【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及菌菇培养，具体为一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的配方及检测方法。
技术介绍
1、草菇(volvariella volvacea)又名兰花菇、麻菇、华南菇，味道鲜美、肉质脆嫩，营养价值高且含有多种生物活性物质，如抗肿瘤多糖、免疫抑制蛋白和免疫调节凝集素等，有抗氧化、抗肿瘤、保肝护肝和免疫调节等功效，深受国内外消费者的喜爱。草菇虽然具有诸多优点，但草菇生物学转化效率低是生产上公认的难题，严重制约了草菇产业的发展。因此，探索新的、更为有效的增产对策势在必行。有益的外源添加物类主要包括多种类型的有机物，经过大量实验论证已成功应用多种食用菌品种，都达到了不同程度的增产。外源添加物的作用贯穿食用菌的整个生长过程，外源添加物的种类、添加量、添加的方式、添加的时机都会对食用菌的生长以及生长过程中的生理指标产生不同的影响，从而最终影响食用菌子实体的产量和品质。
2、吲哚乙酸(iaa)是最早发现促进植物生长的激素，对植物生长发育起重要的作用，报道iaa诱导多种植物叶原基分化、侧根原基、花原基等有重要的作用，也对植物细胞分裂、细胞生长分化、侧根形成等有调控作用。细菌和真菌在内的微生物也可以产生iaa，假单孢菌、伯茨绿僵菌、固氮螺菌和蓝藻细菌能分泌iaa激活了调控iaa合成途径相关基因的表达，参与iaa的生物合成途径。在食用菌栽培上，很早就有应用包括iaa在内的植物生长调节剂，但多以施用浓度和对栽培现象进行总结，对其机理的研究尚不明确。如在双孢蘑菇、金针菇，香菇、白灵菇、凤尾菇、草菇、松乳菇上应用，推测iaa可能诱导细
技术实现思路
1、本专利技术目的在于提供一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的配方及检测方法，通过复配发酵可有效提高菌株生物量，且生物量是关系到草菇产量的一个关键因素。同时也发现与草菇菌株质量相关的生长素(iaa)含量也极显著的增加，为延缓草菇菌种退化、快速复壮草菇菌株及提高草菇菌种的活力、长势、生物量等有关菌种质量的提高提供理论基础，通过该方法也可以作为草菇液体菌种的种子液的配方，为草菇的液体菌种工业化发酵提供科学依据，在产业生产中具有重要的理论意义和应用价值。
2、为达成上述目的，本专利技术提出如下技术方案：
3、一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉6-7g/l，甘露醇11-12g/l，麸皮浸出液69-70％。
4、进一步的，在本专利技术中，所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/l，甘露醇12g/l，麸皮浸出液69.357％。
5、进一步的，在本专利技术中，所述复配配方包括pdb培养基、醋酸锰、酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/l，甘露醇12g/l，麸皮浸出液69.357％。
6、一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，包括如下过程：
7、测定菌丝生长速度；
8、测定发酵生物量；
9、测定菌球数量及直径；
10、测定ph值；
11、测定dna含量；
12、测定iaa含量，其中采用hplc法测定iaa含量的过程如下；
13、标曲溶液配置：取甲醇溶液996μl加入1.5ml离心管，加入500μg/ml每种激素标准品储备液各2μl，震荡均匀，配置为终浓度1μg/ml的使用母液以备后续使用；
14、取甲醇溶液998μl加入1.5ml离心管，加入500μg/ml iaa内标标准品储备液各2μl，震荡均匀，配置为终浓度1μg/ml的内标使用母液以备后续使用；
15、取甲醇溶液配置为终浓度0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、200ng/ml的标准曲线，并每个点含有20ng/ml内标的标曲溶液；
16、流动相配置，有机相：取色谱纯甲醇900ml加入1l容量瓶，加入1ml甲酸，以甲醇定容至1l，颠倒混匀，无机相：取超纯水900ml加入1l容量瓶，加入1ml甲酸，以超纯定容至1l，颠倒混匀；
17、提取步骤，将草菇菌丝样品于液氮中研磨至粉碎，准确称量样品于试管中并加入10ml乙腈溶液，并加入8μl内标母液；4℃提取过夜，4℃，12000g离心5min，取上清；沉淀再次加入5ml乙腈溶液，提取两次，合并所得上清液，加入适量c18及gcb净化其中杂质，4℃，12000g离心5min，取上清；氮气吹干，以400μl甲醇复溶，过0.22μm有机相滤膜，放入-20℃冰箱待上机检测；
