一种烟草的HPLC-GC融合指纹图谱检测方法技术

本发明专利技术提供一种烟草的HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法


[0001]本专利技术属于烟草中成分分析的
，涉及一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，具体涉及一种烟草的衍生化
‑
气相色谱(GC)与高效液相色谱(HPLC)相结合的指纹图谱检测方法。

技术介绍

[0002]烟叶质量的准确、快速评价，是各种烟叶资源得以科学、高效、综合利用的前提。传统烟草质量评价方法为感官评吸，易受各种因素影响，评吸结果稳定性不高。烟叶质量是由诸多要素构成，简单选取某一个或某几个烟叶化学成分进行检测，较难评价成分选取是否适当。指纹图谱能从整体上把握样品的特性，具有模糊性，不侧重某一具体成分定性与定量，为烟草质量的数字化评价提供了新途径。迄今，气相色谱质谱联用(GC
‑
MS)是建立烟草及其制品的指纹图谱的主要研究手段，结合相似度计算能较好地鉴别卷烟质量及真假。但GC
‑
MS指纹图谱方法的前处理较为复杂，限制了指纹图谱技术的应用。GC及HPLC检测技术也是烟草及烟草制品指纹图检测的常见手段，且取得了较好效果。但两种检测方法所采用的前处理操作差别较大，无法满足同一个样品同时通过GC及HPLC进行检测，由于前处理过程中可能存在的操作误差及样品差异，因此也不适于将两种检测结果直接融合形成一种HPLC
‑
UV/GC
‑
FID指纹图谱。

