使用颗粒增强凝集检测的夹心免疫测定试剂及其生产和使用方法技术

公开了用于半抗原的夹心免疫测定中的试剂以及含有所述试剂的试剂盒。还公开了在颗粒增强的凝集检测测定中利用这些免疫测定试剂以检测样品中的半抗原/药物的诊断免疫测定方法。法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用颗粒增强凝集检测的夹心免疫测定试剂及其生产和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用/通过引用并入声明本申请根据35 USC
ꢀ§ꢀ
119(e)要求2019年6月28日提交的美国临时申请号62/868,309的权益。上述专利申请的全部内容在此通过引用明确并入本文。
[0002]关于联邦资助的研究或开发的声明不适用。
[0003]背景身体依靠复杂的免疫应答系统来区分自身与非自身。有时，必须控制身体的免疫系统，以增强不足的应答或抑制过度的应答。例如，当将器官诸如肾脏、心脏、心
‑
肺、骨髓和肝脏移植于人体中时，身体经常会通过称为同种异体移植排斥的过程排斥移植的组织。
[0004]在治疗同种异体移植排斥中，经常用药物疗法以受控方式抑制免疫系统。免疫抑制剂药物是一种治疗性药物，其被小心地施用于移植受体，以帮助防止非自身组织的同种异体移植排斥。免疫抑制性药物包括(但不限于)：糖皮质激素、细胞抑制剂、抗体、作用于免疫亲和素的药物以及其他药物、诸如(但不限于)干扰素、阿片类INF结合蛋白、霉酚酸酯、FTY720等。一类特定的免疫抑制剂药物包括作用于免疫亲和素的那些药物。免疫亲和素是具有生理意义的高亲和力、特异性结合蛋白的一个实例。目前已知两种不同的免疫亲和素家族：亲环蛋白和亲巨蛋白(macrophilins)，其后者特异性结合例如(但不限于)他克莫司、西罗莫司或依维莫司。
[0005]在移植患者中预防器官排斥的两种最常施用的免疫抑制性药物是环孢菌素(CSA)和他克莫司(FK506)。另一种在美国和其他国家用作免疫抑制剂的药物是西罗莫司，也称为雷帕霉素。西罗莫司的衍生物也可用作免疫抑制剂；此类衍生物包括，例如(但不限于)依维莫司等。
[0006]他克莫司，也称为FK506，是一种环状的、聚
‑
N
‑
甲基化的十一肽，其具有免疫抑制性活性，且从细菌筑波链霉菌(Streptomyces tsukubaensis) No.9993的发酵产物中分离出来。FK506的结构显示于下式I中。
[0007]他克莫司经常与其他免疫抑制剂药物一起使用，通常用于通过抑制免疫系统来减少同种异体器官移植物中的移植排斥。他克莫司具有窄治疗窗口，且因此监测血药浓度对于最佳效力是至关重要的。对于他克莫司药物监测，采用单一抗体的竞争性免疫测定是商业可得的，并且已经描述了一种夹心免疫测定，其应当提供比竞争形式更高的分析灵敏度和特异性以及更宽的动态范围(Wei等人，Clinical Chemistry (2014) 60(4):621
‑
630；和美国专利号8,586,322)。
[0008]西罗莫司，也称为雷帕霉素，是一种由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的大环内酯类抗生素，并且已发现其在各种应用中药学上有用，特别是作为免疫抑制剂，例如用于治疗和预防器官移植排斥和自身免疫性疾病。西罗莫司(雷帕霉素)的结构显示于下式II中。
[0009]然而，西罗莫司在较高剂量下确实表现出副作用，并且其具有稍可变的生物利用度。因此，非常期望监测正在用雷帕霉素治疗的患者中雷帕霉素的血液水平，以便能够调节剂量以维持对于药理学活性足够的最低水平并避免任何过度的副作用风险。雷帕霉素测定近来已经描述于美国专利号6,635,745；8,039,599；和8,039,600。
[0010]依维莫司[40
‑
O
‑
(2
‑
羟乙基)
‑
雷帕霉素]，也称为SDZ
‑
RAD、RAD和CERTICAN
®ꢀ
(Novartis)，是由Novartis (Nashan, B., Transplantation Proceedings (2001) 33: 3215
‑
3230)开发以努力在西罗莫司之上进行改进的新型大环内酯类免疫抑制剂。与西罗莫司相比，依维莫司在有机溶剂中具有更大的稳定性和增强的溶解度，以及更有利的药代动力学与更少的副作用。依维莫司的结构显示于下式III中。
