一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用技术

本发明专利技术提供一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用。所述的突变型蛋白酶3的氨基酸序列的36位点、48位点或74位点的氨基酸突变为带有叠氮基团和炔基中的一者的非天然氨基酸，所述的生物素为具有炔基或叠氮基团中的另一者的生物素衍生物，所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物由所述的非天然氨基酸和所述的生物素衍生物发生点击化学反应而得。本发明专利技术可操作性强，反应效率高，条件温和，在提高了生物素标记效率的同时，增强了抗原抗体结合的反应性，提高了抗蛋白酶3抗体检测的灵敏度和准确性，在临床应用中具有广阔前景。在临床应用中具有广阔前景。

【技术实现步骤摘要】
一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物学检测
，具体涉及一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物及其制备方法及应用。

技术介绍

[0002]蛋白酶3(PR3)是中性粒细胞胞浆嗜天青颗粒中的一种丝氨酸蛋白酶，分子量约为29Ka的糖蛋白。PR3能降解多种细胞外基质如弹性蛋白、血红蛋白、Ⅳ型或
Ⅴ
型胶原等多种组织成分。蛋白酶3还能通过组织蛋白酶G促进血小板活化，并使C抑制剂失活。PR3抗体是韦格拉肉芽肿病(恥G)的特异性抗体。尽管其发病机制不清，但是抗PR3抗体与韦格拉肉芽肿病发病机制具有一定的相关性。另外，PR3抗体浓度与其他疾病活性密切相关，可见于原发性系统性脉管炎、慢性炎性肠炎、感染(如HV和其他疾病。韦格纳肉芽肿患者经治疗病情稳定后，该抗体浓度可下降，常被作为判断疗效、估计复发的指标，从而指导临床治疗。PR3抗体对呼吸道有亲和性，致上下呼吸道坏死，肉芽肿形成。此外，蛋白酶3抗体(抗
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PR3)在血管炎的发病中也起着重要作用，蛋白酶3抗体(抗<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的突变型蛋白酶3的氨基酸序列的36位点、48位点或74位点的氨基酸为带有叠氮基团和炔基中的一者的非天然氨基酸，所述的生物素为具有炔基或叠氮基团中的另一者的生物素衍生物，所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物通过炔基和叠氮基团之间形成的化学键相连。2.根据权利要求1所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的非天然氨基酸为侧链带有叠氮基或炔基的苯丙氨酸衍生物、酪氨酸衍生物、谷氨酸衍生物、谷氨酰胺衍生物、丙氨酸衍生物、半胱氨酸衍生物、精氨酸衍生物、赖氨酸衍生物；和/或，所述的生物素衍生物为分子量为400～500，臂长为的长臂生物素的衍生物。3.根据权利要求1所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物，其特征在于，所述的非天然氨基酸为和/或，所述的生物素衍生物为4.一种如权利要求1至3中任一项所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物的制备方法，其特征在于，所述的突变型蛋白酶3和所述的生物素衍生物在硫酸铜存在的条件下进行点击化学反应，然后使用乙二胺四乙酸终止反应，得到所述的突变型蛋白酶3和生物素的偶联物。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的点击化学反应在中性PBS缓冲液中进行；和/或，所述的点击化学反应的反应温度为2～6℃；和/或，所述的突变型蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：向乾银，陈蕊，于婷，李伟甲，秦枫，赵婷，王健，孙雅静，向雪花，胡江鸿，
申请(专利权)人：苏州携创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：