GLP-1和FGF21的融合蛋白的缀合物制造技术

本公开提供了包含GLP

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】GLP
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1和FGF21的融合蛋白的缀合物
专利

[0001]本专利技术涉及融合蛋白的缀合物、其药物组合物和使用此类物质预防和/或治疗疾病的方法。

技术介绍

[0002]胰高血糖素样肽
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1(GLP
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1)的主要生物活性片段是衍生自胰高血糖素原肽的翻译后加工的30或31个氨基酸的肽片段(GLP
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1的氨基酸7
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36或7
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37)。最初的GLP
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1产品GLP
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1刺激胰岛素合成和分泌，并且已显示预防糖尿病，尤其2型糖尿病中的高血糖症。然而，内源性GLP
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1仅具有大致2分钟的半衰期，这导致GLP
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1的空腹血浆水平仅为0
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15pmol/L。
[0003]成纤维细胞生长因子21(FGF 21)，成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员，是若干代谢活性器官中合成的激素，并且调节葡萄糖和脂质稳态。FGF21因在多个靶器官中的多样代谢功能的缘故，其生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽缀合物，其包含与至少一个清除率降低部分(CRM)缀合的融合多肽，其中所述融合多肽从N端到C端包含GLP
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1、多肽接头和FGF21或基本上由其组成；其中所述至少一个CRM与所述融合多肽中的至少一个可缀合残基缀合；并且其中所述多肽接头的长度为至少0
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120个氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头的长度为至少4、5、8、10、20、24、28、30、40、48、50、60、70、80、90、100、110或120个氨基酸残基。3.根据权利要求1所述的多肽缀合物，其中所述多肽缀合物不包含抗体片段(例如Fc)。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含至多一个可缀合残基或至多两个可缀合残基。5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含与CRM缀合的第一可缀合残基，并且其中所述第一可缀合残基在所述FGF21中、在所述多肽接头中或在所述GLP
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1中。6.根据权利要求4所述的多肽缀合物，其中所述融合多肽包含第一可缀合残基和第二可缀合残基，其中：1)两个可缀合残基均存在于所述多肽接头中，2)两个可缀合残基均存在于所述FGF21中，3)两个可缀合残基均存在于所述GLP
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1中，4)所述第一可缀合残基存在于所述FGF21中并且所述第二可缀合残基存在于所述多肽接头中，5)所述第一可缀合残基存在于所述GLP
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1中并且所述第二可缀合残基存在于所述FGF2中，或6)所述第一可缀合残基存在于所述GLP
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1中并且所述第二可缀合残基存在于所述多肽接头中。7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽缀合物，其中所述第一可缀合残基为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基，或所述第一可缀合残基和所述第二可缀合残基均为赖氨酸、半胱氨酸或非天然氨基酸残基。8.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含与SEQ ID NO:36具有至少90％序列同一性的氨基酸序列同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性，和/或所述GLP
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1包含与SEQ ID NO:50具有至少70％序列同一性的氨基酸序列同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性。9.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1相对于SEQ ID NO:50包含不超过9、8、7、6、5、4、3个突变并同时保留SEQ ID NO:50的基本生物活性，和/或所述FGF21相对于SEQ ID NO:36包含不超过12、11、10、9、8、7个突变并同时保留SEQ ID NO:36的基本生物活性。10.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的121、168、171、180和181的位置处包含一个或多个突变。11.根据权利要求10所述的多肽缀合物，其中FGF21中的所述一个或多个突变选自N121Q、M168L、P171G、A180E和del181S，或其任何组合。12.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21不包含可缀合残基
或包含至多一个可缀合残基。13.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基位于选自相对于SEQ ID NO:36的位置170、171、172、173、174、180、181、71和182的位置。14.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。15.根据权利要求14所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基为赖氨酸。16.根据权利要求15所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170K、P171K、S172K、Q173K、G174K、A180K、S181K、S71K和ins182K。17.根据权利要求15或16所述的多肽缀合物，其中所述FGF21在选自相对于SEQ ID NO:36的K56、K59、K69和K122位置处进一步包含一个或多个突变，所述突变是突变为不可缀合残基。18.根据权利要求17所述的多肽缀合物，其中所述不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。19.根据权利要求18所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含K56R、K59R、K69R和K122R的突变。20.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：1)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R和122R；2)121Q、168L、171K、56R、59R、69R和122R；3)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R和122R；4)121Q、168L、171K、56R、59R、69R、122R和180E；5)121Q、168L、174K、171G、56R、59R、69R、122R和180E；6)121Q、168L、180K、56R、59R、69R和122R；7)121Q、168L、180K、171G、56R、59R、69R、122R和del181S；8)121Q、168L、170K、56R、59R、69R和122R；9)121Q、168L、170K、56R、59R、69R、122R和180E；10)121Q、168L、170K、171G、56R、59R、69R、122R和180E11)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和181K；12)121Q、168L、180E、171G、56R、59R、69R、122R和ins182K13)71K、121Q、168L、56R、59R、69R和122R；14)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R和122R；以及15)71K、121Q、168L、171G、56R、59R、69R、122R、180E。21.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含选自SEQ ID NO:37
