一种CIK细胞培养基及培养方法技术

本发明专利技术公开了一种CIK细胞培养基，由基础培养基和添加在培养基中的A组分和B组分组成，所述A组分为：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL

【技术实现步骤摘要】
一种CIK细胞培养基及培养方法


[0001]本专利技术涉及免疫细胞培养领域，尤其涉及一种CIK细胞培养基及培养方法。

技术介绍

[0002] CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine
‑
Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达 CD3 和 CD56 两种膜蛋白分子，故又称为NK 细胞（自然杀伤细胞）样 T 淋巴细胞，兼具有 T 淋巴细胞强大的抗瘤活性，和 NK 细胞的非 MHC 限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同
ꢀ“
细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK 细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。
[0003]随着CIK的应用越来越广泛，对CIK细胞的数量及活性要求越来越高。体外诱导培养决定着CIK细胞的质量。现有的CIK细胞培养多是从外周血或脐带血中分离、诱导培养得到、脐带血由于来源受限，更多的采用分离的外周血单个核细胞(PBMC)用CD3单克隆抗体、白细胞介素
‑
1、白细胞介素
‑
2以及γ
‑
干扰素等因子进行活化、扩增，然而这种方式普遍存在诱导效率低、细胞生长慢、最终获得的CIK细胞增殖效果差、细胞活率低等问题，难以满足临床需要。因此有必要提供一种提高CIK细胞体外增殖活性的培养基。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种CIK细胞培养基，不添加血清、血浆等血液制品，成分明确安全，有效提高CIK细胞的增殖效率。
[0005]本专利技术的目的之二在于提供一种CIK细胞的培养方法本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种CIK细胞培养基，由基础培养基和添加在培养基中的A组分和B组分组成，所述A组分为：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL
‑
2、IL
‑
12、IFN
‑
γ、CD3单抗；所述B组分为刺芒柄花素、谷氨酰胺、黄芪多糖、GM
‑
CSF。
[0006]优选地，所述A组分中各原料在基础培养基中的终浓度为：辛弗林5.3
‑
6.8ng/mL、芦荟苷2.5
‑
3.2μg/mL、纤维粘连蛋白1.5
‑
5μg/mL、IL
‑
2 1000
‑
1500IU/mL、IL
‑
12 500
‑
800IU/mL、IFN
‑
γ600
‑
1000IU/mL、CD3单抗15
‑
20ng/mL；所述B组分在基础培养基中的终浓度为：刺芒柄花素4.1
‑
4.9μg/mL、谷氨酰胺5.5
‑
7.5μg/mL、黄芪多糖8.5
‑
10μg/mL、GM
‑
CSF2.5
‑
3.5μg/mL。
[0007]优选地，所述A组分中各原料在基础培养基中的终浓度为：辛弗林6.2ng/mL、芦荟苷2.8μg/mL、纤维粘连蛋白3μg/mL、IL
‑
2 1200IU/mL、IL
‑
12 650IU/mL、IFN
‑
γ850IU/mL、CD3单抗18ng/mL；所述B组分在基础培养基中的终浓度为：刺芒柄花素4.5μg/mL、谷氨酰胺6.5μg/mL、黄芪多糖9μg/mL、GM
‑
CSF 3μg/mL。
[0008]优选地，所述基础培养基为RPMI
‑
1640培养基。
[0009]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：一种CIK细胞的培养方法，包括以下步骤：（1）取基础培养基，加入A组分：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL
‑
2、IL
‑
12、IFN
‑
γ、CD3单抗，备用（2）自外周血中分离单个核细胞，用步骤（1）的培养基重悬，在37℃，5%CO2条件下培养2
‑
3天；（3）向基础培养基中加入B组分：刺芒柄花素、谷氨酰胺、黄芪多糖、GM
‑
CSF，备用；（4）向步骤（2）培养细胞中补充添加步骤（3）的培养基继续培养，每隔2
‑
3天补充一次上述培养基，使细胞密度保持在1
‑5×
106个/mL，连续培养14天。
[0010]优选地，步骤（2）培养基中单个核细胞密度为1
‑2×
106个/mL。
[0011]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一种CIK细胞培养基，先在基础培养基中添加辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白等成分对外周血中单个核细胞进行诱导培养，提高诱导效率，然后，补充添加刺芒柄花素、谷氨酰胺、黄芪多糖、GM
‑
CSF等成分的基础培养基，提高CIK细胞的增殖效率。通过上述成分的配合有效提高CIK细胞的体外扩增效率，短时间内可收获大量的CIK细胞，并且细胞活率高，可充分满足临床的使用需求。
[0012]本专利技术还提供一种CIK细胞的培养方法，采用本专利技术的培养基，分阶段添加，有效提高CIK细胞的增殖效果。
具体实施方式
[0013]下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0014]实施例1一种CIK细胞培养基，由RPMI
‑
1640培养基和添加在培养基中的A组分和B组分组成，A组分为：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL
‑
2、IL
‑
12、IFN
‑
γ、CD3单抗；B组分为刺芒柄花素、谷氨酰胺、黄芪多糖、GM
‑
CSF；A组分中各原料在基础培养基中的终浓度为：辛弗林6.2ng/mL、芦荟苷2.8μg/mL、纤维粘连蛋白3μg/mL、IL
‑
2 1200IU/mL、IL
‑
12 650IU/mL、IFN
‑
γ850IU/mL、CD3单抗18ng/mL；所述B组分在基础培养基中的终浓度为：刺芒柄花素4.5μg/mL、谷氨酰胺6.5μg/mL、黄芪多糖9μg/mL、GM
‑
CSF 3μg/mL。
[0015]一种CIK细胞的培养方法，包括以下步骤：（1）取RPMI
‑
1640培养基，加入A组分：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL
‑
2、IL
‑
12、IFN
‑
γ、CD3单抗，备用（本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CIK细胞培养基，其特征在于，由基础培养基和添加在培养基中的A组分和B组分组成，所述A组分为：辛弗林、芦荟苷、纤维粘连蛋白、IL
‑
2、IL
‑
12、IFN
‑
γ、CD3单抗；所述B组分为刺芒柄花素、谷氨酰胺、黄芪多糖、GM
‑
CSF。2. 根据权利要求1所述CIK细胞培养基，其特征在于，所述A组分中各原料在基础培养基中的终浓度为：辛弗林5.3
‑
6.8ng/mL、芦荟苷2.5
‑
3.2μg/mL、纤维粘连蛋白1.5
‑
5μg/mL、IL
‑
2 1000
‑
1500IU/mL、IL
‑
12 500
‑
800IU/mL、IFN
‑
γ600
‑
1000IU/mL、CD3单抗15
‑
20ng/mL；所述B组分在基础培养基中的终浓度为：刺芒柄花素4.1
‑
4.9μg/mL、谷氨酰胺5.5
‑
7.5μg/mL、黄芪多糖8.5
‑
10μg/mL、GM
‑
CSF2.5
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3.5μg/mL。3. 根据权利要求1所述CIK细胞培养基，其特征在于，所述A组分中各原料在基础培养基中的终浓度为：辛弗林6.2n...

【专利技术属性】
技术研发人员：李书军，万军芳，
申请(专利权)人：李书军，
类型：发明
国别省市：