本申请公开了一种用于检测玉米事件KJDLM528T201183(商业名KJ1183)的核酸序列，其包含序列SEQ ID NO:1、3、5中的任一序列和SEQ ID NO:2、4、6中的任一序列；或者包含序列SEQ ID NO:7或8。所述核酸序列来源于包含玉米事件KJ1183的植物、种子或细胞。本发明专利技术的转基因玉米事件KJ1183能够有效抵抗鳞翅目害虫的危害，并可耐受高浓度草甘膦除草剂，在玉米种植过程可减少杀虫剂的使用，减少生产投入，且有利于控制田间杂草，提高耕作效率和产量。提高耕作效率和产量。
【技术实现步骤摘要】
抗虫耐草甘膦转基因玉米事件KJ1183及其检测方法
[0001]本专利技术属于分子生物学和植物育种
，主要涉及转基因植物及其检查方法，具体是涉及一种对昆虫具有抗性且耐受草甘膦除草剂施用的转基因玉米事件KJDLM528T201183(商业名KJ1183)和用于检测生物样品中是否包含特定转基因玉米事件KJ1183核酸序列的方法。
技术介绍
[0002]玉米(Zea mays L.)在世界上很多地区都是主要的粮食作物，也是重要的饲料作物，在发展畜牧业和水产养殖业中具有战略性意义，在医药、化工方面也有广泛用途。生物技术已应用于改善玉米农艺性状和品质。
[0003]近10年来，玉米虫害发生持续呈加重趋势，特别是鳞翅目害虫，如玉米螟、棉铃虫、草地贪夜蛾、黏虫等。通过转基因方法使鳞翅目昆虫的抗性基因在玉米植物中表达，可使玉米获得对鳞翅目昆虫抗性。20世纪90年代，孟山都公司开发了抗虫转基因玉米MON810，自商业化至今的20多年间，MON810品系在防治玉米螟方面效果好。先正达开发的MIR162，在抗草地贪夜蛾方面效果良好。
[0004]玉米另一个重要的农艺性状是除草剂(尤其是草甘膦除草剂)耐受性。在玉米生产中，田间除草工作都会消耗大量劳动力，造成种植成本增加，如除草不及时还会造成玉米减产，给玉米生产带来经济损失。通过转基因方法使草甘膦耐受型基因(如EPSPS)在玉米植物中表达，可以使玉米获得对草甘膦除草剂的耐受性。
[0005]目前，玉米生物育种的趋势是培育抗虫和耐除草剂复合性状。国内获得安全证书的转基因玉米有DBN9936和瑞丰12
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5，具有抗鳞翅目害虫和耐草甘膦除草剂抗性，是一个抗虫基因和一个抗除草剂基因复合性状的材料。单独一个抗虫基因的使用，抗虫谱窄，长期使用，还有靶标害虫产生抗性的风险。
[0006]已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响，可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。为此，通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件(即导入的目标基因得到最优表达的事件)。筛选出的商业化事件，具有优异的鳞翅目害虫(玉米螟、棉铃虫、黏虫、草地贪夜蛾、小地老虎等)和除草剂抗性，且不影响其他农艺性状，可以通过常规育种方法将转基因回交到其他遗传背景中。通过这种杂交方式产生的后代保持了原始转化体的转基因表达特征和性状表现。应用这种策略模式可以确保在许多品种中具有可靠的基因表达。
[0007]检测特定事件的方法对于后期杂交转育，鉴定后代是否包含目的基因将是有益的。此外，还将有助于遵守相关法规，产品保护。通过任何熟知的多核苷酸检测方法来检测转基因的存在都是可能的，例如聚合酶链式反应(PCR)或利用多核苷酸探针的DNA杂交。一般常利用跨越了插入的转基因和侧翼DNA的接合部位的一对引物通过PCR来鉴定转基因特定事件，具体包括位于侧翼序列的第一引物和插入序列的第二引物。
技术实现思路
[0008]本专利技术的目的是提供一种转基因玉米事件KJDLM528T201183(商业名KJ1183，以下均采用商品名描述)以及用于检测玉米事件KJ1183的核酸序列及检测方法，可以准确快速的鉴定生物样品中是否包含特定的转基因玉米事件KJ1183的DNA分子。
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供了一种核酸序列，包括如下(1)
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(3)中的一项：
[0010](1)序列SEQ ID NO:1、3、5中的任一序列或其互补序列，和SEQ ID NO:2、4、6中的任一序列或其互补序；
[0011](2)序列SEQ ID NO:7或其互补序列；
[0012](3)序列SEQ ID NO:8或其互补序列。
[0013]所述核酸序列来源于转基因玉米事件KJ1183的植物、种子或细胞，所述玉米事件的种子(拉丁学名：Zea mays L.)的代表性样本已以保藏编号CCTCC NO:P202305保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内，武汉大学保藏中心，邮编430072)，保藏时间2023年3月13日。
[0014]所述SEQ ID NO:1或其互补序列为转基因玉米事件KJ1183中在插入序列的5
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末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述SEQ ID NO:1或其互补序列跨越了玉米插入位点的侧翼基因组DNA序列和插入序列的5
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末端的DNA序列；所述SEQ ID NO:2或其互补序列为转基因玉米事件KJ1183中在插入序列的3
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末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述SEQ ID NO:2或其互补序列跨越了插入序列的3
