一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法技术

本发明专利技术涉及生物材料技术领域，尤其涉及一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，该方法包括以下步骤，第一步，运输保存：将采集去除脂肪的新鲜生物组织材料置于运输保存液中低温运输；第二步，梯度清洗：将经过上述处理的新鲜生物组织材料依次放于清洗液Ⅰ、清洗液Ⅱ中浸泡清洗；第三步，化学交联固定；将经过上述处理的的生物组织材料放于化学交联溶液中固定；该方法可以有效控制生物组织材料中的细菌内毒素。菌内毒素。菌内毒素。

【技术实现步骤摘要】
一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法


[0001]本专利技术涉及生物材料
，尤其涉及一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法。

技术介绍

[0002]内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖，存在于包括大肠杆菌在内的大多数革兰氏阴性菌的细胞壁中，通过细胞裂解而被释放出来。脂多糖由多糖O抗原、核心多糖和类脂A三部分组成，位于革兰氏阴性菌外膜外层。其中类脂A是脂化的葡萄胺二糖，通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物，具有致热作用，是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。内毒素一般以聚体形式存在，其磷酸基团与二价金属离子螯合可进一步稳定内毒素分子间的聚合，促成更大的内毒素复合体。
[0003]目前在生物制药及医疗器械中，内毒素污染广泛存在，微量的内毒素通过血液进入到人体会引起发热，甚至引起死亡。为了保证生物制品及医疗器械的安全性，现有标准(USP27)规定针对直接或者间接接触心血管系统和淋巴系统的产品，限度是0.5EU/ml或者20EU/每个器械。对于接触脑脊液的器械，限度是0.06EU/mL或者2.15EU/每器械。对于直接或者间接接触眼内环境的器械，一个更低的内毒素限度可能是合适的。
[0004]医疗器械中的内毒素主要来源于原材料本身及加工过程外界引入。常用的去除内毒素的方法有酸碱水解、活性炭吸附、超滤、离子交换色谱法、高温、氧化物等，但大多是针对溶液或容器表面。目前关于生物组织材料的内毒素清除方法报导较少，所以如何有效地去除生物组织材料中的内毒素对生物组织材料医疗器械的安全性是至关重要的。
[0005]现有去除生物组织材料中内毒素的相关技术专利仅找到1篇：专利CN105251049 利用离子缓冲溶液对生物医用材料进行浸泡及清洗，此方法虽然操作简单，但对内毒素的清除不能达到更理想的效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，该方法通过对生物组织材料进行梯度清洗，最终使生物组织材料医疗器械达到甚至低于内毒素标准。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术通过下述技术方案得以解决：种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，包括如下步骤：第一步，运输保存：将采集去除脂肪的新鲜生物组织材料置于运输保存液中低温运输；第二步，梯度清洗：将经过上述处理的新鲜生物组织材料依次放于清洗液Ⅰ、清洗液Ⅱ、清洗液Ⅲ中浸泡清洗；第三步，化学交联固定：将经过上述处理的的生物组织材料放于化学交联溶液中固定。
[0008]根据一实施例，所述生物组织材料包括各种同种/异种动物真皮组织、心包膜、心脏瓣膜、血管壁等。
[0009]根据一实施例，所述运输保存液为含有抗生素的等渗离子溶液。
[0010]根据一实施例，上述所述抗生素优选广谱抗生素。
[0011]根据一实施例，所述低温为0℃～10℃（不包括0℃）。
[0012]根据一实施例，所述清洗液Ⅰ为含有表面活性剂的等渗离子溶液。
[0013]在一个优选实施例中，所述清洗液Ⅰ中的表面活性剂优选温和型表面活性剂。
[0014]根据一实施例，所述清洗液Ⅰ中的表面活性剂优选吐温80、TritonX
‑
100。
[0015]根据一实施例，所述清洗液Ⅰ中的表面活性剂的浓度为0.001%～0.01%。
[0016]根据一实施例，所述清洗液Ⅱ为含有表面活性剂的等渗离子溶液。
[0017]根据一实施例，所述清洗液Ⅱ中的表面活性剂优选离子型表面活性剂。
[0018]在一个优选实施例中，上述所述的离子型表面活性剂优选十二烷基硫酸钠。
