人白血病FLT3基因内部串联重复突变检测的引物探针组合、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人白血病FLT3基因内部串联重复突变检测的引物探针组合、试剂盒及应用。引物探针组合中，引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；探针序列如SEQ ID NO.3所示。试剂盒为微滴式数字PCR检测试剂盒，包含FLT3基因的引物探针组合和内参基因RPP30的引物探针组成的检测混合液、反应预混液、阴性质控品、空白对照。本发明专利技术的引物探针组合及试剂盒用于检测人白血病FLT3基因内部串联重复突变，具有检测过程简单高效、绝对定量、灵敏度和准确性高等优点，对于携带FLT3

【技术实现步骤摘要】
人白血病FLT3基因内部串联重复突变检测的引物探针组合、试剂盒及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种人白血病FLT3基因内部串联重复突变检测的引物探针组合、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]FLT3基因位于染色体13q12.2，有24个外显子，编码的蛋白属于III型受体酪氨酸激酶家族成员之一，全称是FMS样酪氨酸激酶3(FMS
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like tyrosinekinase 3)，在造血细胞存活、增殖和分化中起重要作用。据2015年中国肿瘤统计报告，中国白血病发病人数为75300/年，死亡人数为53400/年，其中成人急性髓系白血病(AML)约占成人白血病的65％，儿童AML约占儿童白血病的25％。而在约三分之一的AML患者中存在FLT3基因内部串联重复(ITD)突变，该突变主要发生在FLT3基因13
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15号外显子区域，而重排断裂末端位置主要位于在14号外显子上，插入的重复突变序列长度可以从几bp到几百bp，是激活突变最常见的类型(Leukemia Research 36(2012)31本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人白血病FLT3基因内部串联重复突变检测的引物探针组合，其特征在于，所述FLT3基因的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述探针序列如SEQ ID NO.3所示。2.一种人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述引物探针组合；所述试剂盒还包括内参基因RPP30的引物探针；所述试剂盒为微滴式数字PCR检测试剂盒。3.根据权利要求2所述人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，所述内参基因RPP30的引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，探针序列如SEQ ID NO.6所示。4.根据权利要求2或3所述人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，所述FLT3基因的引物探针组合、内参基因RPP30的引物探针以混合液的形式存在：FLT3基因检测混合液A，由所述SEQ ID NO.1
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6的引物和探针组成；FLT3
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ITD突变检测混合液B，由所述SEQ ID NO.2
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6的引物和探针组成；所述引物探针组合中的探针和内参基因RPP30的探针连接荧光标记基团。5.根据权利要求4所述人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，所述FLT3基因检测混合液A、FLT3
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ITD突变检测混合液B中，引物、探针的浓度分别为900nM、250nM；引物探针组合中的探针采用FAM、BHQ1标记，内参基因RPP30的探针采用VIC、MGB标记。6.根据权利要求4所述人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应预混液，由buffer、0.2mMdNTPs、2Utaq酶、2UUDG酶组成；所述试剂盒还包括阴性质控品，为野生型FLT3序列的重组质粒和内参基因RPP30重组质粒的混合物；所述试剂盒还包括空白对照，为无核酶水。7.根据权利要求6所述人白血病FLT3基因内部串联重复突变的检测试剂盒，其特征在于，所述野生型FLT3序列如SEQ ID NO.7所示；所述内参基因RPP30序列如SEQ ID NO.8所示；所述野生型FLT3序列的重组质粒和内参基因RPP30重组质粒的采用的质粒为pUC57；所述野生型FLT3序列的重组质粒和内参基因RPP30重组质粒的的摩尔比为10％。8.权利要求1所述引物探针组合、2
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7任一项所述试剂盒在检测人白血病FLT3基因内部串联重复突变中的应用。9.一种检测人白血病FLT3基因内部串联重复突变的方法，采用权利要求4
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7任一项所述试剂盒进行微滴式数字PCR检测，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)突变...

【专利技术属性】
技术研发人员：李静芳，许少飞，罗景燕，赖炳权，
申请(专利权)人：广州永诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：