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末端的DNA序列和玉米插入位点的侧翼基因组DNA序列，包含所述SEQ ID NO:1和2或其互补序列即可鉴定为转基因玉米事件KJ1183的存在。
[0015]本专利技术中，所述核酸序列可以为所述SEQ ID NO:3或其互补序列中转基因插入序列的任何部分的至少11个或更多个连续多核苷酸(第一核酸序列)，或者为所述SEQ ID NO:3或其互补序列中5
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侧翼玉米基因组DNA区域的任何部分的至少11个或更多个连续多核苷酸(第二核酸序列)。所述核酸序列进一步可以为同源于或互补于包含完整的所述SEQ ID NO:1的所述SEQ ID NO:3的一部分。当第一核酸序列和第二核酸序列一起使用时，这些核酸序列在产生扩增产物的DNA扩增方法中包括DNA引物对。使用DNA引物对在DNA扩增方法中产生的扩增产物是包括SEQ ID NO:1的扩增产物时，可以诊断转基因玉米事件KJ1183或其后代的存在。本领域技术人员熟知的，第一和第二核酸序列不必仅仅由DNA组成，也可包括RNA、DNA和RNA的混合物，或者DNA、RNA或其它不作为一种或多种聚合酶模板的核苷酸或其类似物的组合。此外，本专利技术中所述探针或引物应该是至少大约11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续核苷酸的长度，其可以选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6中所述的核苷酸。当选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的核苷酸时，所述探针和引物可以为长度是至少大约21个到大约50个或更多的连续核苷酸。所述SEQ ID NO:3或其互补序列为转基因玉米事件KJ1183中在插入序列的5
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末端位于插入接合部位附近的一个长度为1104个核苷酸的序列，所述SEQ ID NO:3或其互补序列由686个核苷酸的5
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玉米侧翼基因组DNA序列(SEQ ID NO:3的核苷酸1
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686)、418个核苷酸的LB序列(SEQ ID N本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种核酸序列，其特征在于，所述核酸序列包括如下(1)
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(3)中的一项：(1)序列SEQ ID NO:1、3、5中的任一序列或其互补序列，和SEQ ID NO:2、4、6中的任一序列或其互补序；(2)序列SEQ ID NO:7或其互补序列；(3)序列SEQ ID NO:8或其互补序列。2.根据权利要求1所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列来源于转基因玉米事件KJ1183的植物、种子或细胞，所述事件的种子的代表性样本已以保藏编号CCTCC NO:P202305保藏于中国典型培养物保藏中心。3.根据权利要求1所述的核酸序列，其特征在于，所述核酸序列是诊断玉米事件KJ1183存在的扩增子。4.一种检测转基因玉米事件KJ1183存在用的DNA引物对，其特征在于，所述引物包含第一引物和第二引物，其特征在于，所述第一引物和所述第二引物各自包含SEQ ID NO:8的部分序列或其互补序列，且当与含有玉米事件KJ1183的DNA一起用于扩增反应时，产生检测样品中玉米事件KJ1183的扩增子；具体的，所述第一引物选自SEQ ID NO:1或其互补序列,所述第二引物选自SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:30；或所述第一引物选自SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:30，所述第二引物选自SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:31。5.一种DNA探针，其特征在于，包含SEQ ID NO:8的部分序列或其互补序列，所述DNA探针在严格杂交条件下与包含选自SEQ ID NO:1
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8或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交并在严格杂交条件下不与不含选自SEQ ID NO:1
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8或其互补序列的核酸序列的DNA分子杂交；具体的，所述DNA探针选自SEQ ID NO:3或其互补序列、SEQ ID NO:4或其互补序列；更具体的，所述DNA探针选自SEQ ID NO:1或其互补序列、SEQ ID NO:2或其互补序列、SEQ ID NO:5或其互补序列和SEQ ID NO:6或其互补序列的序列。6.一种标记物核酸分子，其特征在于，包含SEQ ID NO:8的部分序列或其互补序列，所述标记物核酸分子在严格杂交条件下与包含选自SEQ ID NO:1
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8或其互补序列的核酸序列的DNA分...
【专利技术属性】
技术研发人员：王长成，张蕾，吴业春，宋哲，王金羽，田爱菊，董秋平，任海翠，董玉凤，李莹莹，王冬梅，祁幼林，李相敢，
申请(专利权)人：科稷达隆北京生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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