重组真菌免疫调节蛋白rFIP-glu的应用制造技术

一种重组真菌免疫调节蛋白rFIP

【技术实现步骤摘要】
重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用


[0001]本专利技术涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种重组灵芝真菌免疫调节蛋白(recombinant FIP
‑
glu，rFIP
‑
glu)在药物化妆品领域的应用。

技术介绍

[0002]灵芝(Ganoderma lucidum)具有滋补强本、固本扶正、养颜安神等功效，其药物疗效逐渐被学者们重视。灵芝中含有多种有效的生物活性成分，包括灵芝多糖、灵芝多肽、灵芝三萜类化合物、蛋白质、氨基酸、微量元素、萜烯酮醇、过氧化麦角甾酵、甘露醇、甾醇、生物碱等。目前，化妆品市场上出现了众多以灵芝为主要添加物的化妆品产品，在化妆品中添加适量的灵芝活性成分正在成为化妆品开发的热点。现有的众多化妆品品牌已经开始利用灵芝提取液进行化妆品开发，多用赤芝或黑灵芝子实体提取物进行开发，添加形式均为子实体提取物，提取效率比较低，导致成本较高以及产品中灵芝提取物添加量偏少，发挥作用有限(王倩,张佳婵,王昌涛,等.灵芝美容护肤作用机制及其在化妆品行业中的发展现状.日用化学工业,2019,049(002):118
‑
125.)。灵芝蛋白种类多样并具有的丰富的生物学功能，其中灵芝真菌免疫调节蛋白(fungal immunomodulatoryprotein from Ganoderma lucidum，FIP
‑
glu)是灵芝蛋白中研究最多，功能相对比较清晰的一种蛋白，灵芝本身该蛋白的含量就比较低，例如，300g湿重的灵芝菌丝体中仅能分离出约5
‑
10mg纯FIP
‑
glu；而编码灵芝蛋白基因的核苷酸序列已经非常清楚，若使用基因工程构建灵芝蛋白工程菌来生产灵芝蛋白，再进行化妆品生产，可以有效减少生产成本。至今为止，编码FIPs的基因在原核生物和真核生物中都得到了成功表达，在植物、酵母、昆虫细胞中均有FIPs表达的相关报道，表达量从6.25～191.2mg/L不等。目前在真菌免疫调节蛋白重组表达中所用的毕赤酵母多为GS115菌株，不同基因来源、相同基因来源、不同基因结构以及不同表达形式等，均会对FIPs的表达量产生较大的影响，要获得一株高产FIPs的酵母转化子，并非是一件容易的事，需要考虑基因结构、启动子、载体等多种因素(WangXF,Su KQ,Bao TW,Cong WR,Chen YF,Li QZ,Zhou XW.Immunomodulatory effects of fungal proteins.Current Topicsin NutraceuticalResearch.2012,10(1):1
‑
11)。
[0003]现有文献分析发现，灵芝化妆品作为一种具有开发潜力和功效性质的化妆品，已经引起了化妆品行业的广泛关注，目前灵芝化妆品的功效性研究主要都集中在抗衰老和抗氧化方面，对其他功效的研究和应用较少，扩大灵芝化妆品功效的研究范围是重要的研究方向。此外，目前灵芝活性成分研究主要集中在灵芝多糖和三萜类成分方面，对其他功效成分，例如多肽、蛋白质的研究应用较少(Zhou XW,Su KQ,Zhang YM.Applied modern biotechnology for cultivation ofGanoderma and development oftheir products.AppliedMicrobiologyandBiotechnology.2012,93(3):941
‑
963.)，加大对灵芝其他生物活性成分的研究可以进一步拓宽灵芝在化妆品中的应用。
[0004]现有专利文献CN202010156003.X提出了一种含灵芝提取物的组合物，将灵芝提取物和灵芝孢子油作为有效成分开发灵芝化妆品；文献一种含有灵芝提取物的化妆品
CN201811239789.0，利用的活性成分也是灵芝及灵芝孢子提取物，文献黑灵芝菌丝发酵液及其制备方法，具有抗氧化及美白功效的化妆品(CN201711251044.1)也利用黑灵芝菌丝发酵液生产多糖和三萜进而应用到化妆品中。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术及应用方向上存在的不足，提供一种重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用，通过基因工程构建的重组灵芝免疫调节蛋白rFIP