[0019]根据一实施例，所述清洗液Ⅱ中的表面活性剂的浓度为0.1%～1.0%。
[0020]根据一实施例，所述清洗液Ⅲ为等渗离子溶液。
[0021]根据一实施例，所述清洗液Ⅰ、所述清洗液Ⅱ和所述清洗液Ⅲ中等渗离子溶液中的阳离子选自下列中的一者：钠离子和钾离子。
[0022]根据一实施例，所述清洗液Ⅰ、所述清洗液Ⅱ和所述清洗液Ⅲ中等渗离子溶液中的阴离子选自下列中的一者：氯离子；磷酸根离子；磷酸氢根离子；磷酸二氢根离子；碳酸氢根离子；硫酸根离子。
[0023]根据一实施例，所述化学交联溶液优选戊二醛。
[0024]与现有技术相比，本专利技术通过加入梯度清洗处理过程进行生物组织材料内毒素清除，其优点在于：1. 区别于现有技术，本专利技术的一实施例中在新鲜生物组织材料的运输过程中加入抗生素，抑制细菌繁殖，降低后续去除细菌、内毒素的难度。
[0025]2. 区别于现有技术，本专利技术的一实施例中在采用梯度清洗的方法，多次、多方面、深度对生物组织材料含有的细菌进行清除、裂解和抑制，首先将生物组织材料放入含有低浓度表面活性剂的清洗液Ⅰ中，处理液中低浓度的表面活性剂可以改变细菌表面对水相对亲和性，使菌体更好地分散在水中，易于菌体洗脱下来；然后再将生物组织材料放入含有高浓度表面活性剂的清洗液Ⅱ中，其处理液中高浓度的表面活性剂可以使细菌细胞裂解，蛋白质变性，使大部分细菌裂解死亡；最后将处理后的生物组织材料放入等渗离子溶液清洗，有利于将上述裂解后的细菌内毒素、生物组织细胞内核酸、蛋白质及细胞膜上磷脂等引起热原、免疫及钙化的成分去除，增加材料安全性及耐久性。
[0026]3. 由于新鲜生物组织材料本身携带的细胞膜含有磷脂，而磷脂是引起生物组织材料钙化的主要因素之一，区别于现有技术，本专利技术的一实施例中清洗液Ⅱ中含有高浓度的表面活性剂在裂解细菌的同时还可以裂解新鲜生物组织本身携带的细胞，达到动物源性生物材料抗原的清除。 本申请的实施例能够实现其它未一一列出的有利技术效果，这些其它的技术效果在下文中可能有部分描述，并且对于本领域的技术人员而言在阅读了本申请后是可以预期和理解的。
附图说明
[0027]图1革兰氏阴性菌细胞壁结构及类脂A化学式结构。
[0028]图2为对照组HE染色的示意图。
[0029]图3为试验组HE染色的示意图。
具体实施方式
[0030]下面描述和附图中所阐明的一些具体细节解释了本专利技术指导下的各个实施方式。相关领域技术人员能够在缺少本文所描述的一个或多个细节的情况 下实施本专利技术指导下的其他实施方式。因此，申请人的意图并不是将所附权利要求的范围限定或以任何方式限制至细节的具体描述中。虽然下文参照附图有序地对各步骤的实施过程进行了详尽的描述，但所描述的步骤和步骤顺序及其术语不应该认为是实施本专利技术教导的所有实施方式所必须的。
[0031]同样，可以理解，本文中所使用的词组和用语是出于描述的目的，而不应当被认为是限制性的。本文中的“包括”、“包含”或“具有”及其变型的使用，旨在开放式地包括其后列出的项及其等同项以及附加的项。
[0032]下面将参考本申请的若干方面的不同的实施例和示例对本申请进行更详细的描述。
[0033]本实施本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，包括以下步骤，第一步，运输保存：将采集去除脂肪的新鲜生物组织材料置于运输保存液中低温运输；第二步：梯度清洗：将上述去除脂肪的新鲜生物组织材料依次放于清洗液Ⅰ、清洗液Ⅱ、清洗液Ⅲ中浸泡清洗；第三步，化学交联固定：将经过上述处理的的生物组织材料放于化学交联溶液中固定。2.根据权利要求1所述的一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，其特征在于，所述生物组织材料包括各种同种/异种动物真皮组织、心包膜、心脏瓣膜、血管壁。3.根据权利要求1所述的一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，其特征在于，所述运输保存液为含有抗生素的等渗离子溶液。4.根据权利要求1所述的一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，其特征在于，所述清洗液Ⅰ和所述清洗液Ⅱ均为含有表面活性剂的等渗离子溶液。5.根据权利要求4所述的一种有效控制生物组织材料中细菌内毒素的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭改，王娜，卢鹏哲，
申请(专利权)人：宁波健世科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：