一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用，包括以下步骤：S1、称取样品进行菌株的分离纯化；S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；S3、提取细菌DNA和真菌DNA，通过凝胶电泳进行菌种鉴定；S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；S5、菌剂复配；S6、制备固态化微生物颗粒；菌剂复配包括菌液制备和复合菌剂的复配，复配包括苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和灰戴氏霉，将各个菌种配制为菌悬液，单位体积菌悬液有效活菌数大于1

【技术实现步骤摘要】
一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物除臭
，具体涉及一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]随着城市化进程的不断发展，污水处理厂、污水提升泵站、垃圾中转站、垃圾填埋场等市政处理设施距离人们的生活区越来越近，这些设施在运行过程中产生的恶臭废气已成为影响人们正常生活的一个重要因素。《恶臭污染物排放标准》(GB14554
‑
93)和《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918—2002)都明确规定了废气排放标准。
[0003]城市污水处理厂在污水收集、运输、处理过程中，以及浓缩污泥的处理过程中都有恶臭气体产生。恶臭物质种类按其组成可分成5类：含硫化合物，如硫化氢、二氧化硫、硫醇等；含氮化合物，如氨气、胺类、酰胺、吲哚等；卤素及衍生物，如氯气、卤代烃等；烃类及芳香烃；含氧有机物，如醇、酚、醛、酮等。其中，臭气的主要成分是氨(NH3)和硫化氢(H2S)。
[0004]目前常用的除臭方法主要包括：物理方法、化学方法和生物方法。
[0005]物理方法是指不改变恶臭物质的化学性质，而是采用掩蔽、稀释、吸附等方式改变大气中恶臭物质的浓度，以此来达到除臭目的。物理方法除臭方面的研究主要集中在活性炭吸附方面。目前物理除臭方法工艺比较成熟，但对所处理气体和处理环境的要求较高、且处理成本也很昂贵。
[0006]化学方法是通过一些化学反应，如氧化、燃烧等化学反应使恶臭物质转化为无味的物质。常见的化学处理方法有氧化、热分解、焚烧等。化学除臭法虽然可以快速高效的去除浓度高的恶臭物质，但化学物质也容易对环境造成严重危害，引起二次污染。
[0007]生物除臭技术与物理和化学技术相比，过程中不需添加化学物质，可在常温(10℃
‑
40℃)和常压下进行，比物理方法和化学方法的成本更低，操作更简单。它是利用微生物的生物化学作用将恶臭物质吸收转化成供自身生长的营养物质并代谢出体外，以达到去除臭味的目的。臭气的最终产物主要是水、二氧化碳、盐类等，不会造成二次污染。
[0008]现有生物法处理废气一般经过三个步骤：
①
废气中的污染物由气膜扩散进入液膜；
②
溶解于液膜中的污染物在浓度差的推动下进一步扩散到生物膜，并被其中的微生物吸附、吸收；
③
进入微生物细胞的污染物在微生物体内的代谢过程中作为营养物质和能源分解、利用，将污染物去除。
[0009]目前城市污水处理厂釆用的生物除臭技术主要有3种：生物过滤法、生物滴滤法和生物洗涤法。
[0010]生物滴滤法除臭是将废气吹入生物滴滤池，当湿润的废气通过附有生物膜的填料层时，气体中的恶臭物质被充满营养物质的循环液和填料表面的微生物所吸附、吸收、降解，并最终分解成CO2、H2O等简单无害的无机物，消除致臭成分，净化后向大气排放。
[0011]现有除臭菌剂研究现状，主要存在以下问题：
[0012](1)目前，除臭菌剂中菌种种类较少，一般只有1
‑
3种，因此，除臭效率不是很高。
[0013](2)微生物除臭菌剂的复配，对于菌种间合适比例和菌种间的拮抗作用考虑不全，导致产品质量和使用效果上不稳定，相关问题层出不穷。
[0014](3)目前国内的生物除臭处理大多采用的是活性污泥直接挂膜驯化，驯化周期长。