技术实现思路

[0003]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，实现了同一个样品的HPLC
‑
DAD及GC
‑
FID同时检测，获得烟叶的融合指纹图谱。
[0004]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术第一方面提供一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，包括：将烟草样品加入含有内标的萃取液进行振荡萃取，获得的第一待测溶液再加入衍生液混合后进行衍生反应，获得第二待测溶液，采用高效液相色谱法测定第一待测溶液后获得第一色谱图，采用气相色谱法测定第二待测溶液后获得第二色谱图，再将第一色谱图与第二色谱图进行剪裁、合并后获得融合指纹图谱。
[0005]优选地，所述烟叶样品为经烘干、磨粉、过筛后获得的烟叶粉末样品。
[0006]更优选地，所述烘干温度为35
‑
45℃，优选为40℃。
[0007]更优选地，所述烘干时间为3.5
‑
4.5h，优选为4h。
[0008]所述磨粉为研磨成粉末。
[0009]更优选地，所述过筛的筛网的网孔孔径≥80目。
[0010]优选地，所述含有内标的萃取液为含有内标的N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)溶液。
[0011]更优选地，所述N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)加入体积mL与烟叶样品加入质量g之比为4.5
‑
5.5:0.5。
[0012]更优选地，所述内标为磷酸三苯酯(TPP)。
[0013]更优选地，所述内标加入质量g与N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)加入体积mL之比为1：4.5
‑
5.5。
[0014]优选地，所述振荡萃取为涡旋振荡，所述涡旋振荡的时间为25
‑
35min，优选为30min。
[0015]优选地，所述振荡萃取的转速为2000
‑
2500r/min。
[0016]优选地，所述振荡萃取后要室温静置过夜、过滤。
[0017]更优选地，所述过滤为滤膜过滤，所述滤膜为0.22
‑
0.45μm有机相滤膜，优选为0.22μm有机相滤膜。
[0018]优选地，所述第一待测溶液与衍生液的体积之比为1:0.95
‑
1.05，优选为1:1。
[0019]优选地，所述衍生液为含三甲基氯硅烷(TMCS)的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)与N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)的混合液。
[0020]更优选地，所述含三甲基氯硅烷(TMCS)的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)中，双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与三甲基氯硅烷的体积之比为99.5
‑
98:0.5
‑
2，优选为99:1。
[0021]更优选地，所述含三甲基氯硅烷(TMCS)的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)与N,N
‑
二甲基甲酰胺(DMF)的体积之比为1:0.95
‑
1.05，优选为1:1。
[0022]优选地，所述混合为振荡混合，所述混合时间为1
‑
2min。
[0023]优选地，所述衍生反应的反应温度为70
‑
80℃，优选为75℃。
[0024]优选地，所述衍生反应的反应时间为25
‑
35min，优选为30min。
[0025]优选地，所述高效液相色谱法中的色谱柱为C
18
色谱柱，优选为ZORBAX Eclipse XDB
‑
C
18
色谱柱(柱长150mm
×
内径4.6mm，粒径5μm)。
[0026]优选地，所述高效液相色谱法中的检测器为二极管阵列检测器(DAD)。
[0027]优选地，所述高效液相色谱法中的检测带宽为1.5
‑
2.5nm，优选为2nm。
[0028]优选地，所述高效液相色谱法中的检测信号采集速率为9
‑
11Hz/0.025min，优选为10Hz/0.025min。
[0029]优选地，所述高效液相色谱法中的检测波长为：0
‑
1.6min，检测波长为262nm；1.6
‑
8.3min，检测波长为340nm；8.3
‑
9.0min，检测波长为440nm；9.0
‑
10.5min，检测波长为262nm；10.5
‑
15min，检测波长为440nm。
[0030]优选地，所述高效液相色谱法中的柱温为25
‑
35℃，优选为30℃。
[0031]优选地，所述高效液相色谱法中的进样量为0.1
‑
2μL，优选为1.0μL。
[0032]优选地，所述高效液相色谱法中的流速为1.0
‑
1.5mL/min，优选为1.2mL/min。
[0033]优选地，所述高效液相色谱法中，流动相为0.05
‑
0.2％甲酸水溶液
‑
甲醇，其中，A相为0.05
‑
0.2％甲酸水溶液，B相为甲醇；分析时间为15min；梯度洗脱。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，包括：将烟草样品加入含有内标的萃取液进行振荡萃取，获得的第一待测溶液再加入衍生液混合后进行衍生反应，获得第二待测溶液，采用高效液相色谱法测定第一待测溶液后获得第一色谱图，采用气相色谱法测定第二待测溶液后获得第二色谱图，再将第一色谱图与第二色谱图进行剪裁、合并后获得融合指纹图谱。2.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述含有内标的萃取液为含有内标的N,N
‑
二甲基甲酰胺溶液，所述内标为磷酸三苯酯。3.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述衍生液为含三甲基氯硅烷的双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺与N,N
‑
二甲基甲酰胺的混合液。4.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述衍生反应的反应温度为70
‑
80℃；所述衍生反应的反应时间为25
‑
35min。5.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，色谱柱为C
18
色谱柱；检测器为二极管阵列检测器；流动相为0.05
‑
0.2％甲酸水溶液
‑
甲醇，其中，A相为0.05
‑
0.2％甲酸水溶液，B相为甲醇；分析时间为15min；梯度洗脱；检测波长为：0
‑
1.6min，检测波长为262nm；1.6
‑
8.3min，检测波长为340nm；8.3
‑
9.0min，检测波长为440nm；9.0
‑
10.5min，检测波长为262nm；10.5
‑
15min，检测波长为440nm。6.根据权利要求6所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体程序为：0
‑
3.5min，A相：B相体积比为70：30
‑
60：40；3.5
‑
4.5min，A相：B相体积比为60：40
‑
60：40；4.5
‑
7.5min，A相：B相体积比为60：40
‑
0：100；7.5
‑
15min，A相：B相体积比为0：100
‑
0：100。7.根据权利要求1所述的一种烟草的HPLC
‑
GC融合指纹图谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中，检测带宽为1.5
‑
2.5nm；检...

【专利技术属性】
技术研发人员：戚大伟，周妍，王先颖，费婷，吴达，
申请(专利权)人：上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：