本发明专利技术公开了一种简易测定RNA病毒PRRSV的专用引物组合及检测试剂盒。本发明专利技术提供了特异引物组，由序列1所示引物F3、序列2所示引物B3、序列3所示引物FIP、序列4所示引物BIP、序列5所示引物LF和序列6所示引物LB组成。本发明专利技术还保护所述特异引物组在制备试剂盒中的应用；试剂盒的用途：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。本发明专利技术可用于生产一线和饲养过程中检测样品是否带有PRRSV，进而严格防控该病的传播，并及时止损，具有重要的经济效益与社会价值。的经济效益与社会价值。
【技术实现步骤摘要】
一种简易测定RNA病毒PRRSV的专用引物组合及检测试剂盒
[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种简易测定RNA病毒PRRSV的专用引物组合及检测试剂盒。
技术介绍
[0002]环介导等温扩增(LAMP,Loop-mediated Isothermal Amplification)技术是一种新型的滚环扩增技术,在恒温条件下，呈指数级别放大核酸分子，30分钟内将DNA放大10
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倍。其快速、恒温的独特技术优势，使得LAMP技术成为开发诊断试剂的明星潜力技术。该技术于近几年已广泛应用于病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断，并得到了国际认同。其原理是针对靶基因的一段特异序列设计4-6条匹配引物，并在Bst系列核酸聚合酶的作用下引起自循环链置换反应，在50-65℃的温度范围内恒温扩增30-50min，在大量合成DNA片段的同时观察反应溶液的颜色变化。
[0003]LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，它只需要一个恒定的反应温度，利用一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的判定方式也很简单，不像PCR检测需要进行DNA的凝胶电泳分析，也不需支付qRCR检测的高经济成本，LAMP反应的结果可以通过肉眼直接观察反应体系的颜色变化做出判断，经济快速，且简便快捷，适合饲养一线和野外基地的快速诊断。
[0004]近年来，由于受到国内外环境等众多因素的影响，猪病呈现出高发趋势。猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)，又称为蓝耳病，作为猪的重大传染性疾病之一，严重影响猪群健康生长，同时给我国经济和养殖户带来了不小的经济损失，积极做好猪繁殖与呼吸综合征的诊治工作至关重要。PRRS是由PRRS病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV)引起的，该病的发病速度较快，并且死亡率极高。健康猪在感染发病后，其精神状态不佳，食欲明显下降，严重的食欲废绝，高烧不退、咳嗽、呼吸较为急促、耳缘发绀且皮下出血。部分病猪会出现神经症状，出现严重的腹泻，眼结膜伴有充血现象。怀孕母猪在发病后，2～3d内即可出现流产现象，产下胎儿为死胎。即使有部分耐过猪产下活胎，在2～3d后仔猪也会死亡，给养殖户带来巨大损失。因此，在日常和临床现场的检测中，为了高效、快速、准确、灵敏的得到病毒的检测结果，需要开发一种新的特异性高、敏感性强、肉眼易判断的显色检测试剂盒。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的是提供一种简易测定RNA病毒PRRSV的专用引物组合及检测试剂盒。
[0006]本专利技术提供了特异引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；
[0007]所述引物F3为如下(a1)或(a2)：
[0008](a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；
[0009](a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有
相同功能的DNA分子；
[0010]所述引物B3为如下(a3)或(a4)：
[0011](a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；
[0012](a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；
[0013]所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：
[0014](a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；
[0015](a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；
[0016]所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：
[0017](a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；
[0018](a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；
[0019]所述引物LF为如下(a9)或(a10)：
[0020](a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；
[0021](a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；
[0022]所述引物LB为如下(a11)或(a12)：
[0023](a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；
[0024](a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。
[0025]所述特异引物组中，引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB的摩尔配比依次为2：2：16：16：4：4。
[0026]本专利技术还保护所述特异引物组在制备试剂或试剂盒中的应用；所述试剂或试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0027]本专利技术还保护含有所述特异引物组的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0028]所述试剂盒还包括环介导等温扩增所需的其他试剂。
[0029]所述试剂盒还包括用于将RNA反转录为cDNA的试剂。
[0030]所述试剂盒还包括反转录酶。
[0031]所述试剂盒还包括WarmStart LAMP 2X预混液。
[0032]本专利技术还保护所述试剂盒的制备方法，为方法甲或方法乙；
[0033]所述方法甲包括将所述特异引物组中的各条引物独立包装的步骤；
[0034]所述方法乙包括将所述特异引物组中的所有引物混合包装的步骤。
[0035]本专利技术还保护所述特异引物组或所述试剂盒的应用，为如下(b1)或(b2)或(b3)或
(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。
[0036]本专利技术还保护一种鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征的方法，包括如下步骤：
[0037](1)提取待测猪的总RNA；
[0038](2)以步骤(1)提取的总RNA为模板，采用所述特异引物组进行环介导等温扩增；如果采用所述特异引物组可以实现特异性扩增，待测猪患有或疑似患有猪繁殖与呼吸综合征；如果采用所述特异引物组本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.特异引物组，由引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB组成；所述引物F3为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物B3为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物FIP为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BIP为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物LF为如下(a9)或(a10)：(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物LB为如下(a11)或(a12)：(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。2.如权利要求1所述的特异引物组，其特征在于：引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物LF和引物LB的摩尔配比依次为2：2：16：16：4：4。3.权利要求1或2所述特异引物组在制备试剂或试剂盒中的应用；所述试剂或试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。4.含有权利要求1或2所述特异引物组的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测猪是否患有猪繁殖与呼吸综合征；(b2)筛查患有猪繁殖与呼吸综合征的病猪；(b3)鉴定或辅助鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒；(b4)检测待测样本中是否含有猪繁殖与呼吸综合征病毒。5.一种鉴定...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐中林，刘思远，唐义杰，
申请(专利权)人：中国农业科学院深圳农业基因组研究所，
类型：发明
国别省市：
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