一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：鸡胆低温冷冻结块，切2

【技术实现步骤摘要】
一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法


[0001]本专利技术涉及一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，属于农副产品


技术介绍

[0002]禽胆作为禽肉加工副产物是传统中药材，功效显著，用药历史悠久。胆汁酸作为动物胆汁的主要活性成分，应用广泛，市场需求量大，以牛胆为主导来源成本较高且不易收集，禽胆已成为胆汁酸主要替代来源。在胆汁酸实际生产中通常使用皂化法将结合型水解成游离型进行提制，该方法虽然简单，但工艺需在高温高压条件下使用强碱进行长时间的反应且对环境不友好，另外在纯化工艺中使用大量易燃易爆试剂存在安全风险，这不能满足安全、节能、绿色环保发展要求。因此，急需一种安全、能耗低、环保的替换方法。生物学方法节能环保已成为研究热点和趋势。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是为了解决皂化法提取胆汁时产生的环境不友好的问题，提供了一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，效果明显，条件温和、节能环保，能够实现胆汁酸安全节能绿色生产。
[0004]本专利技术采用如下技术方案：一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：取鸡胆适量，低温冷冻结块，切2
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4mm厚片置于过滤网，室温解冻使胆汁自然流出，收集胆汁；（2）酶解：将胆汁灭酶处理，在胆汁中加入稀盐酸溶液调节胆汁pH至5
‑
6，然后向胆汁中加入胆盐水解酶和0.5
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1.5倍体积的有机溶剂，在30
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40℃水浴条件下搅拌直至pH不再变化则酶解完全；（3）静置回收：将酶解液置于分液漏斗中静置分层收集有机层，将有机层旋转蒸发浓缩干燥得到胆汁酸提取物。
[0005]进一步的，所述胆盐水解酶的酶活3000
‑
4000U/g。
[0006]进一步的，所述胆盐水解酶的制备方法：取适量两歧双岐杆菌加入纯水悬浮，经充分搅拌、离心、除去上清液后获得沉淀物菌泥，向菌泥中加入磷酸缓冲溶液进行混匀和悬浮，随后将盛有悬浮液的器皿放入冰浴中使用细胞超声破碎仪进行超声破碎10
‑
15min，离心获得粗酶液，超声破碎提取两次，合并粗酶液，冷冻干燥即得。
[0007]进一步的，所述有机溶剂为醋酸丁酯、乙酸乙酯或氯仿。
[0008]进一步的，所述步骤（2）中胆盐水解酶的添加量为0.4
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0.6 W/V%。
[0009]进一步的，所述步骤（2）中在水浴过程中每隔20
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30min测定一次pH值，若pH值升高且pH值大于6，则向反应溶液中滴加稀盐酸，调节pH值至6，直至pH值稳定不变则反应结束。
[0010]进一步的，所述灭酶温度为80
‑
100℃，灭酶时间为30
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60min。
[0011]本专利技术的有益效果：本专利技术制备方法简单，步骤易于操作，采用胆盐水解酶一锅法的方法进行提取，采用有机试剂辅助提高了胆汁酸提取的效率以及产品的纯度，同时降低
了强酸强碱带来的环境污染问题，有利于后续市场推广。
附图说明
[0012]图1为鹅去氧胆酸的标准曲线图。
[0013]图2为本专利技术实施例二中提制的鸡胆汁酸高效液相色谱图。
具体实施方式
[0014]下面将结合具体实施例对本专利技术作进一步的解释和说明。
[0015]本实施例中的胆盐水解酶为自制酶。制备方法如下：取适量两歧双岐杆菌（购自西安雅图生物科技有限公司，200亿cfu/g）加入纯水悬浮，经充分搅拌、离心、除去上清液后获得沉淀物菌泥，向菌泥中加入0.01mol/L的磷酸缓冲溶液进行混匀和悬浮，随后将盛有悬浮液的器皿放入冰浴中使用细胞超声破碎仪进行超声破碎10
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15min，超声功率为650
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750W，离心获得粗酶液，超声破碎提取两次，合并粗酶液，冷冻干燥即得胆盐水解酶。
[0016]实施例1：一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：取鸡胆适量，低温冷冻结块，切2
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4mm厚片置于过滤网，室温解冻使胆汁自然流出，收集胆汁；（2）酶解：将胆汁灭酶处理，取250mL胆汁，在胆汁中加入稀盐酸溶液调节胆汁pH至5，然后向胆汁中同时添加胆盐水解酶，胆盐水解酶的添加量为0.4W/V%和氯仿，在30℃水浴条件下搅拌直至pH不再变化则酶解完全；（3）静置回收：将酶解液置于分液漏斗中静置分层收集有机层，取氯仿层，母液继续使用150ml氯仿萃取一次，合并氯仿层，依次使用200ml和100ml碱液萃取两次，在18℃酸沉pH2