技术实现思路

[0015]本专利技术的目的是针对上述问题，提供一种复合微生物除臭菌剂的制备方法及其应用。
[0016]为达到上述目的，本专利技术采用了下列技术方案：
[0017]一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，包括以下步骤：
[0018]S1、称取样品进行菌株的分离纯化；
[0019]S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；
[0020]S3、提取细菌DNA和真菌DNA，通过凝胶电泳进行菌种鉴定；
[0021]S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；
[0022]S5、进行菌剂复配；
[0023]S6、制备固态化微生物颗粒；
[0024]所述步骤S5菌剂复配包括菌液制备和复合菌剂的复配，所述复合菌剂的复配包括苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和灰戴氏霉，将各个菌种配制为菌悬液，单位体积的菌悬液有效活菌数大于1
×
107CFU，进行正交设计，通过正交实验得出适合的菌种配比。
[0025]进一步的，复合菌剂中的苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与灰戴氏霉的配比为6：1：2：1：6：2：6。
[0026]进一步的，步骤S6制备固态化微生物颗粒包括：
[0027]S61、取3.0g海藻酸钠加热溶解于50mL水中，冷却，加入0.5gSiO2、0.4g纳米级天然斜发沸石和30mL菌悬液，混合均匀，将混个后的菌悬液滴入质量分数为2％的CaCl2溶液中；
[0028]S62、交联4h后滤出，固定化小球，用生理盐水洗净；
[0029]S63、在
‑
20℃的冰箱中冷冻6h，取出解冻，如此反复，制得固定化细胞小球。反复进行冷冻和解冻可以增加固定化细胞小球的机械强度和减小其扩散系数。
[0030]进一步的，菌株的分离纯化包括：
[0031]S11、称取样品，加入生理盐水，振荡静置，制成多浓度梯度的稀释液；
[0032]S12、配置LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基，高温灭菌后冷却至50℃
‑
60℃，倒入无菌平板，形成固体平板；选取100μL各浓度梯度的稀释液，分别滴加在4种固体平板上，用已灭菌的涂布棒涂布均匀，每个梯度做3个对照，并做好相应标记；
[0033]S13、将经过接种的培养皿倒置放于恒温恒湿培养箱中，温度设置为60℃，湿度为40％，培养12h～24h后取出观察菌落生长状态；
[0034]S14、经涂布培养后，固体培养基上菌落数为20～200个的培养皿，挑选形态大小不同、有明显差异的单个菌落，采用平板划线法在LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基上划线分离，传代3
‑
5次，分离纯化；
[0035]S15、将纯化后的菌种接种在相应斜面培养基，并保藏于4℃冰箱。
[0036]进一步的，筛选的具体步骤包括：
[0037]S21、初筛：取新鲜的餐厨垃圾置于容器中，按照3％的接种量将稀释液接种于容器中，混合均匀后密封，30℃静置培养7天；
[0038]S22、复筛：将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中，接种5mL纯化得到的菌液，每个菌种三次重复；
[0039]接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20mL硼酸吸收液的小烧杯，接种脱硫菌的广口瓶中放置盛有20mL碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯，广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封；
[0040]置于30℃培养箱中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、称取样品进行菌株的分离纯化；S2、通过初筛和复筛对除臭优势菌进行筛选；S3、提取细菌DNA和真菌DNA，通过凝胶电泳进行菌种鉴定；S4、采用五点对峙法筛选出无拮抗菌种；S5、进行菌剂复配；S6、制备固态化微生物颗粒；所述步骤S5菌剂复配包括菌液制备和复合菌剂的复配，所述复合菌剂的复配包括苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌和灰戴氏霉，将各个菌种配制为菌悬液，单位体积的菌悬液有效活菌数大于1
×
107CFU，进行正交设计。2.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述复合菌剂中的苏云金芽胞杆菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、放线菌与灰戴氏霉的配比为6：1：2：1：6：2：6。3.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S6制备固态化微生物颗粒包括：S61、取3.0g海藻酸钠加热溶解于50mL水中，冷却，加入0.5gSiO2、0.4g纳米级天然斜发沸石和30mL菌悬液，混合均匀，将混合后的菌悬液滴入质量分数为2％的CaCl2溶液中；S62、交联4h后滤出，固定化小球，用生理盐水洗净；S63、在
‑
20℃的冰箱中冷冻6h，取出解冻，如此反复制得固定化细胞小球。4.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述菌株的分离纯化包括：S11、称取样品，加入生理盐水，振荡静置，制成多浓度梯度的稀释液；S12、配置LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基，高温灭菌后冷却至50℃
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60℃，倒入无菌平板，形成固体平板；选取100μL各浓度梯度的稀释液，分别滴加在4种固体平板上，用已灭菌的涂布棒涂布均匀，每个梯度做3个对照，并做好相应标记；S13、将经过接种的培养皿倒置放于恒温恒湿培养箱中，温度设置为60℃，湿度为40％，培养12h～24h后取出观察菌落生长状态；S14、经涂布培养后，固体培养基上菌落数为20～200个的培养皿，挑选形态大小不同、有明显差异的单个菌落，采用平板划线法在LB培养基，PDA培养基，高氏一号培养基和MEA培养基上划线分离，传代3
‑
5次，分离纯化；S15、将纯化后的菌种接种在相应斜面培养基，并保藏于4℃冰箱。5.根据权利要求4所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述筛选的具体步骤包括：S21、初筛：取新鲜的餐厨垃圾置于容器中，按照3％的接种量将稀释液接种于容器中，混合均匀后密封，30℃静置培养7天；S22、复筛：将新鲜餐厨垃圾加入广口瓶中，接种5mL纯化得到的菌液，每个菌种三次重复；接种除氨菌的广口瓶中设有盛有20mL硼酸吸收液的小烧杯，接种脱硫菌的广口瓶中放
置盛有20mL碱性锌氨络盐吸收液的小烧杯，广口瓶盖上盖子后用双层塑料膜密封；置于30℃培养箱中培养，每隔一段时间取出小烧杯，检测NH3和H2S的释放量，选出除臭效果好的菌种斜面保存。6.根据权利要求1所述的一种复合微生物除臭菌剂的制备方法，其特征在于，所述细菌DNA提取包括：S311、1mL的细胞悬液在8000g下离心2min，弃去上清液以后，用400μL STE Buffer...

【专利技术属性】
技术研发人员：范淑珍，郑洪星，卢伟，魏星，周伟民，徐勤云，童成龙，
申请(专利权)人：浙江爱科乐环保有限公司，
类型：发明
国别省市：