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46和118
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119的氨基酸序列。22.根据权利要求14所述的多肽缀合物，其中FGF21中的所述可缀合残基为半胱氨酸。23.根据权利要求22所述的多肽缀合物，其中所述FGF21中的所述可缀合残基相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的取代：G170C、P171C、S172C、Q173C、G174C、A180C、S181C、S71C
和ins182C。24.根据权利要求12、22和23中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21相对于SEQ ID NO:36包含选自下组的突变组合或由其组成：1)121Q、168L、171C、180E；2)121Q、168L、171G、174C、180E；3)121Q、168L、171G、180C；4)121Q、168L、171G、180E；5)71C、121Q、168L、171G、180E；以及6)121Q、168L、180E、171G、ins 182C。25.根据权利要求12和22至24中任一项所述的多肽缀合物，其中所述FGF21包含选自SEQ ID NO:136
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140和171的氨基酸序列。26.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1在选自下组的位置处包含一个或多个突变：A8、G22、K34、R36和H7，或其任何组合，相对于SEQ ID NO:50。27.根据权利要求26所述的多肽缀合物，其中所述一个或多个突变选自下组：H7IA、H7IPA、A8G、G22E、K34R和R36G，或其任何组合。28.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基。29.根据权利要求28所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基为赖氨酸。30.根据权利要求29所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基包含以下或由以下组成：K26或K34，相对于SEQ ID NO:50。31.根据权利要求29所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。32.根据权利要求26所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基通过选自下组的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的E27K和R36K。33.根据权利要求30至32中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1进一步包含将K26和/或K34取代为不可缀合残基，条件是如果K26或K34为所述可缀合残基，则其不被取代。34.根据权利要求33所述的多肽缀合物，其中所述不可缀合残基选自下组：精氨酸(R)、谷氨酰胺(Q)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、组氨酸(H)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)。35.根据权利要求33或34所述的多肽缀合物，其中K26的取代选自K26R和K26Q，和/或K34处的取代选自K34R和K34Q。36.根据权利要求28所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基包含半胱氨酸或非天然氨基酸或由其组成。37.根据权利要求36所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26、K34、E27和R36。38.根据权利要求37所述的融合多肽，其中所述GLP
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1中的所述可缀合残基包含半胱氨酸或由其组成，并且是通过选自下组的位置处的取代引入：相对于SEQ ID NO:50的K26C、K34C、E27C和R36C。
39.根据权利要求26至38中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1包含氨基酸序列X7X8EGTFTSDVSSYLEX22QAAX26X27FIAWLVX34GX36G(SEQ ID NO:51)，其中：X7为H、咪唑
‑4‑
乙酸(IA)或咪唑丙酸(IPA)；X8为A、G、S、V、Aib、T、I或L；X22为G或E；X26为K、R或C；X27为E、K或C；X34为R、K或C，并且X36为K、R、G或C。40.根据权利要求39所述的多肽缀合物，其中X7为H，X8为G，X22为E；X26为K或R；X27为E；X34为R，并且X36为G。41.根据权利要求26至35、39和40中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:52、53和115。42.根据权利要求36至40中任一项所述的多肽缀合物，其中所述GLP
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1包含SEQ ID NO:120或52的氨基酸序列。43.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头包含重复序列的一个或多个单元。44.根据权利要求43所述的多肽缀合物，其中所述重复序列由不超过4、5或6种类型的选自下组的氨基酸残基组成：G、Q、A、E、P、T和S。45.根据权利要求43所述的多肽缀合物，其中所述重复序列包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：G
a
S
b
、SEQ ID NO:65(GAQP)、SEQ ID NO:92(GQEP)、SEQ ID NO:93(GEQP)、SEQ ID NO:94(GPQE)、SEQ ID NO:95(GPEQ)、SEQ ID NO:96(GSEP)、SEQ ID NO:97(GESP)、SEQ ID NO:98(GPSE)、SEQ ID NO:99(GPES)、SEQ ID NO:100(GQAP)、SEQ ID NO:101(GPAQ)、SEQ ID NO:102(GPQA)、SEQ ID NO:103(GSQP)、SEQ ID NO:104(GASP)、SEQ ID NO:105(GPAS)、SEQ ID NO:106(GPSA)、SEQ ID NO:107(GGGS)、SEQ ID NO:108(GSGS)、SEQ ID NO:57(GGGGS)、SEQ ID NO:143(GSAPGSPAGSPTGSAPGSPA)以及GS，其中a和b独立地为选自1到5的整数。46.根据权利要求43至45中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头包含选自SEQ ID NO:54
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65、109
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113、3、47
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49和141
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147的氨基酸序列。47.根据前述权利要求中任一项所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头不包含可缀合残基或包含至多一个可缀合残基，或至多两个可缀合残基。48.根据权利要求47所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基包含引入的残基，任选地是通过取代或通过插入。49.根据权利要求48所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基是所述多肽接头的最C端残基，或与所述GLP
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1的最C端残基相距至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个残基(包括可缀合残基)。50.根据权利要求48或49所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基为赖氨酸，并且所述多肽接头包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:66
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75和89
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91。51.根据权利要求48或49所述的多肽缀合物，其中所述多肽接头中的所述可缀合残基为半胱...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴心乐，邹海霞，张媛媛，吴博，郭威，
申请(专利权)人：北京质肽生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：