一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺制造技术

本发明专利技术涉及生物学技术领域，尤其是一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺；包括以下步骤：1）对PCT基因片段进行密码子优化；2）表达质粒和表达菌株的构建；3）基因重组PCT的发酵：将含有PCT基因的重组大肠杆菌在发酵培养基中37℃培养至OD600=3~4时，加入IPTG在25℃下诱导培养，得发酵液；4）细胞的收集及裂解；5）PCT的纯化；具体涉及利用大肠杆菌表达系统表达重组降钙素原蛋白PCT，将优化后的PCT基因插入到pSUMO载体中构建表达载体，优化并构建基因前端优化以及后端发酵条件以及纯化过程控制的优化；本发明专利技术提供的制备工艺得到的降钙素原蛋白PCT在保持天然结构的同时大大提高了重组PCT在大肠杆菌中的表达量，具有很高的经济应用价值和产业化前景。经济应用价值和产业化前景。经济应用价值和产业化前景。

【技术实现步骤摘要】
一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺


[0001]本专利技术涉及生物学
，尤其是一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺。

技术介绍

[0002]降钙素原（PCT）是激素降钙素（CT）的前体肽。在CT
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mRNA翻译后，PCT被酶解成终产物为32个氨基酸的成熟CT。正常人的血清中的PCT含量极低，在被微生物感染后，CALC
‑
I基因被诱导表达，促进PCT的分泌，8小时达到峰值。目前，PCT已被认为是全身性炎症反应综合征的标志物，可以指导治疗，减少抗生素的使用，诊断败血症，改善长期结果。
[0003]大肠杆菌作为优良基因工程菌，生长周期短，生产成本低，转化率高并且可以高表达目的蛋白，其表达水平远远高于其他表达系统。实现产品的产业化与成熟的重组产品的纯化工艺是息息相关，因此实现基因工程技术和蛋白工艺的有机结合，无疑会为重组高活性产品实现大规模生产奠定基础。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于：克服现有技术中的不足，提供一种基因重组高活性降钙素原蛋白（PCT）抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：1）对PCT基因片段进行密码子优化；2）表达质粒和表达菌株的构建：合成步骤1）优化后的基因片段，连接到表达载体上，获得PCT表达质粒，后将表达质粒转入大肠杆菌中构建表达菌株；3）基因重组PCT的发酵：将含有PCT基因的重组大肠杆菌在发酵培养基中37℃培养至OD600=3~4时，加入IPTG在25℃下诱导培养，得发酵液；4）细胞的收集及裂解：将步骤1）的发酵液离心收集菌体，按质量体积比为1:15~20的比例加入裂解缓冲液，利用高压均质机在4℃下将细胞裂解，裂解结束后将匀浆液离心，收集上清液；5）PCT的纯化：将步骤4）的上清液进行亲和层析纯化，得到融合SUMO标签的PCT，后利用SUMO蛋白酶酶切融合蛋白，再次亲和纯化回收无标签的PCT蛋白。2.根据权利要求1所述的一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺，其特征在于：步骤1）所述的密码子优化采用密码子优化软件MaxCodon
TM Optimization Program (V13)进行。3.根据权利要求1所述的一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺，其特征在于：步骤（2）中表达质粒构建，具体步骤包括：引物设计与合成，PCR获取PCT基因片段，重组连接获取表达质粒，其中表达质粒为pSUMO。4.根据权利要求1所述的一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺，其特征在于：步骤3）中所述的发酵培养基为TB培养基，培养条件为：转速250
‑
300rpm，罐压为0.03
‑
0.05Mpa，初始通气量为1.5m3/h，通过调节通气量维持DO在25%
‑
40%，IPTG终浓度为0.2
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0.5mM。5.根据权利要求4所述的一种基因重组高活性降钙素原蛋白抗原的制备工艺，其特征在于：所述TB培养基组分及各组分含量为：50ug/ml的卡那霉素，蛋白胨12g/L，酵母膏24g/L，甘油5g/L，K2HPO4...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴瞻，胡斌，
申请(专利权)人：南京欧凯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：