一种抗HER2的多肽及其用途制造技术

一种抗HER2的多肽及其用途，所述多肽还包含第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第一HER2抗体结合位点，所述第二抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第二HER2抗体结合位点，所述第一HER2抗体结合位点不同于所述第二HER2抗体结合位点。HER2双抗可以同时靶向HER2抗原的DomainⅡ和DomainⅣ，突破Trastuzumab和Pertuzumab单抗单独治疗的局限性，HER2双抗的功能更强。的功能更强。的功能更强。

【技术实现步骤摘要】
一种抗HER2的多肽及其用途


[0001]本专利技术涉及抗体领域，具体涉及一种抗HER2的多肽及其用途。

技术介绍

[0002]曲妥珠单抗与HER2的DomainⅣ结合，从而抑制HER2同源二聚体的形成，干扰HER2分子自身磷酸化，抑制下游信号通路激活。但曲妥珠单抗无法阻止HER2/HER3或HER2/HER1异源二聚体的形成，易导致肿瘤逃逸。帕妥珠单抗通过结合HER2胞外结构域Ⅱ，阻滞了HER2与其它HER受体形成异源二聚化复合物，抑制HER2信号转导通路，显著抑制乳腺癌细胞增殖。曲妥珠和帕妥珠二者以互补的方式阻断HER2介导，二者联合可以防止或减弱曲妥珠出现耐药性，有效抑制肿瘤细胞的增殖。
[0003]现有技术中，抗HER2双表位抗体易形成同源二聚体，通过双细胞系表达和体外组装完成构建，费时、费力、生产成本高。

