工业化学合成生产，会对环境造成污染。
[0004]解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是一种被广泛用动物养殖饲料生产中的有益菌，但目前未见其应用于产生5
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甲基四氢叶酸的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌及其应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌，所述解淀粉芽孢杆菌命名为：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BOEN
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305，已于2021年11月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.62024。
[0007]作为本专利技术所述的高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌的优选实施方式，所述解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]作为本专利技术所述的高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌的优选实施方式，所述解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305分离自蔬菜种植基地土壤。
[0009]本专利技术还提供所述的高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌在制备含5
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甲基四氢叶酸的产品中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种解淀粉芽孢杆菌发酵液，由上述高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌经液体发酵制备得到。
[0011]本专利技术还提供所述解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法，包括以下步骤：
[0012](1)种子液制备：将解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305接种到种子培养基中，于30℃～40℃
培养14～20h，得到种子液；
[0013](2)发酵液制备：将步骤(1)的种子液接种到液体发酵培养基中，接种量为1％～7％，培养温度30℃～40℃，风量0.5～1.0vvm，搅拌速度150～300r/min，发酵时间24～48h，得所述解淀粉芽孢杆菌发酵液。
[0014]作为本专利技术所述解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法的优选实施方式，所述种子培养基包括：蛋白胨3～10g/L，酵母膏0.2～1.5g/L，葡萄糖8～25g/L，硫酸镁0.05～0.5g/L，硫酸铁0.05～0.15g/L。
[0015]作为本专利技术所述解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法的优选实施方式，所述液体发酵培养基包括：糖蜜12～25g/L，酵母粉5～18g/L，氯化钙1.2～3.5g/L，无水硫酸镁0.1～1g/L，硫酸锰0.01～0.5g/L，氯化钠2～5g/L，磷酸氢二钠0.1～5g/L，磷酸二氢钾0.01～0.5g/L，维生素C 0.05～0.2g/L。
[0016]作为本专利技术所述解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法的优选实施方式，所述种子培养基和液体发酵培养基均采用蒸馏水配制而成；所述种子培养基的pH为7.0～7.5；所述液体发酵培养基的pH为7.2～7.5。
[0017]本专利技术还提供所述的解淀粉芽孢杆菌发酵液或所述的解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法制备的解淀粉芽孢杆菌发酵液在制备含5
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甲基四氢叶酸的产品中的应用。
[0018]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BOEN
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305能够产生5
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甲基四氢叶酸，由于本专利技术的菌株来源于蔬菜种植基地土壤中，属于天然菌种，所分泌的5
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甲基四氢叶酸是天然合成，不会有任何副作用产生，安全性高；且该解淀粉芽孢杆菌具有较好的遗传稳定性、抗逆性很强，能够抵抗生产运输过程中的损伤，具有重要工业利用价值。本专利技术还提供由该解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305液体发酵产生的解淀粉芽孢杆菌发酵液，与其他天然菌株相比，该解淀粉芽孢杆菌发酵液的5
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甲基四氢叶酸的含量更高；而且该解淀粉芽孢杆菌发酵液发酵操作简单，易于工业化生产。
附图说明
[0019]图1为解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的菌落形态。
[0020]图2为解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的革兰氏染色图。
具体实施方式
[0021]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
[0022]实施例1解淀粉芽孢杆菌的保藏信息
[0023]本专利技术提供了一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌，将该解淀粉芽孢杆菌命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BOEN
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305，该解淀粉芽孢杆菌于2021年11月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.62024。
[0024]实施例2解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的获取及菌种鉴定
[0025]1、解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的获取：从江西省九江市蔬菜种植基地采集土壤样品。称取5g土壤样品于灭菌离心管中，加入5倍体积无菌水，过滤取滤液，取滤液接种于LB平板培养基，于37℃培养。挑取生长良好的细菌，接种于LB平板培养基。挑取菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BOEN
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305，已于2021年11月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.62024。2.根据权利要求1所述高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305的序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌BOEN
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305分离自蔬菜种植基地土壤。4.根据权利要求1～3任一项所述的高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌在制备含5
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甲基四氢叶酸的产品中的应用。5.一种解淀粉芽孢杆菌发酵液，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌发酵液由权利要求1～3任一项所述高产5
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甲基四氢叶酸的解淀粉芽孢杆菌经液体发酵制备得到。6.根据权利要求5所述的解淀粉芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)种子液制备：将解淀粉芽孢杆菌BOEN<...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄明媛，倪冬姣，邹新华，许赣荣，宋敏，李红胜，邢宏博，宋汉良，赵骏，杨杏萍，
申请(专利权)人：佛山播恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：