一种单细胞遗传转化方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种单细胞遗传转化方法及其应用。本发明专利技术人提供了优化的方法以制备木本植物悬浮细胞，所述悬浮细胞具有再生分化能力强、目的基因转化率高等特点。本发明专利技术还基于该悬浮细胞建立了高效遗传转化系统。本发明专利技术的方法和系统有利于实现高通量且高效的目的基因转化、编辑操作。编辑操作。

【技术实现步骤摘要】
一种单细胞遗传转化方法及其应用


[0001]本专利技术属于植物学和分子生物学领域，更具体地，本专利技术涉及一种单细胞遗传转化方法及其应用。

技术介绍

[0002]木本植物如杨树等转基因遗传操作主要采用农杆菌介导的叶盘转化法(如Fillatti，J.J.等，Molecular&General Genetics 206，192-199；Movahedi，A等(2014)，An efficient Agrobacterium-mediated transformation system for poplar.Int J Mol Sci 15，10780-10793)。叶盘法的做法一般是利用农杆菌感染叶片外植体并短期共培养，更具体的步骤例如：先将实验材料的叶子表面进行消毒，再用消毒过的不锈钢打孔器从叶子上取下圆形小片，即叶盘；为了对叶盘进行接种处理，将它放在土壤农杆菌培养液中浸泡4～5min，然后用滤纸吸干，放在看护培养基上进行培养；叶盘在看护培养基上培养两天后，转移到含有适当抗生素的选择培养基上进行培养；经过数周后，叶盘周围会长出愈伤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单细胞遗传转化方法，包括：(1)从木本植物的组织获取悬浮细胞，包括将植物组织块在持续光照条件下进行振荡培养，获得悬浮细胞；(2)将步骤(1)的悬浮细胞与含有待遗传转化目的基因的转化菌混合培养，之后除去转化菌；(3)继续培养步骤(2)的悬浮细胞，筛选发生重组转化的细胞。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其特征在于，(1)中，所述的持续光照条件为：每天光照超过20小时；较佳地超过22小时，如每天24小时光照。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其特征在于，(1)中，光照强度1000～3000Lux；较佳地1500～2500Lux；更佳地1800～2200Lux。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，在含有生长素或生长素类似物的MS培养基中培养；较佳地，所述的生长素或生长素类似物包括：2,4-二氯苯氧乙酸。5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的2,4-二氯苯氧乙酸在培养基中的浓度为1.8～2.8mg/L；较佳地2～2.7mg/L；更佳地2.4～2.6mg/L。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述悬浮细胞为细胞内有红色物质沉淀的细胞；较佳地，所述悬浮细胞为椭圆状细胞或球状细胞；较佳地，所述细胞分化程度较低，活性强。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，所述植物组织为植物叶片，或，所述植物组织块为植物叶片剪成的块状组织；或所述的植物为苗期植物；或所述的植物组织为苗期植物第3～5片叶片；或所述的植物组织为无菌的植物组织。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，培养温度为25
±
2℃；或，所述振荡培养为在120
±
50r/min振荡培养，较佳地在120
±
20r/min振荡培养。9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，将植物组织块在持续光照条件下进行振荡培养，当细胞规模生长后，去除大的组织团块及细胞团。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(1)中，当细胞生长至粘稠或对数期时，进行稀释；较佳地稀释2～8倍；或每4～8天进行继代培养；较佳地每5
±
1天进行继代培养。11.如权利要求1或10所述的方法，其特征在于，培养基中添加蔗糖；较佳地蔗糖为20
±
5g/L；或所述培养基的pH为5.8
±
0.3。12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(2)中，所述转化菌包括：农杆菌。13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(2)中，所述悬浮细胞与转化菌混合培养的时间为5～20分钟；较佳地为10
±
3分钟；或所述悬浮细胞与转化菌混合培养为振荡培养。14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(2)中，所述转化菌中，含有的待遗传转化目的基因包括选自下组的基因：基因编辑用工...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书一四页序列表四页附图五页，
申请(专利权)人：中国科学院分子植物科学卓越创新中心，
类型：发明
国别省市：