用于检测头颈部表皮样癌的唾液生物标志物制造技术

本发明专利技术涉及唾液或呼吸样本中属于拟普雷沃菌属、普雷沃菌属、弯曲菌属、罗氏菌属、卡氏菌属、卟啉单胞菌属、依赖杆菌属或其任何组合的细菌的水平或浓度用于诊断患者的癌或表皮样癌、尤其是头颈部表皮样癌或获取使得能够进行这种诊断的有用数据的体外用途。行这种诊断的有用数据的体外用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测头颈部表皮样癌的唾液生物标志物


[0001]本专利技术涉及唾液样本中的生物标志物或生物标志物的组合，其一方面有助于头颈部表皮样癌的诊断，另一方面预测对患有该疾病的对象的治疗的反应。

技术介绍

[0002]头颈部表皮样癌(Epidermoid Cancer of the Head and Neck)是一种起源于覆盖呼吸消化道粘膜的上皮的恶性肿瘤实体。其年发病率为700000名患者，在发病率较高的癌症中世界排名第六。2013年美国新检测出的53640例头颈部肿瘤(口腔、咽部和喉部)病例中，95％对应于头颈部表皮样癌。根据2010年GLOBOCAN报告，西班牙是整个欧洲大陆中头颈部表皮样癌发病率最高的国家之一，2002年确诊了11513例头颈部表皮样癌患者就证明了这一点。
[0003]近年来，使用唾液作为某些病状或疾病的诊断工具或演变随访在生物医学领域具有重要意义。使用唾液作为诊断或随访工具的主要优点在于它是一种非侵入性方法，易于收集、价格低廉、难以改变并且在非冷藏条件下稳定。
[0004]人类口腔微生物群(唾液微生物群也是其一部分)包括一组微生物和病原体，它们是口腔的组成部分。它的功能是保护口腔，并防止疾病的发展。最近，大规模测序技术的使用使研究健康和患病患者口腔微生物群的组成变化成为可能。迄今为止进行的一些研究表明，具有肿瘤特征的部位的物种多样性较低。目前，唾液微生物群组成的结果表明，唾液中的物种，如牙龈二氧化碳嗜纤维菌(Capnocytophaga gingivalis)、产黑色素普氏菌(Prevotelle melaninogenica)和缓症链球菌(Streptococcus Mitis)与头颈部表皮样癌相关。与健康组织相比，表皮样头颈部肿瘤部位与健康组织之间的生态失调显示出放线菌(Actinobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes phylo)的减少。然而，在属或种水平上对结果的分析并没有显示出相同的趋势。
[0005]头颈部表皮样癌经常在疾病晚期才被诊断出来，因此预后很差。目前，似乎矛盾的是，在现有的手段下，还没有用于早期检测此类肿瘤的有效的方案。事实上，在本专利技术中提出的作为具有预测和诊断特征的可能的生物标志物的属(罗氏菌属(Rothia)、普雷沃菌属(Prevotella)、拟普雷沃菌属(Alloprevotella)、弯曲菌属(Campylobacter)、卡氏菌属(Catonella)、卟啉单胞菌属(Porphylomona)和依赖杆菌属(Fretibacterium))中，罗氏菌属是迄今为止唯一一种已被用作具有用于口腔和口咽腔中癌检测的临床指征的口腔生物标志物的生物标志物[Lim Y,Fukuma N,Totsika M,Kenny L,Morrison M,Punyadeera C:The Performance of an Oral Microbiome Biomarker Panel in Predicting Oral Cavity and Oropharyngeal Cancers.Front Cell Infect My 2018,8]。
[0006]因此，我们明白仍然需要提供有用的程序和工具来早期检测头颈部表皮样癌。

