一种肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，包括以下步骤：(1)从肿瘤组织中提取肿瘤淋巴细胞TILs；(2)分选富集TILs中PD1阳性T细胞；(3)一次性将PBR转化融合蛋白和IL

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，属于肿瘤浸润淋巴细胞制备


技术介绍

[0002]肿瘤目前是对人类威胁最大的疾病之一，早期发现通过手术、化疗等常规治疗多数只能延缓病情，发展到晚期则缺乏较好的治疗手段。近年来免疫治疗技术发展迅速，不论CAR
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T还是PD1/PD
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L1免疫卡控点抗体药物陆续上市，为肿瘤治疗带来希望。针对肿瘤的免疫细胞研究如火如荼，并取得一些进展，包括目前全球上市的DC疫苗、CAR
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T，然而目前大部分免疫细胞技术都是针对肿瘤单靶点或少数几个靶点，面对异质性较强的肿瘤疗效有限。
[0003]TILs作为常规过继免疫细胞疗法已经有40多年的临床应用，相较于外周血培养的LAK、CIK等免疫细胞而言，TILs中因相对较多的肿瘤特异性杀伤T细胞，因此在包括黑色素、卵巢癌、乳腺癌等众多肿瘤中均取得一定的治疗效果，而越来越多的临床试验加速TILs作为一种特殊的免疫细胞治疗技术或药物上市，为众多肿瘤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从肿瘤组织中提取肿瘤淋巴细胞TILs；(2)分选富集TILs中PD1阳性T细胞；(3)一次性将PBR转化融合蛋白和IL
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15超级复合物整合到PD1阳性T细胞中；所述PBR转化融合蛋白包括：PD1的胞外区、41BB的胞内区和
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IL2RB(YRHQ)的截段，并按顺序连接；所述IL
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15超级复合物包括：信号肽、“自杀基因”R结构、Linker1、白细胞介素
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15突变体IL
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15
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M
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N72D、Linker2、白细胞介素
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15受体α的Sushi结构域、CD
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4跨膜区，并按顺序连接；(4)通过扩增培养，获得肿瘤增强型TILs。2.根据权利要求1所述的肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，经病理组织学确认的肿瘤组织，经组织块破碎法处理后，浸润于培养液中，后从组织中游离出来所述TILs；所述肿瘤组织选自前列腺癌组织、肺癌组织或胃癌组织。3.根据权利要求1所述的肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，通过抗体磁珠分选富集TILs中PD1阳性T细胞。4.根据权利要求3所述的肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，所述通过抗体磁珠分选富集，是指按顺序使用下列试剂分选出PD1阳性的TILs细胞：CD279(PD1)Antibody、Anti
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APC MicroBeads、Support Kit、CD20 Cytoplasmic Antibody、Anti
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PE MicroBeads UltraPure和Support Kit。5.根据权利要求1所述的肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，利用PB转座子系统以电转的方式一次性将PBR转化融合蛋白和IL
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15超级复合物整合到PD1阳性T细胞中。6.根据权利要求1所述的肿瘤增强型肿瘤浸润淋巴细胞的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述PD1的胞外区、41BB的胞内区和
△
IL2RB(YRHQ)的截段的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐振宇，伍耀，何银梅，
申请(专利权)人：皖南医学院第一附属医院皖南医学院弋矶山医院，
类型：发明
国别省市：