一种CAR-T细胞无血清培养基及其培养方法技术

本发明专利技术公开了一种CAR

【技术实现步骤摘要】
一种CAR
‑
T细胞无血清培养基及其培养方法


[0001]本专利技术涉及免疫细胞领域，尤其涉及一种CAR
‑
T细胞无血清培养基及其培养方法。

技术介绍

[0002]T细胞也叫T淋巴细胞，是人体白细胞的一种，来源于骨髓造血干细胞，在胸腺中成熟，然后移居到人体血液、淋巴和周围组织器官，发挥免疫功能。其作用相当于人体内的“战士”，能够抵御和消灭“敌人”如感染、肿瘤、外来异物等。
[0003]随着T淋巴细胞肿瘤免疫应答机制的研究日益受到重视，嵌合抗原受体T(CAR
‑
T)细胞治疗正在成为肿瘤免疫治疗领域的一个新的免疫治疗策略。在实验室，技术人员通过基因工程技术，将T细胞激活，并装上定位装置CAR（肿瘤嵌合抗原受体）即CAR
‑
T细胞，CAR
‑
T细胞疗法是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，专门识别体内肿瘤细胞，并通过免疫作用释放大量的多种效应因子，它们能高效地杀灭肿瘤细胞，从而达到治疗恶性肿瘤的目的。近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法。
[0004]使用CAR
‑
T细胞治疗肿瘤的流程包括采集患者外周血、分离T细胞、将CAR导入T细胞、体外培养扩增CAR
‑
T细胞以及将细胞回输至患者。在实际治疗中往往需要大量的CAR
‑
T细胞。因此需要在体外培养大量扩增CAR
‑/>T细胞，一般一个患者需要上亿，乃至几十亿个CAR
‑
T细胞，体型越大，需要细胞越多，而CAR
‑
T细胞体外扩增的效率会很大程度上影响患者的治疗成本。同时CAR
‑
T细胞的存活率会直接影响CAR
‑
T细胞对肿瘤细胞的杀伤效果，因此有必要研究一种CAR
‑
T细胞体外扩增培养基，提高扩增效率和治疗效果，同时降低治疗成本。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，提高CAR
‑
T细胞的增殖效率，降低培养成本。
[0006]本专利技术的目的之二在于提供一种CAR
‑
T细胞的培养方法。
[0007]本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，由基础培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林、淫羊藿苷、阿魏酸酯、IL
‑
2、IL
‑
15、维生素E、L
‑
谷氨酰胺。
[0008]进一步地，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.5
‑
3.5ng/mL、淫羊藿苷6.8
‑
9.6ng/mL、阿魏酸酯8.5
‑
10 ng/mL、IL
‑
2 100
‑
200IU/mL、IL
‑
15 300
‑
500 IU/mL、维生素E 20
‑
30μg/mL、L
‑
谷氨酰胺10
‑
18μg/mL。
[0009]进一步地，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.8ng/mL、淫羊藿苷8.2ng/mL、阿魏酸酯9.4ng/mL、IL
‑
2 150IU/mL、IL
‑
15 400 IU/mL、维生素E 25μg/mL、L
‑
谷氨酰胺15μg/mL。
[0010]进一步地，所述基础培养基为X
‑
VIVO 15培养基。
[0011]本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：一种CAR
‑
T细胞的培养方法，采用上述培养基培养。
[0012]上述CAR
‑
T细胞的培养方法，包括以下步骤：将CAR
‑
T细胞和同等数量的CD3/CD28磁珠加入上述培养基中，在37℃，5%CO2培养箱中培养10天。
[0013]进一步地，所述CAR
‑
T细胞在培养基中浓度为1
‑5×
106个/mL。
[0014]进一步地，培养过程中每隔1
‑
2天补充一次培养基。
[0015]相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：提供一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，培养基中添加尼麦角林、淫羊藿苷，能有效提高CAR
‑
T细胞的增殖活性，在短时间内可收获大量CAR
‑
T细胞。还添加阿魏酸酯有助于提高收获的细胞中活细胞的数量，提高细胞存活率。上述成分和L
‑
2、IL
‑
15、维生素E、L
‑
谷氨酰胺共同作用，提高了CAR
‑
T细胞的增殖活性，培养得到的CAR
‑
T细胞具有较好的杀瘤活性。并且所用成分安全，不添加血浆等血液成分，降低了CAR
‑
T细胞的培养成本，减轻患者负担。
[0016]本专利技术还提供了一种CAR
‑
T细胞的培养方法，操作简便，易于实现，有利于CAR
‑
T细胞在肿瘤免疫治疗领域的推广应用。
具体实施方式
[0017]下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
[0018]实施例1一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，由X
‑
VIVO 15培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林2.8ng/mL、淫羊藿苷8.2ng/mL、阿魏酸酯9.4ng/mL、IL
‑
2 150IU/mL、IL
‑
15 400 IU/mL、维生素E 25μg/mL、L
‑
谷氨酰胺15μg/mL。
[0019]一种CAR
‑
T细胞的培养方法，将分离得到的CAR
‑
T细胞和同等数量的CD3/CD28磁珠加入T75培养瓶的培养基中，CAR
‑
T细胞在培养基中浓度为3
×
106个/mL，在37℃，5%CO2培养箱中培养10天，培养过程中每隔1天补充一次培养基。
[0020]实施例2一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，由X
‑
VIVO 15培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林2.5ng/mL、淫羊藿苷6.8ng/mL、阿魏酸酯8.5 ng/mL、IL
‑
2 100IU/mL、IL
‑
15 300 IU/mL、维生素E 20μg/mL、L本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CAR
‑
T细胞无血清培养基，其特征在于，由基础培养基和添加在培养基中的以下成分组成：尼麦角林、淫羊藿苷、阿魏酸酯、IL
‑
2、IL
‑
15、维生素E、L
‑
谷氨酰胺。2. 根据权利要求1所述CAR
‑
T细胞无血清培养基，其特征在于，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.5
‑
3.5ng/mL、淫羊藿苷6.8
‑
9.6ng/mL、阿魏酸酯8.5
‑
10 ng/mL、IL
‑
2 100
‑
200IU/mL、IL
‑
15 300
‑
500 IU/mL、维生素E 20
‑
30μg/mL、L
‑
谷氨酰胺10
‑
18μg/mL。3.根据权利要求1所述CAR
‑
T细胞无血清培养基，其特征在于，各成分在培养基中浓度为：尼麦角林2.8ng/mL、淫羊藿苷8.2ng/mL、阿魏酸酯9.4ng...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾献芳，郭威，胡玉林，
申请(专利权)人：曾献芳，
类型：发明
国别省市：