一种体细胞核移植方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种体细胞核移植方法及其应用。该方法利用单倍体胚胎干细胞体系获得单等位基因同时敲除26个H3K27me3相关的印记基因中的一个或多个的供体体细胞进行核移植。结果显示，单等位敲除Slc38a2、Slc38a4、Sfmbt2、Etv6、Platr4、Gramd1b、Slc38a1、Gab1、Mbnl2、Smoc1、Bmp7、Rbms1、Fam198b、Sh3gl3、Hunk、Jade1、E2f3、Tle3、Runx1、Epas1、Bbx、Enc1、Inhbb、Sox21、Otx2、Rbp2中的一个或多个(如Sfmbt2、Jade1、Gab1和Smoc1这四个中的一个或多个)H3K27me3的印记基因使得这些基因的印记表达模式趋于正常。同时，利用该供体体细胞进行克隆可以将体细胞克隆效率提升至14％，而野生型的对照组体细胞克隆效率为0。另外，该方法获得的克隆动物，大胎盘

【技术实现步骤摘要】
一种体细胞核移植方法及其应用


[0001]本专利技术涉及动物生物
，具体地，本专利技术涉及一种体细胞核移植方法及其应用。

技术介绍

[0002]体细胞核移植技术(SCNT)可将体细胞核重编程使其达到全能性状态，其在动物育种和再生医学领域中具有巨大的应用潜力(Rideout et al.，2001)。然而，核移植胚胎极低的发育效率和经常观察到的发育异常表明体细胞重编程存在表观遗传障碍(Lu and Zhang,2015)。在这些异常中，大胎综合征(LOS)是最常见的一种，在克隆牛、羊和老鼠中均有发现。该综合症指的是一组异质性的症状，包括出生时体型过大和严重的出生缺陷(Yang et al.，2007)。在鉴定和克服核移植过程中关键的表观遗传障碍方面研究已经取得了进展，包括抑制组蛋白去乙酰化、减少DNA甲基化和去除体细胞异质性的H3K9me3等(Dai et al，2010；Gao et al；2018；Kishigami et al，2006；Matoba et al.，2014)，这些方法均能显著提高核移植胚胎的发育效率，但对所有克隆哺乳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种经修饰的单倍体胚胎干细胞，其中，所述单倍体胚胎干细胞被敲除了选自下列的基因：Slc38a2、Slc38a4、Sfmbt2、Etv6、Platr4、Gramd1b、Slc38a1、Gab1、Mbnl2、Smoc1、Bmp7、Rbms1、Fam198b、Sh3gl3、Hunk、Jade1、E2f3、Tle3、Runx1、Epas1、Bbx、Enc1、Inhbb、Sox21、Otx2、Rbp2，以及其任何组合；任选地，所述单倍体胚胎干细胞中另外的H19和IG被敲除，并且任选地，另外的Rasgrf1被敲除；优选地，所述单倍体胚胎干细胞被敲除了选自下列的基因：Sfmbt2、Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；更优选地，所述单倍体胚胎干细胞中，Sfmbt2被敲除，并且任选地，选自下列的基因被敲除：Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；最优选地，所述单倍体胚胎干细胞中，选自下列的基因或基因组合被敲除：仅敲除Sfmbt2，或者，仅敲除Sfmbt2和Jade1，或仅敲除Sfmbt2和Gab1，或仅敲除Sfmbt2和Smoc1，或者，仅敲除Sfmbt2、Jade1和Gab1，或仅敲除Sfmbt2、Jade1和Smoc1，或仅敲除Sfmbt2、Smoc1和Gab1，或者，Sfmbt2、Jade1、Gab1和Smoc1被同时敲除。2.