对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用技术

本发明专利技术提出了对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用。该方法包括：(1)选择S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理；(2)将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后，进行电穿孔转染处理，其中，所述外源物质包括Cas9蛋白和sgRNA。利用该方法能有效实现对动物胚胎进行电转染并基因编辑。实现对动物胚胎进行电转染并基因编辑。

【技术实现步骤摘要】
对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体的，本专利技术涉及对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用，更具体的，本专利技术涉及对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法、构建突变受精卵细胞的方法、构建纯合HDR受精卵细胞的方法、构建致死基因单缺失受精卵细胞的方法、构建突变动物的方法以及对动物受精卵进行透明带弱化处理的方法。

技术介绍

[0002]基因工程小鼠在生物学研究中具有重要意义，据《2018年英国活体动物科学程序年度统计》报导的180万例实验程序，60％的程序以小鼠为实验动物；172万例创造和繁育基因工程动物实验程序中，87％的程序是为培育基因工程小鼠。据报道，中国对模拟人类疾病的动物模型需求激增，基因工程小鼠市场需求快速增长，2022年市场需求将突破15.9亿美元。
[0003]基因工程小鼠需求庞大，但目前对小鼠胚胎进行基因编辑的主流技术为显微注射技术，其通量低，效率低，成本高。同时，构建多基因敲除小鼠模型，成本高，周期长，成功率低，严重限制了小鼠模型的应用。r/>[0004]基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法，其特征在于，包括：(1)选择S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理；(2)将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后，进行电穿孔转染处理，其中，所述外源物质包括Cas9蛋白和sgRNA。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物为哺乳动物。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物包括啮齿类动物、犬、猫、兔、猴。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述动物包括小鼠和大鼠。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物受精卵处于G1期。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在受精后10小时内，完成所述电穿孔转染处理。7.根据权利要求1所的方法，其特征在于，所述透明带弱化处理是通过使所述动物受精卵细胞与台式液接触0～40秒钟进行的。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述透明带弱化处理是通过使所述动物受精卵细胞与台式液接触5秒钟进行的。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照重量，所述外源物质中所述Cas9蛋白的用量是sgRNA用量的2～6倍。10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按照重量，所述外源物质中所述Cas9蛋白的用量是sgRNA用量的4倍。11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外源物质包括：至少一种sgRNA，所述至少一种sgRNA分别针对不同的靶点；和至少一种与所述sgRNA对应的ssODN，所述ssODN的序列是基于所述靶点两侧预定长度而确定的。12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述外源物质包括2～12种sgRNA。13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，基于10微升的电转染预混液，每种sgRNA的用量为1微克，所述Cas9蛋白的用量为所至少一种sgRNA总量的2～6倍。14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，基于10微升的电转染预混液，所述Cas9蛋白的用量不超过20微克，优选不超过16微克。15.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电穿孔转染处理采用5～10次脉冲。16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述电穿孔转染处理采用8次脉冲。17.一种构建突变受精卵细胞的方法，其特征在于，包括：(1)对处于S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理；(2)将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后，进行电穿孔转染处理，其中，所述外源物质包括Cas9蛋白和至少一种sgRNA，基于重量，所述Cas9蛋白与所述至少一种sgRNA重量的比例为2～6：1。18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述Cas9蛋白与所述至少一种sgRNA重量的比例为4：1。19.一种构建突变受精卵细...

【专利技术属性】
技术研发人员：李寅青，朱明，袁俊松，臧璐，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：