MAD7-NLS融合蛋白、用于植物基因组定点编辑的核酸构建物及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种MAD7

【技术实现步骤摘要】
MAD7
‑
NLS融合蛋白、用于植物基因组定点编辑的核酸构建物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
具体涉及MAD7
‑
NLS融合蛋白、用于植物基因组定点编辑的核酸构建物，以及基于新型核酸酶MAD7利用RNA引导的植物基因组的高效定点基因编辑方法。

技术介绍

[0002]随着基因定向编辑工具如锌指蛋白核糖核酸酶（Zinc finger nulease， ZFN）、转录激活样效应因子核酸酶（Transcription activator
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like effectors nulease，TALEN）和规律成簇间隔短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）系统的推广应用，特别是CRISPR系统由于活性高，特异性好、操作简便、快速，近年来发展非常迅速，并且在大量物种上得到成功应用。目前应用最广的核酸酶为II型Cas9和Cpf1（Cas12a）。其中，Cas9识别3<br/>′
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MAD7
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NLS融合蛋白，其特征在于，具有如下结构：B1
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C
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B2、B1
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C或C
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B2；其中，C为MAD7蛋白；B1和B2为各自独立的核定位信号序列。2.如权利要求1所述的MAD7
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NLS融合蛋白，其特征在于，所述核定位信号序列选自：SV40、KRP2、MDM2、CDc25C、DPP9、MTA1、CBP80、AreA、M9、Rev、hTAP、MyRF、EBNA
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6、TERT或Tfam中的一种，或者任两种或多种的组合。3.如权利要求1或2所述的MAD7
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NLS融合蛋白，其特征在于，所述MAD7
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NLS融合蛋白N端还包含信号肽和/或蛋白标签序列。4.一种用于植物基因组定点编辑的核酸构建物，其特征在于，包含第一表达盒，所述第一表达盒包含依次连接的第一启动子、如权利要求1
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3中任一项所述的MAD7
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NLS融合蛋白的编码核苷酸序列和第一终止子。5.如权利要求4所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一启动子为Pol II类型的启动子，选自Ubi、Actin、CmYLCV、UBQ、35S、SPL，组织特异性启动子YAO、CDC45、rbcS和诱导型启动子XEV中的一种或任两种的组合。6.如权利要求4所述的核酸构建物，其特征在于，还包含第二表达盒，所述的第二表达盒包含依次连接的第二启动子、若干串联的重复序列；所述重复序列为成熟型直接重复序列和非成熟型直接重复序列中的一种或两种。7.如权利要求6所述的核酸构建物，其特征在于，第二启动子为Pol II类型或Pol III类型的启动子；所述第二启动子选自OsU3、OsU6a、OsU6b、OsU6c、Actin...

【专利技术属性】
技术研发人员：周红菊，李相敢，郑华颖，裴睿丽，刘政，刘子嘉，李莹莹，
申请(专利权)人：科稷达隆北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：