制备权利要求1所述的经修饰的单倍体胚胎干细胞的方法，其包括：通过基因敲除技术，获得所述经修饰的单倍体胚胎干细胞，其中，所述基因敲除技术将单倍体胚胎干细胞中的选自下列的基因敲除：Slc38a2、Slc38a4、Sfmbt2、Etv6、Platr4、Gramd1b、Slc38a1、Gab1、Mbnl2、Smoc1、Bmp7、Rbms1、Fam198b、Sh3gl3、Hunk、Jade1、E2f3、Tle3、Runx1、Epas1、Bbx、Enc1、Inhbb、Sox21、Otx2、Rbp2，以及其任何组合；任选地，所述基因敲除技术将单倍体胚胎干细胞中另外的H19和IG敲除，并且任选地，将另外的Rasgrf1敲除；优选地，所述基因敲除技术将单倍体胚胎干细胞中的选自下列的基因敲除：Sfmbt2、Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；更优选地，所述基因敲除技术将单倍体胚胎干细胞中的Sfmbt2敲除，并且任选地，将选自下列的基因敲除：Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；最优选地，所述基因敲除技术将单倍体胚胎干细胞中的选自下列的基因或基因组合敲除：仅敲除Sfmbt2，或者，仅敲除Sfmbt2和Jade1，或仅敲除Sfmbt2和Gab1，或仅敲除Sfmbt2和Smoc1，或者，仅敲除Sfmbt2、Jade1和Gab1，或仅敲除Sfmbt2、Jade1和Smoc1，或仅敲除Sfmbt2、Smoc1和Gab1，或者，同时敲除Sfmbt2、Jade1、Gab1和Smoc1；或者优选地，所述基因敲除技术为使用CRISPR的基因敲除技术。3.一种体细胞，其中，所述体细胞被单等位敲除了选自下列的基因：Slc38a2、Slc38a4、Sfmbt2、Etv6、Platr4、Gramd1b、Slc38a1、Gab1、Mbnl2、Smoc1、Bmp7、Rbms1、Fam198b、Sh3gl3、Hunk、Jade1、E2f3、Tle3、Runx1、Epas1、Bbx、Enc1、Inhbb、Sox21、Otx2、Rbp2，以及其任何组合；
任选地，所述体细胞中的另外的H19和IG被单等位敲除，并且任选地，另外的Rasgrf1被单等位敲除；优选地，所述体细胞被单等位敲除了选自下列的基因：Sfmbt2、Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；更优选地，所述体细胞中，Sfmbt2被单等位敲除，并且任选地，选自下列的基因被单等位敲除：Jade1、Gab1、Smoc1，以及其任何组合；最优选地，所述体细胞中，选自下列的基因或基因组合被单等位敲除：仅敲除Sfmbt2，或者，仅敲除Sfmbt2和Jade1，或仅敲除Sfmbt2和Gab1，或仅敲除Sfmbt2和Smoc1，或者，仅敲除Sfmbt2、Jade1和Gab1，或仅敲除Sfmbt2、Jade1和Smoc1，或仅敲除Sfmbt2、Smoc1和Gab1，或者，Sfmbt2、Jade1、Gab1和Smoc1被同时敲除；或者优选地，所述体细胞来源于哺乳动物(优选非人哺乳动物)；更优选地，所述哺乳动物为小鼠、羊、牛、猪或猴子；或者优选地，所述体细胞为成纤维细胞；更优选地，所述成纤维细胞为胎儿或成体成纤维细胞(如尾尖成纤维细胞)。4.制备权利要求3所述的体细胞的方法，其包括：(1)提供权利要求1所述的经修饰的单倍体胚胎干细胞，(2)将所述单倍体胚胎干细胞的细胞核注入到预激活的卵母细胞中，获得第一重构胚胎；(3)将所述第一重构胚胎培养发育成胎儿；(4)从所述胎儿分离获得所述体细胞；优选地，在步骤(3)中，通过使用四倍体囊胚，将所述第一重构胚胎培养发育成胎儿；更优选地，所述方法包括：1)提供权利要求1所述的经修饰的单倍体胚胎干...

【专利技术属性】
技术研发人员：周琪，李伟，王乐韵，李治琨，王立宾，
申请(专利权)人：中国科学院动物研究所，
类型：发明
国别省市：