一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法技术

本发明专利技术属于药用植物组织培养技术领域，尤其涉及一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法，包括如下步骤：1)采集淫羊藿幼嫩根状茎，去掉叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡30min，并用刷子轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上，消毒，用无菌手术剪剪掉根状茎两端各2mm，得到带完整芽点的无菌茎段，备用；2)将步骤1)获得的无菌茎段垂直接种到诱导培养基上培养，诱导出芽；3)将步骤2)获得的萌蘖芽切为单个芽点，垂直接种到增殖培养基上培养，得到淫羊藿丛生芽；本发明专利技术方法可获得淫羊藿快速增殖的方法，可为淫羊藿人工繁育提供优质种苗，解决了淫羊藿因种子采集困难、发芽率低而育苗困难的难题。率低而育苗困难的难题。率低而育苗困难的难题。

【技术实现步骤摘要】
一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法


[0001]本专利技术属于药用植物组织培养
，尤其涉及一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法。

技术介绍

[0002]柔毛淫羊藿为《中华人民共和国药典》(2020年版)淫羊藿收载品种原植物之一，是我国传统中药材，主要有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效，在我国已有2000多年的应用历史。现代科研人员在其体内发现总黄酮、多糖、生物碱等多种生理活性的化学成分,目前在传统医学及现代医学中应用广泛。当前淫羊藿的市场需求量约为5000吨/年,主要的获取方式仍然为采挖野生资源,随着采挖量增大和人们的无序采挖，野生淫羊藿资源的不断减少，非常不利于资源的再生和可持续利用。因此人工引种栽培淫羊藿就显得迫在眉睫。
[0003]自然条件下，柔毛淫羊藿种子由于自然休眠及种胚后熟作用，种子萌发率极低且发芽周期长，非常不利于淫羊藿的规模化种植。现在淫羊藿人工种植基本采用分株繁殖的方式，长期无性繁殖容易导致品种退化，药材产量、质量下降。

