自然杀伤细胞接合抗体融合构建体制造技术

本发明专利技术涉及多特异性抗原结合蛋白，所述多特异性抗原结合蛋白用于通过接合在自然杀伤(NK)细胞上表达的CD16A(FcγRIIIA)来接合所述NK细胞以触发NK细胞的细胞毒性，其中所述抗原结合蛋白包含至少两个CD16A抗原结合部分和至少另一个靶抗原结合部分。所述CD16A抗原结合部分包含在多肽链中一个接一个地连接的轻链可变区和重链可变区，并且在所述多肽链的N末端处的包含所述CD16A抗原结合部分的所述可变区是轻链可变区。变区是轻链可变区。变区是轻链可变区。

【技术实现步骤摘要】
自然杀伤细胞接合抗体融合构建体
[0001]本申请是国际申请号PCT/IB2019/053040，国际申请日2019年4月12日，中国申请号201980033176.8，专利技术名称为“自然杀伤细胞接合抗体融合构建体”的专利申请的分案申请。
[0002]相关专利申请的交叉引用
[0003]本申请要求2018年4月13日提交的欧洲临时专利申请号EP18167384.9、2018年4月13日提交的欧洲临时专利申请号EP18167385.6、2018年8月24日提交的欧洲临时专利申请号EP18190661.1、2018年8月24日提交的欧洲临时专利申请号EP18190662.9的优先权，这些专利内容以引用方式整体并入。
[0004]序列表
[0005]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且以全文引用的方式并入本文中。所述ASCII副本创建于2019年4月10日，命名为087353_0101_SL.txt，大小为137,653个字节。


[0006]本专利技术涉及多特异性抗原结合蛋白，所述多特异性抗原结合蛋白用于通过接合在自然杀伤(NK)细胞上表达的CD16A(FcγRIIIA)来接合所述NK细胞以触发NK细胞的细胞毒性，其中所述抗原结合蛋白包含至少两个CD16A抗原结合部分和至少另一个靶抗原结合部分。

技术介绍

[0007]WO 2006/125668和Reusch等人，MABS，2014，6:3:728
‑
739描述了一种用于接合CD16A的双特异性串联双抗体及其用于NK细胞免疫疗法的用途。
[0008]自然杀伤(NK)细胞是被认为构成了抵御病毒感染细胞和癌细胞的第一道防线的具有细胞毒性、产生IFN
‑
γ的先天淋巴细胞(Cerwenka和Lanier，Nat Rev Immunol.2001；1(1)：41
‑
9)。通过将NK细胞裂解重定向至肿瘤细胞并刺激在NK细胞的表面上表达的活化受体CD16A(也称为FcγRIIIA)，可以将NK细胞的细胞毒性潜力用于癌症免疫疗法中。
[0009]使用多特异性抗体指导NK细胞进行肿瘤细胞裂解被认为是一种有效的免疫治疗途径，该途径具有低毒性和可良好接受的安全特性。
[0010]CD16A是一种触发NK细胞的细胞毒活性的活化受体。抗体对CD16A的亲和力与它们触发NK细胞活化的能力直接相关，因此减少了活化所需的抗体剂量。
[0011]可以通过与CD16A进行多价结合，例如与CD16A进行二价结合以提高亲和力，来提高NK细胞的细胞毒性。
[0012]然而，CD16A的双价性和多价性可能导致表达CD16A的细胞(包括NK细胞、γδT细胞，以及单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞的子集)的抗体介导的交联。预期此类相互作用会导致经由CD16A的不期望细胞刺激。例如，NK细胞与表达CD16A的免疫细胞的交联导致NK细胞活化、细胞因子释放和细胞定向细胞毒性的诱导，这降低了NK细胞活性并且加速了NK
细胞耗竭，所述NK细胞耗竭与期望抗肿瘤效用无关。因此，预期NK细胞与表达CD16A的免疫细胞交联会降低NK细胞接合的治疗功效。最重要的是，两个或更多个NK细胞通过与CD16A的二价或多价相互作用进行交联可导致NK细胞活化和同类杀伤(fratricide)(NK
‑
NK细胞裂解)的诱导，从而最终导致体内有效NK细胞耗竭，如先前使用对于恒河猴和绢毛猴中的CD16A是二价的CD16定向鼠IgG抗体(3G8)所述(Choi等人，Immunology 2008；124：215
‑
222；Yoshida等人，Frontier in Microbiology(2010)；1：128)。因此，NK裂解的诱导减少了可用于介导ADCC的效应细胞的数量，并削弱了治疗性抗体的功效。
[0013]因此，需要能够进行不会因同类杀伤(NK
‑
NK细胞裂解)而减弱的增强NK细胞接合的抗体。

