猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，属于病毒抗体检测技术领域。猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，包括CSFVE0蛋白抗原，CSFVE0蛋白抗原氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术基于猪群免疫猪瘟E2基因工程疫苗能产生针对CSFVE2抗体但不产生E0抗体的特点提供猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，通过对E0抗体的鉴定可为猪瘟净化提供技术支持。支持。支持。

【技术实现步骤摘要】
猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒


[0001]本专利技术属于病毒抗体检测
，具体涉及猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒。

技术介绍

[0002]猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一种严重威胁生猪产业发展的烈性传染病。E2基因工程疫苗已经上市且广泛应用于猪场，市售的猪瘟病毒抗体检测试剂盒主要通过检测CSFV E2抗体来评估猪场疫苗免疫效果，鲜有用于CSF野毒感染猪筛查的抗体试剂盒。而由于目前普遍使用兔化弱毒疫苗来防控猪瘟，因此无法通过血清学方法区分免疫猪和感染猪，给猪瘟净化带来很大困难。

技术实现思路

[0003]本专利技术基于猪群免疫猪瘟E2基因工程疫苗能产生针对CSFV E2抗体但不产生E0抗体的特点提供了猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，通过对E0抗体的鉴定可为猪瘟净化提供技术支持。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，包括CSFV E0蛋白抗原，CSFV E0蛋白抗原氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：KALLAWAVIAIMLYQPVEAENITQWNLSDNGTNGIQHAMYLRGVNRSLHGIWPGKICKGVPTHLATDVELKEIQGMMDASEGTNYTCCKLQRHEWNKHGWCNWHNIDPWIQLMSRTQADLAEGPPVKECAVTCRYDKDADINVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSFAGTVIESPCNFNVSVEDTLYGDHECGSLLQDAALYLVDGMTNTIENARQGAARVTSWLGRQLSTAGKRLEGRSKTWFGAYALSPYCNVTSKIGYIWYTNNCT。
[0006]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括酶标板和包被液；
[0007]CSFV E0蛋白抗原经包被液稀释，包被于酶标板上。
[0008]优选地，包被液为50mM pH7.5的Tris盐酸盐缓冲液；
[0009]CSFV E0蛋白抗原经包被液稀释为2μg/mL，包被于酶标板上。
[0010]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括封闭液；
[0011]封闭液为质量分数10％的脱脂奶粉或质量分数1％的明胶，用于CSFV E0蛋白抗原包被后封闭。
[0012]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括一抗稀释液；
[0013]一抗稀释液为质量分数1％的脱脂奶粉，按1:200稀释样品。
[0014]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括酶标二抗和二抗稀释液；
[0015]酶标二抗为HRP标记山羊抗猪二抗；
[0016]二抗稀释液为质量分数5％的脱脂奶粉，按1:10000稀释酶标二抗。
[0017]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括显色液和终止液。
[0018]优选地，上述猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，还包括阴性对照和阳性对照。
[0019]综上所述，本专利技术试剂盒可用于免疫猪瘟E2基因工程疫苗的猪场进行猪瘟E0抗体检测，通过血清学检测就可以实现疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别诊断，可操作性强，特异性好，重复性好，适于推广应用。
附图说明
[0020]图1所示为CSFV E0基因PCR结果；
[0021]其中，M：2000 DNA标准；1：阴性对照；2：CSFV E0基因；
[0022]图2所示为pET
‑
32a
‑
E0双酶切结果；
[0023]其中，M：5000DNA标准；1：pET
‑
32a
‑
E0；
[0024]图3所示为pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白诱导不同时间的SDS
‑
PAGE检测；
[0025]其中，M：蛋白MARKER；0
‑
5：诱导0、1、2、3、4、5h的重组菌；
[0026]图4所示为pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白可溶性的SDS
‑
PAGE分析；
[0027]其中，M：蛋白MARKER；1：pET
‑
32a空载体；2：可溶性上清；3：包涵体沉淀；
[0028]图5所示为pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白纯化的SDS
‑
PAGE分析；
[0029]其中，M：蛋白MARKER；1：pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白2：pET
‑
32a
‑
E0重组纯化蛋白；
[0030]图6所示为pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白的Western
‑
blotting分析(小鼠抗His标签抗体)；
[0031]其中，M：蛋白MARKER；1：pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白2：pET
‑
32a空载体蛋白；
[0032]图7所示为pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白的Western
‑
blotting分析(CSFV E0阳性猪血清)；
[0033]其中，M：蛋白MARKER；1：pET
‑
32a
‑
E0重组蛋白2：pET
‑
32a空载体蛋白；
[0034]图8所示为纯化重组蛋白标准曲线。
具体实施方式
[0035]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例中未公开的实验步骤按照试剂产品说明书进行。
[0036]实施例1 CSFV E0基因的原核表达
[0037]按照表1合成扩增CSFV E0基因的引物，其中上下游引物5
’
端分别加入保护性碱基和酶切位点(上游BamHⅠ，下游XhoⅠ)，下划线为BamHⅠ和XhoⅠ酶切识别位点。
[0038]表1
[0039][0040]选择与疫苗株HCLV(AF091507)和C
‑
ZJ
‑
2008(HM175885)同源性为82.5％
‑
82.6％
的2.1c毒株FJTB006(来源于福建)，以其cDNA作为模板进行PCR扩增，扩增E0基因片段本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括CSFV E0蛋白抗原，所述CSFV E0蛋白抗原氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：KALLAWAVIAIMLYQPVEAENITQWNLSDNGTNGIQHAMYLRGVNRSLHGIWPGKICKGVPTHLATDVELKEIQGMMDASEGTNYTCCKLQRHEWNKHGWCNWHNIDPWIQLMSRTQADLAEGPPVKECAVTCRYDKDADINVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSFAGTVIESPCNFNVSVEDTLYGDHECGSLLQDAALYLVDGMTNTIENARQGAARVTSWLGRQLSTAGKRLEGRSKTWFGAYALSPYCNVTSKIGYIWYTNNCT。2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括酶标板和包被液；所述CSFV E0蛋白抗原经包被液稀释，包被于酶标板上。3.根据权利要求2所述的猪瘟病毒E0蛋白抗体ELISA检测试剂盒，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴爱玲，林楚云，刘建奎，张鑫杰，杨小燕，薛少华，魏春华，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：