小分子肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种小分子肽及其制备方法和应用，其通式为X

【技术实现步骤摘要】
小分子肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及分子生物
，特别是涉及一种小分子肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肠是动物的主要消化吸收器官，其通过肠上皮细胞吸收营养物质。作为体内更新最快的一类细胞，肠上皮细胞是肠道内外环境的媒介，又是机体免疫屏障的重要组成部分，具有消化、吸收、分泌等生物学功能。肠上皮细胞起源于肠上皮干细胞的分化，肠上皮干细胞位于陷窝基底部，是一类具有自我更新、高度增殖、不对称性分裂和多向分化潜能的细胞。肠上皮干细胞的分化是一个连续的过程，每4～5天的周期内不断被更新，由陷窝底部起始，向肠腔内移行、分化、衰老直至凋亡脱落。小肠是食物消化和吸收的主要场所，由单层柱状上皮细胞覆盖的绒毛和肠腺组成。绒毛为肠上皮和固有层向肠腔内突出形成的细小突起，主要由吸收细胞和杯状细胞构成。吸收细胞数量较多，位于细胞基部，其顶端有微绒毛，集在一起形成“纹状缘”。杯状细胞是一种典型的糖蛋白分泌细胞，内含大量泡状和电子密度不一的粘液颗粒，有润滑和保护小肠黏膜的作用。肠腺又称为肠隐窝，为相对独立的发育单位，可调控肠上皮的更新，主要由吸收细胞、杯状细胞、潘氏细胞、未分化细胞及内分泌细胞构成。潘氏细胞分布于肠腺底部，其胞质丁部有嗜酸性颗粒，含有多种参与消化的酶。未分化细胞位于肠腺基部，为肠上皮的干细胞，可分化为多种不同类型的肠上皮细胞。
[0003]肠上皮细胞是肠道内主要的功能细胞，参与肠道食物的消化、吸收及内外分泌，构成体内的免疫屏障，调控体内免疫水平，并阻止微生物及毒素对肠道的侵袭。在分子水平上，肠上皮细胞分为可吸收的上皮细胞和不可吸收的上皮细胞。可吸收的上皮细胞位于小肠上部隐窝，不可吸收的上皮细胞位于绒毛中部。可吸收的上皮细胞主要参与食物的消化与吸收，如小肠微绒毛表面含有双糖酶、肽酶等，可促进糖和蛋白质的消化吸收。氨基酸、葡萄糖、乳糜微粒、长链脂肪酸等物质可通过位于绒毛内的中央乳糜管及其周围的毛细血管吸收进入血液。杯状细胞分泌粘液，润滑和保护肠上皮黏膜。分泌细胞则可分泌血清素、NT、PYY、P物质等神经肽及胺类激素，并以旁分泌形式调节胃肠运动及腺体分泌等功能。小肠刷状缘含有22中消化酶和19个参与氨基酸、脂酸、碳水化合物、维生素摄取与转运的系统。不可吸收的上皮细胞主要构成肠道内的屏障，参与机体的免疫，如黏膜肥大细胞可释放组织胺、血清素、蛋白酶等，其有助于血清抗体及补体进入肠腔，并清楚肠道内寄生虫及异物等。
[0004]可见，肠上皮细胞是保护人体的一道重要的屏障，而肠上皮细胞的损伤及后续引发的屏障功能的损坏都会引起炎症反应，最终导致相关疾病的发生。近年来，肠上皮细胞损伤相关疾病的患病概率增加，对于相关药物的需求也逐渐增大。