技术实现思路

[0004]根据第一方面，在一实施例中，提供一种多肽，所述多肽包含第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第一HER2抗体结合位点，所述第二抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第二HER2抗体结合位点，所述第一HER2抗体结合位点不同于所述第二HER2抗体结合位点。
[0005]根据第二方面，在一实施例中，提供分离的多核苷酸，其包含编码第一方面所述多肽的核苷酸序列。
[0006]根据第三方面，在一实施例中，提供一种构建体，所述构建体包含第二方面所述多核苷酸。
[0007]根据第四方面，在一实施例中，提供一种表达系统，所述表达系统含有如第三方面所述构建体或基因组中整合有外源的如第二方面所述多核苷酸。所述表达系统可以是宿主细胞，所述宿主细胞可以表达如第一方面所述多肽。
[0008]根据第五方面，在一实施例中，提供一种偶联物，其包含第一方面所述多肽以及偶联部分，所述偶联部分为可检测的标记。
[0009]根据第六方面，在一实施例中，提供一种试剂盒，其包含第一方面所述多肽，或第六方面所述偶联物。
[0010]根据第七方面，在一实施例中，提供一种组合物，其包含第一方面所述多肽，和/或第二方面所述多核苷酸，和/或第六方面所述偶联物。
[0011]根据第八方面，在一实施例中，提供第一方面所述多肽，或第二方面所述多核苷酸，或第三方面所述构建体，或第四方面所述表达系统，或第五方面所述偶联物在制备治疗和/或预防和/或诊断肿瘤的药物中的用途。
[0012]根据第九方面，在一实施例中，提供第一方面所述多肽，或第二方面所述多核苷酸，或第三方面所述构建体，或第四方面所述表达系统，或第五方面所述偶联物在制备抑制
或阻断HER2的同源二聚体形成和/或HER2的异源二聚体形成的药物中的用途。
[0013]依据上述实施例的抗HER2的多肽及其用途，HER2双抗可以同时靶向HER2抗原的DomainⅡ和DomainⅣ，突破Trastuzumab和Pertuzumab单抗单独治疗的局限性，HER2双抗的功能更强。
附图说明
[0014]图1为实施例1的抗体结构示意图；
[0015]图2为实施例3的SDS
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PAGE检测结果图；
[0016]图3为实施例4的HER2双功能抗体双表位鉴定上样图；
[0017]图4为实施例4的HER2双功能抗体双表位鉴定结果图；
[0018]图5、图6为实施例5的HER2双表位双功能抗体体外增殖活性检测结果图。
具体实施方式
[0019]下面通过具体实施方式结合附图对本专利技术作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
[0020]另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
[0021]本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。而本申请所说“连接”、“联接”，如无特别说明，均包括直接和间接连接(联接)。
[0022]本文中，术语“人IgG Fc区域”具有该术语在免疫学领域中通常给定的含义。特别地，该术语是指通过从抗体移除两个抗原结合区(Fab片段)而获得的人IgG抗体片段。具体而言，Fc区包括抗体的CH2和CH3恒定区结构域，并且也可包括一部分或所有的铰链区。
[0023]免疫球蛋白(Ig)中存在四种IgG子类(G1、G2、G3和G4)，其各自具有不同的结构和被称为效应物功能的生物学功能。这些效应物功能一般通过与Fc受体(FcγR)相互作用或者通过结合补体因子Clq来介导。结合至FcγR可导致抗体依赖性的细胞介导的细胞裂解，而结合至补体因子可导致补体介导的细胞裂解。IgG子类的Fc区的结构和性质是本领域中已知的。本专利技术的融合蛋白可含有来自任何IgG子类的Fc区，尽管Gl和G3比G2和G4抗体具有更高的受体结合和效应物功能活性，因此是优选的。
[0024]本文中，HER2、Her2和ErbB2可以互相使用，均表示天然序列的人HER2蛋白(Genebank登录号：X03363，参见例如Semba等人，1985，PNAS，82:6497
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6501；和Yamamoto等人，1986，Nature,319:230
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234)及其功能衍生物，例如氨基酸序列变体。
[0025]本文中，术语“曲妥珠单抗”(英文名Trastuzumab，亦称赫赛汀)是抗Her 2的单克隆抗体，它通过将自己附着在Her2上来阻止人体表皮生长因子在Her2上的附着，从而阻断癌细胞的生长，赫赛汀还可以刺激身体自身的免疫细胞去摧毁癌细胞。临床上目前主要用于Her
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2过度表达的转移性乳腺癌。单药治疗可用于已接受过一个或多个化疗方案的转移性乳腺癌；可与紫杉醇联合治疗未接受过化疗的转移性乳腺癌。
[0026]本文中，术语“帕妥珠单抗”(Pertuzumab，也被称作2C4，商品名Perjeta)是一种单克隆抗体。它是第一个被称作“HER二聚化抑制剂”的单克隆抗体。通过结合HER2，阻滞了HER2与其它HER受体的杂二聚，从而减缓了肿瘤的生长。
[0027]本文中，术语“HER2”是指人表皮生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽包含第一抗原结合结构域、第二抗原结合结构域，所述第一抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第一HER2抗体结合位点，所述第二抗原结合结构域可结合至HER2抗原的第二HER2抗体结合位点，所述第一HER2抗体结合位点不同于所述第二HER2抗体结合位点。2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述第一HER2抗体结合位点位于HER2的结构域II，所述第二HER2抗体结合位点位于HER2抗原的结构域IV；和/或，所述第一HER2抗体结合位点与曲妥珠单抗的抗体结合位点相同；和/或，所述第二HER2抗体结合位点与帕妥珠单抗的抗体结合位点相同；和/或，所述第一抗原结合结构域包含第一重链可变结构域和第一轻链可变结构域；和/或，所述第一重链可变结构域包含曲妥珠单抗的重链可变结构域(TraVH)；和/或，所述第一重链可变结构域包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.5)；和/或，所述第一轻链可变结构域包含曲妥珠单抗的轻链可变定结构域(TraVL)；和/或，所述第一轻链可变结构域包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO.6)；和/或，所述第二抗原结合结构域包含第二重链可变结构域和第二轻链可变结构域；和/或，所述第二重链可变结构域包含帕妥珠单抗的重链可变结构域(PerVH)；和/或，所述第二重链可变结构域包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：和/或，所述第二轻链可变结构域包含帕妥珠单抗的轻链可变定结构域(PerLV)；和/或，所述第二轻链可变结构域包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO.8)；和/或，所述帕妥珠单抗的重链可变结构域的C端键联至IgG抗体的轻链恒定结构域的N端。3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽还包含第一重链恒定结构域、第二重链恒定结构域，所述第一重链恒定结构域包含人IgG抗体Fc区knob突变体，所述第二重链恒定结构域包含人IgG抗体Fc区hole突变体；和/或，所述IgG抗体包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4亚型或其突变体中的至少一种；和/或，所述人IgG抗体Fc区knob突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下位置突变中的至少一种：S354、T366、K409；和/或，所述人IgG抗体Fc区knob突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下氨基酸突变中
的至少一种：S354C、T366W、K409E；和/或，所述人IgG抗体Fc区knob突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下氨基酸突变中的全部：S354C、T366W、K409E；和/或，所述人IgG抗体Fc区knob突变体包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：GQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSELTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO.9)；和/或，所述人IgG抗体Fc区hole突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下位置突变中的至少一种：Y349、T366、L368、Y407、F405；和/或，所述人IgG抗体Fc区hole突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下氨基酸突变中的至少一种：Y349C、T366S、L368A、Y407V、F405K；和/或，所述人IgG抗体Fc区hole突变体相对于人IgG抗体Fc区包含如下位置突变中的全部：Y349C、T366S、L368A、Y407V、F405K；和/或，所述人IgG抗体Fc区hole突变体包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：和/或，所述第一重链恒定结构域还包含IgG抗体的重链第一恒定结构域(CH1)；和/或，所述IgG抗体的重链第一恒定结构域包含如下氨基酸序列或与其具有至少80％同一性的氨基酸序列中的至少一种：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV(SEQ ID NO.11...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏彦景，李光磊，封纯芳，张培发，
申请(专利权)人：深圳市乐土生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：