环状RNAhsa_circ_0003552的应用及检测其的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了与环状RNA hsa_circ_0003552特异性杂交的引物或探针在制备诊断宫颈癌的试剂盒中的应用。所述环状RNA hsa_circ_0003552相应的线性脱氧核糖核苷酸序列含有如SEQ ID NO:1的核苷酸序列；所述试剂盒用于包括如下步骤的方法：a)分析患者样本中所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平；b)确定所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平是否显著高于健康对照。本发明专利技术的应用有效解决了现有技术上环状RNA利用的不足，且可以高效、准确地对存在宫颈癌癌细胞的组织进行检测。准确地对存在宫颈癌癌细胞的组织进行检测。准确地对存在宫颈癌癌细胞的组织进行检测。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA hsa_circ_0003552的应用及检测其的试剂盒


[0001]本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及一种特异性检测环状RNA hsa_circ_0003552含量的试剂在制备诊断宫颈癌的试剂盒中的应用、检测环状RNA hsa_circ_0003552的试剂在在筛选治疗宫颈癌药物中的应用、含特异性检测环状RNA hsa_circ_0003552含量的试剂的试剂盒，还涉及一种体外构建宫颈癌细胞模型的方法。

技术介绍

[0002]宫颈癌(Cervical Cancer,CC)是全球女性高发癌症之一，具有较高的发病率与死亡率。局部晚期宫颈癌控制率低、侵袭度高，肿瘤细胞通过各种途径转移播散至邻近和远处器官，如盆腔淋巴结，腹膜后等，进而造成新的肿瘤出现，治疗效果差。因此，对于宫颈癌而言，深入研究复发和转移的分子机制以开发更有效的治疗方案，准确进行疗效监测与预后评估，有助于进一步降低死亡率。目前常见的宫颈癌预后评估指标主要包括FIGO分期，淋巴结转移，间质浸润深度，肿瘤大小，脉管瘤栓等高危因素，但这些临床病理特征在预后评估方面尚不够精确，利用分子生物学技术确定可靠的标志物有助于更早更准确地预测临床结局，也为靶向治疗和评价疗效提供一定的参考机制。然而，现有的肿瘤标志物敏感性和特异性有限，迫切需要探索新的生物标志物以提供更灵敏更有针对性的信息。深入开展基础研究，寻找和鉴定宫颈癌转移复发的关键调控分子与生物标志物，探讨其临床应用价值，这对于开发精准而高效的治疗方法、改善临床晚期转移性宫颈癌患者治疗不佳的现状具有重要意义。
[0003]环状RNA(circularRNAs,circRNAs)是一类不具有5
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末端帽子和3
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末端poly(A)尾巴、并以共价键形成环形结构的客观存在于生物体内的非编码RNA分子。与传统的线性RNA(linear RNA)不同，circRNAs分子表达更稳定，不受RNA外切酶影响。CircRNAs通过非经典剪接方式进行反向剪接形成。现有研究证实，circRNA可充当miRNA海绵或诱饵，与RNA结合蛋白相互作用，甚至翻译功能肽，广泛参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、侵袭转移等多种病理生理的调控。同时circRNAs具有内源性、丰富、保守、稳定等特点，且既可在癌症组织中特异表达，也存在于唾液、尿液、血液中。CircRNAs的以上特性，使其具有作为肿瘤诊断标志物和应用治疗的潜能。
[0004]截至目前为止，越来越多的研究提示，circRNA参与调控了宫颈癌相关的基因表达与信号转导，影响宫颈癌的发生发展。例如，hsa_circ_0000263在宫颈癌中高表达，与miR
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5p竞争MDM4 mRNA作用位点，进而上调MDM4以限制抑癌基因p53基因的表达，形成hsa_circ_0000263/miR
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5p/MDM4/p53调控网络(PMID:30569515)；hsa_circ_000284通过海绵作用，与miR
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506竞争，上调Snail
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2基因表达(PMID:29511454)；hsa_circ_101996作为miR
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8075的海绵，可通过抑制miR
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8075表达，激活TPX2基因的表达(PMID:30633364)。上述circRNAs的异常高表达最终影响宫颈癌细胞的增殖、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡等生理过程。这些研究揭示了circRNAs可能在宫颈癌的发生发展中发挥重要作用，它具有成为诊断和治疗的分子标记物的潜能。但总体而言，当前对circRNAs在宫颈癌中的研究仍不够全面