18、液相条件，色谱柱：poroshell 120sb-c18反相色谱柱(2.1×150,2.7um)；柱温：30℃；流动相：a:b＝(甲醇/0.1％甲酸):(水/0.1％甲酸)；进样体积：2μl；质谱参数，电离方式：esi正负离子模式分别监测；扫描类型：mrm；气帘气：15psi；喷雾电压：+4500v，-4000v；雾化气压力：65psi；辅助气压力：70psi；雾化温度：400℃。
19、进一步的，在本专利技术中，所述菌丝生长速度测定的步骤为：每24h采用十字交叉法进行平板菌落直径的测定，培养3d后进行拍照，并计算菌丝生长速度并记录菌丝长势及颜色和边缘整齐程度，菌丝生长速度(mm/d)＝菌落半径(mm)/生长天数(d)，并观察各配方的菌丝形态，测定菌丝颜色、生长势、边缘整齐程度，菌落生长势分为：菌丝长势浓密(+++)，中等(++)，稀疏(+)，菌落色泽分为：洁白、白色、浅白、灰白，边缘整齐程度评分标准为：整齐(+++)，中等(++)，不整齐(+)。
20、进一步的，在本专利技术中，所述发酵生物量测定的过程包括：
21、将发酵产物经8 000×g离心10min后，分离菌丝体和上清液，用蒸馏水将沉淀清洗3次后，收集菌丝体，置于烘箱烘干(65℃)至恒重，称重，每个处理3个重复。
22、进一步的，在本专利技术中，所述菌球数量及直径测定过程如下：
23、将发酵液混匀后，取10ml进行菌球数量的测定，并将10ml内的菌球排列在培养基内测量长度，并根据菌球数量计算菌球平均直径；
24、ph值测定的过程如下：
25、用ph计测定上述离心所得发酵液的ph值；
26、dna含量测定的过程如下：
27、收集发酵结束后的菌丝体，采用擎科生物的高效植物基因组dna提取试剂盒，进行dna的提取，并采用超微量分光光度计进行浓度的测定。
28、本专利技术所述的复配配方的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉6-7g/L，甘露醇11-12g/L，麸皮浸出液69-70％。
2.根据权利要求1所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/L，甘露醇12g/L，麸皮浸出液69.357％。
3.根据权利要求1所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括PDB培养基、醋酸锰、酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/L，甘露醇12g/L，麸皮浸出液69.357％。
4.权利要求1-3任一所述复配配方在快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量中的应用。
5.一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，其特征在于：包括如下过程：
6.根据权利要求5所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，其特征在于：所述菌丝生长速度测定的步骤为：每24h采用十字交叉法进行平板菌落直径的测定
7.根据权利要求5所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，其特征在于：所述发酵生物量测定的过程包括：
8.根据权利要求5所述的一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，其特征在于：所述菌球数量及直径测定过程如下：
9.权利要求1-3任一所述复配配方的筛选方法，其特征在于：包括如下过程：
10.根据权利要求9所述的复配配方的筛选方法，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉6-7g/l，甘露醇11-12g/l，麸皮浸出液69-70％。
2.根据权利要求1所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/l，甘露醇12g/l，麸皮浸出液69.357％。
3.根据权利要求1所述的快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的复配配方，其特征在于：所述复配配方包括pdb培养基、醋酸锰、酵母粉、甘露醇和麸皮浸出液，其中酵母粉7g/l，甘露醇12g/l，麸皮浸出液69.357％。
4.权利要求1-3任一所述复配配方在快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量中的应用。
5.一种快速复壮草菇退化菌种及提高菌种质量的主要成分含量检测方法，其特征在于：包括如下过程：
6.根据权利要求5所述的快速复壮草菇退化菌种及提高...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯立娟，卯明娟，马林，蒋宁，林金盛，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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