[0011]然而，对于依维莫司存在与他克莫司和西罗莫司类似的治疗药物监测(TDM)的需求。依维莫司的免疫测定公开于例如美国专利号7,223,553中。
[0012]如上文所述，与这些免疫抑制剂药物相关的副作用可以通过仔细控制患者中存在的药物水平来部分控制。需要对生物样品中的免疫抑制剂药物和相关药物的浓度进行治疗监测，以优化给药方案，以确保最大的免疫抑制和最小的毒性。尽管免疫抑制剂药物是高效的免疫抑制剂，但其使用必须谨慎管理，因为有效剂量范围经常窄，并且过大的剂量可导致严重的副作用。另一方面，过少剂量的免疫抑制剂可导致组织排斥。由于免疫抑制剂药物的分布和代谢在患者之间可存在很大差异，并且由于不良反应的宽范围和严重程度，准确监测药物水平至关重要。
[0013]小的半抗原药物/激素测定(诸如但不限于他克莫司测定)经常通过使用单一抗体的竞争性免疫测定法来测量。这种类型的测定法经常采用颗粒增强的凝集用于信号检测。然而，这些测定法具有缺点。首先，这些竞争性测定法通常具有低灵敏度，并且通常不如夹心测定法精确。其次，低特异性、与结构类似物的交叉反应性高于需要识别更多表位的夹心测定法。第三，在半抗原类似物存在的情况下，更难以除去反应混合物中的样品基质；出于该原因，在此类测定法中除去样品基质经常需要使用手动提取程序。
[0014]此外，已经报道了对小的半抗原的夹心测定法，其利用对半抗原特异性的两种抗体(参见美国专利号8,586,322)。然而，先前没有报道使用颗粒增强的凝集来制定半抗原的夹心测定。
[0015]因此，本领域需要克服现有技术的缺点和缺陷的针对分析物(诸如但不限于半抗原)的新的和改进的免疫测定法。本公开正是涉及此类免疫测定法以及其中使用的试剂和试剂盒。
[0016]详细描述在通过示例性语言和结果的方式详细解释本公开的至少一个实施方案之前，应理
embodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(an example)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特征包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限定性的。
[0024]在整个申请中，术语“约”用于指示值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方法的误差的固有变化，或研究受试者间存在的变化。例如，但不限于，当利用术语“约”时，指定值可以与列举值相差正负20%，或15%，或12%，或11%，或10%，或9%，或8%，或7%，或6%，或5%，或4%，或3%，或2%，或1%，因为此类变化适用于执行公开的方法并由本领域普通技术人员所理解。
[0025]如在本说明书和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.诊断免疫测定试剂，其包含：颗粒；附接至所述颗粒的第一抗体或其片段；和附接至所述颗粒的第二抗体或其片段；其中所述第一抗体或其片段特异性结合分析物的部分，其不同于所述第二抗体或其片段特异性结合的分析物的部分，由此半抗原与所述诊断免疫测定试剂的结合导致用于信号检测的颗粒增强的凝集。2.权利要求1的诊断免疫测定试剂，其中所述分析物是半抗原。3.权利要求2的诊断免疫测定试剂，其中所述半抗原选自他克莫司、依维莫司、西罗莫司和环孢菌素。4.权利要求1的诊断免疫测定试剂，其中所述颗粒是乳胶颗粒。5.权利要求1的诊断免疫测定试剂，其中所述第一和第二抗体或其片段各自选自：(a) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由包括甲氧基和羟基取代基的C29
‑
C34环和包括甲氧基取代基的C15组成的部分；(b) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由C10
‑
C14环的甲氧基和包括C22酮氧的C1
‑
C26环的C19
‑
