【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR技术进行多重核酸检测的方法
[0001]本申请是申请日为2021年3月3日、申请号为202110236947.2、专利技术名称为“基于CRISPR技术进行多重核酸检测的方法”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]本专利技术涉及核酸检测领域,涉及基于CRISPR技术进行多重核酸检测的方法,具体涉及基于CRISPR技术进行靶核酸检测的方法、系统和试剂盒,尤其涉及一种基于CRISPR技术进行多重靶核酸检测的方法。
技术介绍
[0003]特异性检测核酸分子(Nucleic acid detection)方法具有重要的应用价值,例如病原体的检测,遗传病检测等。在病原体检测方面,由于每种病原体微生物都有其独一无二的特征核酸分子序列,因此可以开发出针对特定物种的核酸分子检测,也称为核酸诊断(NADs,nucleic acid diagnostics),在食品安全、环境微生物污染检测,人体病原菌感染等领域具有重要义。另一个方面是对人或其他物种的单核苷酸多态性(SNPs,single nucleotidepolymorphisms)的检测。在基因组水平上去理解遗传变异和生物学功能之间的关系为现代分子生物学提供了新视角,而其中SNPs对生物学的功能、进化和疾病等密切相关,因此SNPs的检测与分析技术的发展尤为重要。
[0004]目前建立的特异性核酸分子检测通常需要分为两步,第一步是目的核酸的扩增,第二步是目的核酸检测。现有检测技术包括限制性核酸内切酶方法、Southern、Northern、斑点杂交 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种非疾病诊断目的的检测样品中靶核酸的方法,所述方法包括将样品与核酸检测组合物接触,所述核酸检测组合物包括Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器;所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列;检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号,从而检测靶核酸;所述核酸检测组合物为第二核酸检测组合物;所述第二核酸检测组合物包括Cas12b,可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA,和第二单链核酸检测器;所述第二单链核酸检测器为含有无碱基间隔物的单链核酸检测器,所述含有无碱基间隔物的单链核酸检测器含有1个任意的核苷酸和至少1个无碱基间隔物,所述核苷酸的两端分别连接有至少1个无碱基间隔物;或者,所述第二单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物,所述核酸类似物为锁核酸(LNA)。2.一种非疾病诊断目的的对样品中的靶核酸进行双重检测的方法,所述方法包括将样品与核酸检测组合物接触,所述核酸检测组合物包括Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器;所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列;检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号,从而检测靶核酸;所述核酸检测组合物包括第二核酸检测组合物;所述第二核酸检测组合物包括Cas12b,可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA,和第二单链核酸检测器;所述第二单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物,所述核酸类似物为锁核酸(LNA);所述核酸检测组合物还包括第三核酸检测组合物;所述第三核酸检测组合物包括Cas12a,可以结合Cas12a以及与靶核酸上的第三靶序列杂交的第三gRNA,和第三单链核酸检测器;所述第三单链核酸检测器是含有无碱基间隔物的单链核酸检测器,所述含有无碱基间隔物的单链核酸检测器含有1个核苷酸和至少1个无碱基间隔物,所述核苷酸的两端分别连接有至少1个无碱基间隔物,所述第三单链核酸检测器的核酸的碱基为C或T。3.一种非疾病诊断目的的对样品中的靶核酸进行双重检测的方法,所述方法包括将样品与核酸检测组合物接触,所述核酸检测组合物包括Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器;所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列;检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号,从而检测靶核酸;所述核酸检测组合物包括第二核酸检测组合物;所述第二核酸检测组合物包括Cas12b,可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA,和第二单链核酸检测器;所述第二单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物,所述核酸类似物为锁核酸(LNA);所述核酸检测组合物还包括第四核酸检测组合物;所述第四核酸检测组合物包括Cas12j,可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第四靶序列杂交的第四gRNA,和第四单链核酸检测器;所述第四单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物,所述核酸类似物为2
’
氧甲基RNA;或者,所述第四单链核酸检测器为含有无碱基间隔物的单链核酸检测器,所述含有无碱基间隔物的单链核酸检测器含有1个核苷酸和至少1个无碱基间隔物,所述核苷酸的两端分别
连接有至少1个无碱基间隔物,所述第四单链核酸检测器中的核苷酸的碱基为T。4.一种非疾病诊断目的的对样品中的靶核酸进行双重检测的方法,所述方法包括将样品与核酸检测组合物接触,所述核酸检测组合物包括Cas蛋白、gRNA和单链核酸检测器;所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列;检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号,从而检测靶核酸;所述核酸检测组合物包括第二核酸检测组合物;所述第二核酸检测组合物包括Cas12b,可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第二靶序列杂交的第二gRNA,和第二单链核酸检测器;所述第二单链核酸检测器为含有无碱基间隔物的单链核酸检测器,所述含有无碱基间隔物的单链核酸检测器含有1个核苷酸和至少1个无碱基间隔物,所述核苷酸的两端分别连接有至少1个无碱基间隔物,所述第二单链核酸检测器的核苷酸的碱基为A或G;所述核酸检测组合物还包括第四核酸检测组合物;所述第四核酸检测组合物包括Cas12j,可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第四靶序列杂交的第四gRNA,和第四单链核酸检测器;所述第四单链核酸检测器的核酸结构为核酸类似物,所述核酸类似物为2
’
氧甲基RNA;或者,所述第四单链核酸检测器为含有无碱基间隔物的单链核酸检测器,所述含有无碱基间隔物的单链核酸检测器含有1个核苷酸和至少1个无碱基间隔物,所述核苷酸的两端分别连接有至少1个无碱基间隔物,所述第四单链核酸检测器中的...
【专利技术属性】
技术研发人员:梁亚峰,孙洁,刘锐恒,
申请(专利权)人:山东舜丰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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