与深入，circRNAs在宫颈癌中的分子机制仍处于基础研究阶段，对circRNAs是否可作为宫颈癌肿瘤诊断标志物等方面存在较大研究空间。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中对环状RNA(circRNA)研究不够全面与深入、缺少宫颈癌诊断标志物的缺陷，本专利技术的专利技术人发现了环状RNA hsa_circ_0003552与宫颈癌之间存在关联，由此本专利技术提供了一种环状RNA hsa_circ_0003552的应用及检测其的试剂盒。环状RNA hsa_circ_0003552经验证，可以作为宫颈癌检测的有效标志物，且在非宫颈癌细胞中表达量很低，环状RNA hsa_circ_0003552的应用大大提高宫颈癌检测的准确性。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案之一为：特异性检测环状RNA hsa_circ_0003552含量的试剂在制备诊断宫颈癌的试剂盒中的应用，所述环状RNA hsa_circ_0003552相应的线性脱氧核糖核苷酸序列含有如SEQ ID NO:1的核苷酸序列；
[0007]所述试剂盒用于包括如下步骤的方法：
[0008]a)分析患者样本中所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平；
[0009]b)确定所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平是否显著高于健康对照。
[0010]本专利技术中，所述显著是指在本领域中具有统计学上差异，例如P值小于0.05、P值小于0.01。
[0011]本专利技术中，所述健康对照是指宫颈癌病例的非癌变正常细胞，包括未癌变的癌旁细胞。
[0012]一般地，当所述表达水平高于健康对照时，所述患者样本中包含宫颈癌细胞；当所述表达水平低于或等于健康对照时，所述患者样本中不包含宫颈癌细胞。优选地，所述健康对照为同一患者的健康组织，以避免个体差异对表达水平差异产生影响。
[0013]较佳地，所述宫颈癌为HPV阳性宫颈癌，所述HPV阳性宫颈癌优选为宫颈鳞状细胞癌。
[0014]在本专利技术一具体实施方案中，所述试剂为与环状RNA hsa_circ_0003552特异性杂交的引物或探针。较佳地，所述引物分别含有如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。
[0015]较佳地，所述样本选自以下的组，所述组包括：子宫组织、淋巴结、尿液、精液、血液、血清、血浆、血液或者淋巴中的循环肿瘤细胞，包含转移瘤的组织，以及包含宫颈癌细胞或者其部分的来源，以及来自宫颈癌细胞的游离的或与蛋白质结合的RNA分子；
[0016]较佳地，所述样本为活检材料。
[0017]在本专利技术一具体实施方案中，所述表达水平的分析可按照本领域对细胞RNA分析的方法进行，例如通过qRT
‑
PCR进行。
[0018]为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案之二为：测定环状RNA hsa_circ_0003552表达量的试剂在筛选治疗宫颈癌药物中的应用，所述环状RNA hsa_circ_0003552相应的线性脱氧核糖核苷酸序列含有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。
[0019]较佳地，所述试剂为与环状RNA hsa_circ_00035本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.特异性检测环状RNA hsa_circ_0003552含量的试剂在制备诊断宫颈癌的试剂盒中的应用，所述环状RNA hsa_circ_0003552相应的线性脱氧核糖核苷酸序列含有如SEQ ID NO:1的核苷酸序列；所述试剂盒用于包括如下步骤的方法：a)分析患者样本中所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平；b)确定所述环状RNA hsa_circ_0003552的表达水平是否显著高于健康对照。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌为HPV阳性宫颈癌，所述HPV阳性宫颈癌优选为宫颈鳞状细胞癌。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述试剂为与环状RNA hsa_circ_0003552特异性杂交的引物或探针；较佳地，所述引物分别含有如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列。4.如权利要求1
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3任一项所述的应用，其特征在于，所述样本选自以下的组，所述组包括：子宫组织、淋巴结、尿液、精液、血液、血清、血浆、血液或者淋巴中的循环肿瘤细胞，包含转移瘤的组织，以及包含宫颈癌细胞或者其部分的来源，以及来自宫颈癌细胞的游离的或与蛋白质结合的RNA分子；和/或，所述样本为活检材料。5.如权利要求1
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4任一项所述的应用，其特征在于，所述表达水平的分析通过qRT
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PCR进行。6.测定环状RNA hsa_circ_0003552表达量的试剂在筛选治疗宫颈癌药物中的应用，所述环状RNA hsa_circ_0003552相应的线性脱氧核糖核苷酸序列含有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂为与环状RNA hsa_circ_0003552特异性杂交的引物或探针；优选地，所述引物分别含有如SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁奕，范许云，方军，高凡雅，尚晓喻，何胜祥，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：