C27组成的部分；(c) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C22处连接的免疫原性载体；(d) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C24处连接的免疫原性载体；(e) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C32处连接的免疫原性载体；(f) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C24和C32处连接的免疫原性载体；(g) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与西罗莫司在C32处连接的免疫原性载体；和(h) 针对包含与西罗莫司在C26处连接的免疫原性载体的免疫原和包含与西罗莫司在C32处连接的免疫原性载体的免疫原的混合物产生的单克隆抗体或其片段。6.颗粒聚集体，其包含：(A) 半抗原；(B) 与颗粒附接的第一抗体或其片段，其中所述第一抗体或其片段与所述半抗原的部分特异性结合；和(C) 第二抗体或其片段，其中所述第二抗体或其片段特异性结合所述半抗原的部分，其不同于所述第一抗体或其片段结合的半抗原的部分；且其中(B)和(C)与(A)的结合导致颗粒增强的凝集。7.权利要求6的颗粒聚集体，其中所述第二抗体或其片段不直接附接至颗粒。8.权利要求6的颗粒聚集体，其中所述第二抗体或其片段附接至颗粒。9.权利要求8的颗粒聚集体，其中所述第二抗体或其片段附接至(B)的颗粒。10.权利要求6的颗粒聚集体，其中所述半抗原选自他克莫司、依维莫司、西罗莫司和环
孢菌素。11.权利要求6的颗粒聚集体，其中所述颗粒是乳胶颗粒。12.权利要求6的颗粒聚集体，其中所述第一和第二抗体或其片段各自选自：(a) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由包括甲氧基和羟基取代基的C29
‑
C34环和包括甲氧基取代基的C15组成的部分；(b) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由C10
‑
C14环的甲氧基和包括C22酮氧的C1
‑
C26环的C19
‑
C27组成的部分；(c) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C22处连接的免疫原性载体；(d) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C24处连接的免疫原性载体；(e) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C32处连接的免疫原性载体；(f) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与他克莫司在C24和C32处连接的免疫原性载体；(g) 针对免疫原产生的单克隆抗体或其片段，所述免疫原包含与西罗莫司在C32处连接的免疫原性载体；和(h) 针对包含与西罗莫司在C26处连接的免疫原性载体的免疫原和包含与西罗莫司在C32处连接的免疫原性载体的免疫原的混合物产生的单克隆抗体或其片段。13.用于诊断免疫测定的试剂盒，所述试剂盒包含：至少一种诊断免疫测定试剂，其包含：(1) 颗粒；(2) 附接至(1)的颗粒的第一抗体或其片段；和(3) 第二抗体或其片段；且其中第一和第二抗体或其片段特异性结合存在于样品中的半抗原的不同表位，由此导致颗粒增强的凝集；和预处理试剂，其包含置换剂，用于从内源性结合蛋白释放所述半抗原。14.权利要求13的试剂盒，其中(3)不直接附接至颗粒。15.权利要求13的试剂盒，其中(3)附接至(1)。16.权利要求13的试剂盒，其中所述半抗原选自他克莫司、依维莫司、西罗莫司和环孢菌素。17.权利要求13的试剂盒，其中所述诊断免疫测定试剂的颗粒是乳胶颗粒。18.权利要求13的试剂盒，其中所述第一和第二抗体或其片段各自选自：(a) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由包括甲氧基和羟基取代基的C29
‑
C34环和包括甲氧基取代基的C15组成的部分；(b) 单克隆抗体或其片段，其特异性结合他克莫司的基本上由C10
‑
C14环的甲氧基和包括C22酮氧的C1
‑
C26环的C19
‑
C27组...

【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：美国西门子医学诊断股份有限公司，
类型：发明
国别省市：