技术实现思路

[0004]本专利技术方法可获得淫羊藿无菌体系及快速增殖的方法，可为淫羊藿人工繁育提供优质种苗，解决了淫羊藿因种子采集困难、发芽率低而育苗困难难题。
[0005]本专利技术提供了一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法，包括如下步骤：
[0006]1)采集淫羊藿幼嫩根状茎，去掉叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡30min，并用刷子轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上，用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再消毒，用无菌手术剪剪掉根状茎两端各2mm，得到带完整芽点的无菌茎段，备用；
[0007]2)将步骤1)获得的无菌茎段垂直接种到诱导培养基上培养，诱导出芽；所述诱导培养基为MS+0.5
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2.0mg/L 6
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BA+0.3
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1.1mg/L IBA+40
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70mg/L PVP+80
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140mg/L链霉素+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖；
[0008]3)将步骤2)获得的萌蘖芽切为单个芽点，垂直接种到增殖培养基上培养，在温度为25℃、光照强度为2300
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2500lx、光照时长为12h/d条件下培养28d，得到淫羊藿丛生芽；所述增殖培养基为MS+1.5
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2.5mg/L6
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BA+0.3
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0.9mg/L NAA+60mg/L PVP+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖。
[0009]进一步地，在步骤1)中，所述再消毒的方法为：用质量分数为0.1％升汞消毒4min，无菌水冲洗5次，再次用质量分数为0.1％升汞消毒2.5min，无菌水冲洗5次。
[0010]进一步地，在步骤2)中，所述培养条件为在25℃条件下暗培养7d，然后将培养基转至25℃、光照强度2300
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2500lx，光照时长12h/d条件下培养18d。
[0011]进一步地，在步骤2)中，所述诱导培养基为：MS+1.5mg/L 6
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BA+0.8mg/L IBA+
60mg/L PVP+120mg/L链霉素+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖，调节pH为5.8。
[0012]进一步地，在步骤3)中，所述增殖培养基为：MS+2.0mg/L 6
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BA+0.5mg/L NAA+60mg/L PVP+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖，调节pH为5.8。
[0013]本专利技术的有益效果是：本专利技术采用淫羊藿的芽为外植体，通过丛生芽途径建立柔毛淫羊藿的快速增殖无菌体系；结合消毒、诱导培养与增殖培养建立柔毛淫羊藿的快速增殖无菌体系，降低污染率，提高淫羊藿的产量及质量；本专利技术流程简单，繁殖周期短，为淫羊藿种苗繁育及规模化繁殖提供技术指导，解决了淫羊藿种子发芽率低，发芽周期长而导致的育苗难的问题，降低了淫羊藿种苗繁育成本，为淫羊藿人工繁育提供优质种苗。
附图说明
[0014]图1为本专利技术升汞消毒组合对外植体消毒影响折线图。
具体实施方式
[0015]以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0016]除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0017]本专利技术提供一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法，包括如下步骤：
[0018]1)采集淫羊藿幼嫩根状茎，去掉叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡30min，并用刷子轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上，用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再消毒，用无菌手术剪剪掉根状茎两端各2mm，得到带完整芽点的无菌茎段，备用；
[0019]2)将步骤1)获得的无菌茎段垂直接种到诱导培养基上培养，诱导出芽；所述诱导培养基为MS+0.5
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2.0mg/L 6
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BA+0.3
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1.1mg/L IBA+40
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70mg/L PVP+80
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140mg/L链霉素+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖；
[0020]3)将步骤2)获得的萌蘖芽切为单个芽点，垂直接种到增殖培养基上培养，在温度为25℃、光照强度为2300
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2500lx、光照时长为12h/d条件下培养28d，得到淫羊藿丛生芽；所述增殖培养基为MS+1.5
‑
2.5mg/L6
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BA+0.3
‑
0.9mg/L NAA+60mg/L PVP+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖。
[0021]用无菌手术剪剪掉根状茎两端各2mm的作用是切除受消毒剂刺激较严重的部分，保证无菌茎段后续正常培养；
[0022]其中，MS培养基是一种植物组织培养技术中常用基本培养基配方，内容组成固定不变，其配方如表1所示：
[0023]表1MS培养基成分表
[0024][0025]此外，6
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BA(6
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苄氨基腺嘌呤)是植物细胞分裂素的一种，可促进植物细胞分裂及伸长在茎尖或芽培养中，可以打破顶端优势，促进侧芽和丛生芽的产生于增殖；
[0026]IBA(吲哚丁酸)是植物生长素的一种，可促进植物苗芽再生与增殖；
[0027]PVP(聚乙烯吡咯烷酮K30)，对外植体褐化有抑制效果，其作用机理为PVP为酚类物质的专一吸附剂，PVP中CO
‑
N＝基有很强的络合多酚化合物的能力，它能使多酚化合物不能成为多酚氧化酶的底物，从而抑制褐化的发生；
[0028]链霉素，72％硫酸链霉素，对细菌有抑制效果，诱导培养基中添加适量浓度的链霉素可抑制外植体内生菌污染，降低污染率，提高诱导率；
[0029]N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种柔毛淫羊藿无菌体系的建立及快速增殖的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采集淫羊藿幼嫩根状茎，去掉叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡30min，并用刷子轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上，用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再消毒，用无菌手术剪剪掉根状茎两端各2mm，得到带完整芽点的无菌茎段，备用；2)将步骤1)获得的无菌茎段垂直接种到诱导培养基上培养，诱导出芽；所述诱导培养基为MS+0.5
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2.0mg/L6
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BA+0.3
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1.1mg/L IBA+40
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70mg/L PVP+80
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140mg/L链霉素+5.8g/L琼脂+30g/L蔗糖；3)将步骤2)获得的萌蘖芽切为单个芽点，垂直接种到增殖培养基上培养，在温度为25℃、光照强度为2300
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2500lx、光照时长为12h/d条件下培养28d，得到淫羊藿丛生芽；所述增殖培养基为MS+1.5
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2.5mg/L 6
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BA+0.3
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0.9mg/L NAA+60mg/L P...

【专利技术属性】
技术研发人员：林良科，王旭东，
申请(专利权)人：四川协力制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：