‑
glu在毕赤酵母真核表达系统中进行表达并纯化，给药于小鼠黑色素瘤细胞B16和人角质形成细胞Hacat，结果显示重组灵芝免疫调节蛋白rFIP
‑
glu能够抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长，促进人角质形成细胞Hacat细胞的生长；在6μg/mL～48μg/mL范围内能降低B16细胞中的黑色素含量，在48μg/mL的高浓度下rFIP
‑
glu可以显著抑制B16细胞酪氨酸酶的活性，并对黑色素合成相关通路基因的表达产生一定影响。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]本专利技术涉及一种重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用，将其用于制备药妆面膜，从而降低细胞中黑色素含量和促进人角质形成细胞的细胞增殖。
[0008]所述的药妆面膜，其每100mL中组分及质量百分比含量为：A项：甘油2.0～5.0％、乙二胺四乙酸二钠0.01～0.05％、PEG
‑
40氢化蓖麻油0.1～0.2％、黄原胶0.05～0.2％、无水甜菜碱0.25～0.5％、聚乙二醇4002.0～4.0％、羧甲基纤维素钠0.1～0.3％；B项：灵芝蛋白rFIP
‑
glu10
‑
20％；C项：烟酰胺0.25～0.50％、维生素C乙基醚0.25～0.50％、D
‑
泛醇0.25～0.50％、对羟基苯甲酸甲酯0.2～0.6％；余量为水。
[0009]所述的药妆面膜，其制备方法包括：
①
将羧甲基纤维素钠等增稠剂先分散入水中，在75℃水浴锅中加热搅拌至完全溶解，然后向其中加入A项原料；
②
搅拌均匀后降温至40℃再依次加入B项和C项原料，并加水至100mL后搅拌至透明状。
③
用纯棉基布按每份面膜液30
‑
40g充分吸收面膜液，并将基布与剩余的面膜液一起装入面膜袋中，封口即可。
[0010]所述的重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu由通过基因工程构建的重组灵芝免疫调节蛋白毕赤酵母GS115工程菌诱导发酵后分离纯化得到，具体为：首先克隆出灵芝免疫调节蛋白基因(FIP
‑
glu)的核苷酸序列，其次经过基因重组技术构建重组质粒rFIP
‑
glu，然后把重组质粒转化到毕赤酵母GS115中形成真核表达菌株，经毕赤酵母的发酵表达蛋白，再经过纯化过程得到重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu。
[0011]所述的克隆，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用，其特征在于，将其用于制备药物化妆品，从而抑制小鼠黑色素瘤B16细胞生长和促进人角质形成细胞Hacat细胞增殖。2.根据权利要求1所述的重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用，其特征是，所述的药妆面膜，其每100mL中组分及质量百分比含量为：A项：甘油2.0～5.0％、乙二胺四乙酸二钠0.01～0.05％、PEG
‑
40氢化蓖麻油0.1～0.2％、黄原胶0.05～0.2％、无水甜菜碱0.25～0.5％、聚乙二醇4002.0～4.0％、羧甲基纤维素钠0.1～0.3％；B项：灵芝蛋白rFIP
‑
glu10
‑
20％；C项：烟酰胺0.25～0.50％、维生素C乙基醚0.25～0.50％、D
‑
泛醇0.25～0.50％、对羟基苯甲酸甲酯0.2～0.6％；余量为水。3.根据权利要求1或2所述的重组真菌免疫调节蛋白rFIP
‑
glu的应用，其特征是，所述的药妆面膜，其制备方法包括：
①
将羧甲基纤维素钠等增稠剂先分散入水中，在75℃水浴锅中加热搅拌至完全溶解，然后向其中加入A项原料；
②
搅拌均匀后...

【专利技术属性】
技术研发人员：周选围，金梦圆，吴沁，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：