技术实现思路

[0007]在本专利技术中，我们分析了使用唾液微生物群作为咽喉表皮样癌的生物标志物的诊
断和预后能力。为此，在“Bioithas”临床研究中心(阿利坎特)进行了一项采集了样本的临床研究。使用15.0软件进行统计分析，统计分析由一个描述部分和另一个推理部分组成(定性变量用“卡方(Chi square)”检验和定量变量用“学生T(Student's T)”检验)。斯皮尔曼的“S”相关性(Spearman's"S"correlation)用于非参数样本。最后，为了研究唾液微生物群值作为诊断和预后证据的有效性，使用ROC曲线计算最合适的截止点及其相应的灵敏度值和特异性值。
[0008]研究共包括40份唾液样本，对应20名患者和20名健康对照。在患者中，平均年龄为61.9岁(最小38岁，最大86岁)。其中大部分为男性(98.7％)，男女比例为19:1，所有患者在确诊时均处于疾病晚期(60.0％)。喉部位置最常受到影响(85％)。
[0009]本专利技术的附图描述了唾液微生物群的概况、案例和对照之间的比较以及涉及的主要细菌的ROC曲线下面积。图6至图13以及表3示出了每个属的不同的曲线下面积，这些属在本研究中的各组之间显示出统计学上的显著差异。根据这些信息，可以得出以下结论：
[0010]‑
对于唾液样本中拟普雷沃菌属、尤其是其灰色拟普雷沃菌(Alloprevotella rava)种和/或坦纳拟普雷沃菌(Alloprevotella tannerae)种的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；
[0011]‑
对于唾液样本中的普雷沃菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；
[0012]‑
对于唾液样本中的弯曲菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；
[0013]‑
对于唾液样本中的罗氏菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；
[0014]‑
对于唾液样本中的卡氏菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；
[0015]‑
对于唾液样本中的卟啉单胞菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的；以及
[0016]‑
对于唾液样本中存在依赖杆菌属的绝对值和百分比，在具有口腔和咽部表皮样癌的对象与健康对象之间是负相关的。
[0017]因此，可以得出结论，一方面，唾液微生物群作为预后和诊断标志物用于开发有助于早期诊断高危患者的头颈部表皮样癌的筛查项目具有很高的潜力，以及另一方面，它具有诊断和预测头颈部表皮样癌患者的演变和随访的潜力，能够补充已知的经典诊断/预后因素。
[0018]应注意，在本专利技术的上下文中，与一般人群相比，头颈部表皮样癌患者的唾液生物样本中的拟普雷沃菌属，尤其是其灰色拟普雷沃菌种和/或坦纳拟普雷沃菌种处于较低水平。此外，注意到以下序列SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 3是该属的代表性序列，因此可用于通过PCR程序或借助任何测序技术、特别是通过微阵列进行的分子诊断技术来鉴定此类样本中属于该属的细菌。
[0019]SEQ ID NO 1>d643812b99d154c919c0ce6b382a6d32
[0020]AGGAATATTGGTCAATGGACGGAAGTCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGCAGGATGACGGCCCTCTGGGTTGTAAACTGCTTTTAGTTGGGAATAAAAAAGAGGACGTGTCCTCTATTGT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.体外诊断疑似患有口腔、咽部和喉部表皮样癌的对象的方法，包括使用从所述对象获得的唾液或呼吸样本中的属于拟普雷沃菌属的细菌在这种样本中的浓度作为指标，其中如果属于拟普雷沃菌属的细菌在这种唾液或呼吸样本中的浓度显著低于从健康对象获得的唾液样本中的浓度或相对于参考值显著较低，则表明所述对象具有口腔、咽部和喉部表皮样癌。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述属于拟普雷沃菌属的细菌选自由灰色拟普雷沃菌种和/或坦纳拟普雷沃菌种组成的组。3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中，使用进一步的指标并且所述指标是属于普雷沃菌属的细菌在所述样本中的浓度，其中如果属于普雷沃菌属的细菌在这种唾液或呼吸样本中的浓度显著低于从健康对象获得的唾液或呼吸样本中的浓度或相对于参考值显著较低，则表明所述对象具有口腔、咽部和喉部表皮样癌。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，使用进一步的指标并且所述指标是属于弯曲菌属的细菌在所述样本中的水平或浓度，其中如果属于弯曲菌属的细菌在这种唾液或呼吸样本中的水平或浓度显著低于从健康对象获得的唾液或呼吸样本中的水平或浓度或相对于参考值显著较低，则表明所述对象具有口腔、咽部和喉部表皮样癌。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，使用进一步的指标并且所述指标是属于卡氏菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：拜纽研发有限公司，
类型：发明
国别省市：