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3抽滤得产物。
[0017]实施例2：一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：取鸡胆适量，低温冷冻结块，切2
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4mm厚片置于过滤网，室温解冻使胆汁自然流出，收集胆汁，（2）酶解：取鸡胆汁250毫升，加少量盐酸调节pH5.4，加胆盐水解酶1.5g和丁酯150ml，于水浴37℃条件下搅拌5小时至酶反应完全，（3）静置回收：将酶解液调pH值至5后于55℃静置分层，取丁酯层，母液继续使用150ml丁酯萃取一次，合并丁酯层，依次使用200ml和100ml碱液萃取两次，在18℃酸沉pH2
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3抽滤得产物；实施例3：一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：取鸡胆适量，低温冷冻结块，切2
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4mm厚片置于过滤网，室温解冻使胆汁自然流出，收集胆汁；（2）酶解：将胆汁灭酶处理，取250mL胆汁，在胆汁中加入稀盐酸溶液调节胆汁pH至6，然后向胆汁中同时添加胆盐水解酶，胆盐水解酶的添加量为0.6 W/V%和乙酸乙酯，在40℃水浴条件下搅拌直至pH不再变化则酶解完全；（3）静置回收：将酶解液置于分液漏斗中静置分层收集有机层，取乙酸乙酯层，母液继续用乙酸乙酯萃取一次，合并，依次使用200ml和100ml碱液萃取两次旋转蒸发浓缩干燥得到胆汁酸提取物。
[0018]对比例一:皂化法如实施例1
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3所示的方法处理得到鸡胆汁，取20ml鸡胆汁加入耐压管，每管中各加入2gNaOH加转子于110℃油浴中加热皂化，连续皂化22小时，冰浴冷却终止反应，分别调pH至2
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3后进行沉淀，离心水洗后进行真空干燥，即得。
[0019]对比例二：酶解如实施例1
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3所示的方法处理得到鸡胆汁，取鸡胆汁250毫升，加少量盐酸调节pH5.4，加胆盐水解酶1.5g，搅拌5小时至酶反应完全,将酶解液使用150ml丁酯萃取两次，合并萃取液，依次使用200ml和100ml碱液萃取两次，在18℃下酸沉（pH2
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3）抽滤得产物；胆汁酸样品的检测方法：鹅去氧胆酸标准品溶液制备：取对照品10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加人流动相溶液约 8ml，超声处理30分钟，放冷，用流动相溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0020]供试本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）鸡胆汁的提取：取鸡胆适量，低温冷冻结块，切2
‑
4mm厚片置于过滤网，室温解冻使胆汁自然流出，收集胆汁；（2）酶解：将胆汁灭酶处理，在胆汁中加入稀盐酸溶液调节胆汁pH至5
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6，然后向胆汁中加入胆盐水解酶和0.5
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1.5倍体积的有机溶剂，在30
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40℃水浴条件下搅拌直至pH不再变化则酶解完全；（3）静置回收：将酶解液置于分液漏斗中静置分层收集有机层，将有机层旋转蒸发浓缩干燥得到胆汁酸提取物。2.如权利要求1所述的一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，其特征在于：所述胆盐水解酶的酶活3000
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4000U/g。3.如权利要求1所述的一锅法酶解提取鸡胆汁酸的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的胆盐水解酶的制备方法：取适量两歧双岐杆菌加入纯水悬浮，经充分搅拌、离心、除去上清液后获得沉淀物菌泥，向菌泥中加入磷酸缓冲...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨彪，王道营，邹烨，徐为民，马晶晶，杨静，李鹏鹏，张新笑，卢方云，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：