技术实现思路

[0005]基于此，有必要提供一种能够减轻肠上皮细胞损伤和炎症反应的小分子肽。
[0006]本专利技术提供了一种小分子肽，其通式为X
‑
P
‑
Y；其中，所述P的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述X不存在或为Leu
‑
Gln，所述Y不存在或为Ile
‑
Pro。
[0007]在其中一个实施例中，所述小分子肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。
[0008]本专利技术还提供了一种核酸分子，其编码如上所述的小分子肽，或与编码如上所述的小分子肽的核苷酸序列反向互补。
[0009]本专利技术还提供了一种重组载体，所述重组载体含有如上所述的核酸分子的核苷酸序列。
[0010]本专利技术还提供了一种宿主细胞，其基因组中掺有如上所述的核酸分子。
[0011]如上所述的小分子肽、核酸分子、重组载体或宿主细胞在制备用于治疗肠上皮细胞损伤相关疾病的药物中的应用。
[0012]在其中一个实施例中，所述肠上皮细胞损伤相关疾病包括小肠结肠炎。
[0013]本专利技术还提供了一种用于治疗肠上皮细胞炎症相关疾病的药物，包括如上所述的小分子肽，以及药学上可接受的辅料。
[0014]在其中一个实施例中，所述辅料包括稀释剂、防腐剂、缓冲剂、崩解剂、抗氧剂、助悬剂、着色剂和赋形剂中的一种或多种。
[0015]本专利技术还提供了一种如上所述的小分子肽的制备方法，人工合成所述小分子肽，或使用权利要求5所述的宿主细胞进行基因表达获得所述小分子肽。
[0016]本专利技术筛选构建了一个小分子肽，其通式为X
‑
P
‑
Y，其中P的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，X不存在或为Leu
‑
Gln，Y不存在或为Ile
‑
Pro。通过体内实验与体外实验证明，该小分子肽可调节肠上皮细胞凋亡和增殖，还可以减轻肠绒毛结构损伤、炎症细胞浸润，降低炎症因子水平，从而可以用于治疗肠上皮细胞损伤相关疾病，例如可用于改善坏死性小肠结肠炎(NEC)等。
附图说明
[0017]图1为实施例1中各组细胞的凋亡检测结果，证明A肽和B肽都可不同程度降低LPS诱导的细胞凋亡，而B肽效果最为显著；
[0018]图2为实施例1中各组细胞的增殖能力检测结果，证明A肽和B肽都可不同程度使FHC细胞的增殖能力恢复；
[0019]图3为实施例1中各组细胞的TNF
‑
α、IL
‑
6表达水平检测结果，证明A肽和B肽均可不同程度降低NEC模型细胞中TNF
‑
α、IL
‑
6的表达水平，表明肠上皮细胞炎症得到缓解；
[0020]图4为实施例2中各组大鼠的肠组织HE染色结果，证明小分子肽能够明显减轻肠绒毛结构损伤和炎症细胞浸润；
[0021]图5为实施例2中各组大鼠的肠组织病理评分结果；
[0022]图6为实施例2中各组大鼠的TNF
‑
α、IL
‑
6表达水平检测结果，证明A肽和B肽均可以显著降低NEC大鼠血清中TNF
‑
α、IL
‑
6的表达水平。
具体实施方式
[0023]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0024]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0025]相关术语
[0026]“小分子肽”是介于氨基酸与蛋白质之间的一种生化物质，它比蛋白质分子量小，比氨基酸分子量大。小分子肽结构简单、分子量小，可快速透过小肠黏膜吸收而不需要再次消化，也不需要耗费能量，具有100％吸收的特点。小分子肽可以透本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小分子肽，其特征在于，其通式为X
‑
P
‑
Y；其中，所述P的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述X不存在或为Leu
‑
Gln，所述Y不存在或为Ile
‑
Pro。2.根据权利要求1所述的小分子肽，其特征在于，所述小分子肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示。3.一种核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1或2所述的小分子肽，或与编码权利要求1或2所述的小分子肽的核苷酸序列反向互补。4.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有权利要求3所述的核酸分子的核苷酸序列。5.一种宿主细胞，其特征在于，其基因组中掺有权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：章乐，李沄，卜超志，夏静，尹安雯，李征瀛，金未来，
申请(专利权)人：无锡市儿童医院，
类型：发明
国别省市：