一种手参组织培养无菌体系建立的方法技术

本发明专利技术属于中药材植物组织培养技术领域，尤其涉及一种手参组织培养无菌体系建立的方法，包括如下步骤：1)采集：采集有1

【技术实现步骤摘要】
一种手参组织培养无菌体系建立的方法


[0001]本专利技术属于中药材植物组织培养
，尤其涉及一种手参组织培养无菌体系建立的方法。

技术介绍

[0002]手参为蒙、藏药，又名掌参、佛手参、阴阳参，为兰科手参属植物手参 (Gymnadenia conopsea)的块根。为多年生草本，因形如而得名。据有关资料报道，手参在我国东北及河北、河南、山西、陕西、甘肃、四川、云南、西藏等地均有分布，但数量很少，自然繁殖十分困难。手参具有补血益气、生津止渴等功效，主治肺虚咳喘、虚劳消瘦和神经衰弱等。
[0003]在现有技术中，手参的繁殖以分株为主，可将块茎切成小块种植，但此种方式不仅容易造成病毒感染，且繁殖系数较低，难以满足大规模生产的需要随着连年采挖，野生资源日趋枯竭，远不能满足市场需求，因此，其组织培养研究日益受到人们的关注。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了解决上述技术问题提供一种手参组织培养无菌体系建立的方法。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种手参组织培养无菌体系建立的方法，包括如下步骤：
[0006]1)采集：采集有1
‑
2cm长健壮芽的手参，经初步清洗后将芽从手参上完整的分离下来，轻剥去掉最外层1
‑
2层叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上；
[0007]2)消毒：用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％氯化汞消毒5
‑
10min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2min以上；
[0008]3)诱导培养：将步骤2)消毒后的手参芽接种在诱导培养基上培养，所述诱导培养基为MS培养基+6
‑
KT 0.3
‑
0.9mg/L+6
‑
BA 0.6
‑
1.2mg/L+NAA0.6
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1.2mg/L+PVP 20
‑
50mg/L+香蕉泥10
‑
40g/L+琼脂5.8g/L+蔗糖30g/L， pH5.8
‑
6.2。
[0009]进一步地，在步骤2)中，所述用质量分数为0.1％氯化汞消毒时间为 8min。
[0010]进一步地，在步骤3)中，所述诱导培养基为：MS培养基+6
‑
KT0.3mg/L+6
‑
BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+PVP 40mg/L+香蕉泥30g/L+琼脂 5.8g/L+蔗糖30g/L，pH为6.2。
[0011]进一步地，在步骤3)中，所述培养条件为，在25℃条件下，暗培养7d 后转至2000lx光照强度下培养25d。
[0012]本专利技术的有益效果是：本专利技术方法以芽为外植体，可获得手参组织培养无菌体系，有效地避免病毒感染，提高繁殖系数，利于满足大规模生产的需要，为手参组培快繁提供原材料，并且为手参规模化育苗奠定基础。
具体实施方式
[0013]以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限
定本专利技术的范围。
[0014]除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0015]一种手参组织培养无菌体系建立的方法，包括如下步骤：
[0016]1)采集：采集有1
‑
2cm长健壮芽的手参，经初步清洗后将芽从手参上完整的分离下来，轻剥去掉最外层1
‑
2层叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡 15min，并用软毛刷轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上；
[0017]2)消毒：用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％氯化汞消毒5
‑
10min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2min以上；
[0018]3)诱导培养：将步骤2)消毒后的手参芽接种在诱导培养基上培养，所述诱导培养基为MS培养基+6
‑
KT 0.3
‑
0.9mg/L+6
‑
BA 0.6
‑
1.2mg/L+NAA0.6
‑
1.2mg/L+PVP 20
‑
50mg/L+香蕉泥10
‑
40g/L+琼脂5.8g/L+蔗糖30g/L， pH5.8
‑
6.2。
[0019]MS培养基是一种植物组织培养技术中常用基本培养基配方，内容组成固定不变，其配方如表1所示：
[0020]表1MS培养基成分表
[0021][0022]NAA(萘乙酸)是植物生长素的一种，可促进植物细胞分化，在适宜浓度下与细胞分
裂素结合可促进苗芽再生与增殖；
[0023]6‑
BA(6
‑
苄氨基腺嘌呤)是植物细胞分裂素的一种，可促进植物细胞分裂及伸长在茎尖或芽培养中，可以打破顶端优势，促进侧芽和丛生芽的产生于增殖；
[0024]6‑
KT(6
‑
糠氨基嘌呤)，植物细胞分裂素的一种；
[0025]PVP(聚乙烯吡咯烷酮K30)，对外植体褐化有抑制效果，其作用机理为 PVP为酚类物质的专一吸附剂，PVP中CO
‑
N＝基有很强的络合多酚化合物的能力，它能使多酚化合物不能成为多酚氧化酶的底物，从而抑制褐化的发生；
[0026]香蕉泥：普通香蕉捣成泥后加入培养基中熬制即可；
[0027]诱导培养基中的6
‑
BA、6
‑
KT、PVP、NAA与香蕉泥协同配合提高对手参外植体的诱芽率，加强腋芽长势，有效地减轻褐化发生。
[0028]进一步地，在步骤2)中，所述用质量分数为0.1％氯化汞消毒时间为 8min。
[0029]进一步地，在步骤3)中，所述诱导培养基为：MS培养基+6
‑
KT0.3mg/L+6
‑
BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+PVP 40mg/L+香蕉泥30g/L+琼脂 5.8g/L+蔗糖30g/L，pH为6.2。
[0030]进一步地，在步骤3)中，所述培养条件为，在25℃条件下，暗培养7d 后转至2000lx光照强度下培养25d。
[0031]下面将结合实施例及实验数据对本申请的一种手参组织培养无菌体系建立的方法进行详细说明。
[0032]实施例1
[0033]1)采集有健壮芽(1
‑
2cm长)的手参，经初步清洗后将芽从手参上完整的分离下来，轻剥去掉最外层1
‑
2层叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上；
[0034]2)用体积分数为75％的酒精消毒30s，无本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种手参组织培养无菌体系建立的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)采集：采集有1
‑
2cm长健壮芽的手参，经初步清洗后将芽从手参上完整的分离下来，轻剥去掉最外层1
‑
2层叶片，用洗衣粉饱和溶液浸泡15min，并用软毛刷轻轻刷表面，再用流水冲洗2h后，置于超净工作台上；2)消毒：用体积分数为75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用质量分数为0.1％氯化汞消毒5
‑
10min，无菌水冲洗5次，每次冲洗2min以上；3)诱导培养：将步骤2)消毒后的手参芽接种在诱导培养基上培养，所述诱导培养基为MS培养基+6
‑
KT 0.3
‑
0.9mg/L+6
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BA 0.6
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1.2mg/L+NAA 0.6
‑
1.2mg/L+PVP...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旭东，陈凯，
申请(专利权)人：四川亿源农业有限公司，
类型：发明
国别省市：