靶向小鼠CD274基因的gRNA及构建EAE疾病小鼠模型的方法技术

本发明专利技术属分子生物学领域，具体公开了一组靶向小鼠CD274基因的gRNA及构建EAE疾病小鼠模型的方法；本发明专利技术设计了特异性靶向CD274基因的gRNA，利用Cas9将CD274基因的第3个外显子敲除，造成移码突变，从而达到将该基因敲除的目的。该方法简单易行，周期短，在小鼠受精卵内就可实施，获得阳性克隆的几率很高。由该方法获得的CD274基因敲除小鼠是作为研究EAE疾病的最佳模型，利用该小鼠模型可以充分研究该疾病的致病机理，并进一步开发针对该疾病的治疗方式。方式。方式。

【技术实现步骤摘要】
靶向小鼠CD274基因的gRNA及构建EAE疾病小鼠模型的方法


[0001]本专利技术属分子生物学领域，具体公开了一组靶向小鼠CD274基因的gRNA及构建EAE疾病小鼠模型的方法。

技术介绍

[0002]脊髓炎是指由病毒、细菌、螺旋体、立克次体、寄生虫、原虫、支原体等生物原性感染，或由感染所致的脊髓灰质或(和)白质的炎性病变，以病变水平以下肢体瘫痪、感觉障碍和植物神经功能障碍为其临床特征。临床上虽有急性、亚急性和慢性等不同的表现形式，但在病理学上均有病变部位神经细胞变性，坏死、缺失；白质中髓鞘脱失、炎性细胞浸润、胶质细胞增生等改变。因此，脊髓炎包括了大量的脊髓炎性疾病。实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的，以中枢神经系统内小血管周围出现单个核细胞浸润及髓鞘脱失为特征的自身免疫性疾病。实验动物疾病模型对于研究人类疾病发生的病因、发病机制、开发防治技术和开发药物是不可缺少的研究工具。国内外学者试用多种易感动物建立EAE模型，以阐明EAE的发病机制，并为其病情的监测、复发的预防、治疗方案的选择以及新疗法或新本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组靶向小鼠CD274基因的gRNA，其特征在于，包括四条gRNA，其核酸序列分别为：gRNA1=SEQ ID NO 1=5
’‑ꢀ
GTATGGCAGCAACGTCACGATGG
‑3’
；gRNA2=SEQ ID NO 2=5
’‑ꢀ
TGCTGCATAATCAGCTACGGTGG
‑3’
；gRNA3=SEQ ID NO 3=5
’‑ꢀ
TGCTTGCGTTAGTGGTGTACTGG
‑3’
；gRNA4=SEQ ID NO 4=5
’‑ꢀ
GACGTCAAGCTGCAGGACGCAGG
‑3’
。2.一种小鼠CD274基因的基因敲除试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如权利要求1中的一组靶向小鼠CD274基因的gRNA。3.使用如权利要求1所述的一组靶向小鼠CD274基因的gRNA构建EAE疾病小鼠模型的方法，其特征在于，所述方法包括利用gRNA1、gRNA2、gRNA3、gRNA4将小鼠CD274基因敲除。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述gRNA1、gRNA2、gRNA3、gRNA4靶向切割小鼠CD274基因的第3个外显子的5＇端和3＇端的两侧。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述gRNA1、gRNA2、gRNA3将CD274基因第3个外显子之间的246bp的DNA切除，切除后的基因在转录形成的mRNA第2个外显子与第4个外显子剪切时融合，翻译蛋白质...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪，白颖，孔珊珊，
申请(专利权)人：赛业苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：