技术实现思路

[0014]本专利技术提供了一种CD16A接合抗体，其能够与NK细胞上的CD16A至少二价相互作用，因此具有增加的结合亲和力和细胞毒性，但优选地不能诱导NK
‑
NK细胞裂解。
[0015]本专利技术涉及：
[0016]一种多价且多特异性的抗原结合蛋白，其包含至少一个靶抗原结合部分和至少两个CD16A抗原结合部分，其中所述两个CD16A抗原结合部分与恒定结构域(例如Fab片段或Fc部分)融合。优选地，靶抗原结合部分还与Fab片段或Fc部分融合。
[0017]例如，抗原结合部分中的任一个可以选自由以下项组成的组：单链双抗体(scDb)、双抗体(Db)、单链Fv(scFv)或Fab片段。
[0018]在一些实施例中，CD16A抗原结合部分的轻链可变区和重链可变区在多肽中一个接一个地连接，使得在多肽链的N末端处的可变区是轻链可变区，从而防止了同类杀伤(NK
‑
NK细胞裂解)的诱导。
[0019]通过将抗原结合部分的N末端或C末端融合到各种包含恒定结构域的单元(诸如F(ab)
′
、F(ab)2′
、CH2
‑
CH3、铰链
‑
CH2
‑
CH3、Fc、CH1
‑
铰链
‑
CH2
‑
CH3或IgG)，可以获得多种蛋白质架构。
[0020]在一些实施例中，抗原结合蛋白包含沉默的Fc部分，其不与Fc
‑
γR结合，但是保留与FcRn结合以及任选地至少一种其他的Fc功能性。
[0021]在一些实施例中，抗原结合蛋白包含Fc部分，该Fc部分在一方面被沉默以使其不与Fc
‑
γR结合，在另一方面可以包括进一步的突变以增加或降低其与FcRn结合的能力，这确实与基于不同的细胞转运和再循环能力的不同体内药代动力学相关。
[0022]在某些实施例中，所述抗原结合蛋白包含至少一个HSA抗原结合部分。例如，抗原结合蛋白可包含2、3或4个HSA抗原结合部分。
[0023]在某些实施例中，抗原结合蛋白包含至少两个不同的靶抗原结合部分，即第一靶抗原结合部分和第二靶抗原结合部分。
[0024]在某些实施例中，施加对CD16A具有增加或减少的亲和力的CD16A抗原结合部分。
[0025]本专利技术的特征尤其在于：
[0026]1.由于与Fab片段或Fc部分融合的两个CD16A抗原结合部分，NK细胞接合功能得以增强，
[0027]·
从而由于与CD16A的二价结合而增加了细胞毒性潜力。
[0028]·
利用与CD16A具有高亲和力结合的抗CD16A抗原结合部分。
[0029]·
通过以不诱导同类杀伤的特定次序排列CD16A抗原结合来避免同类杀伤(NK
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多特异性抗原结合蛋白，其包含(a)至少第一靶抗原结合部分，以及(b)至少两个CD16A抗原结合部分，其中所述至少两个CD16A抗原结合部分与包含至少一个恒定结构域的Fab片段或Fc部分融合。2.根据权利要求1所述的多特异性抗原结合蛋白，其中，所述两个CD16A抗原结合部分中的至少一者是选自由单链Fv(scFv)、单链双体抗体(scDb)和双体抗体Db组成的组的抗原结合分子。3.根据权利要求1或2所述的多特异性抗原结合蛋白，其中，所述至少两个CD16A抗原结合部分中的每个是scFv。4.根据权利要求1或2所述的多特异性抗原结合蛋白，其中，所述至少两个CD16A抗原结合部分为scDb形式。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的多特异性抗原结合蛋白，其中，所述至少两个CD16A抗原结合部分中的每个包含在多肽链中一个接一个地连接的轻链可变区(V
L
)和重链可变区(V
H
)，并且所述多肽链的N末端处的可变区是所述V
L
。6.根据权利要求5所述的多特异性抗原结合蛋白，其中，所述多肽链中的所述至少两个CD16A抗原结合部分的所述可变区从N末端到C末端以V
L
‑
V
H
、V
L
‑
V
L
‑
V
H
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：米夏埃多，
申请(专利权)人：艾菲默德有限责任公司，
类型：发明
国别省市：