纯化细菌多糖的方法技术

本发明专利技术涉及纯化细菌多糖的方法，尤其是去除来自产生多糖的细菌细胞裂解物的杂质。除来自产生多糖的细菌细胞裂解物的杂质。除来自产生多糖的细菌细胞裂解物的杂质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】纯化细菌多糖的方法


[0001]本专利技术涉及纯化细菌多糖的方法，特别是去除来自产生多糖的细菌细胞裂解物的杂质。
[0002]专利技术背景
[0003]细菌多糖尤其是荚膜多糖，是参与多种细菌疾病的细菌表面上发现的重要免疫原。这使得其成为疫苗设计的重要组分。它们被证明对引发免疫应答有用，特别是连接载体蛋白时。
[0004]细菌多糖通常由细菌发酵产生(如链球菌(Streptococci)(例如肺炎链球菌(S.pneumoniae)、酿脓链球菌(S.pyogenes)、无乳链球菌(S.agalactiae)或C&G群链球菌)、葡萄球菌(Staphylococci)(例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))、嗜血杆菌(Haemophilus)(例如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae))、奈瑟氏菌(Neisseria)(例如脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis))和埃希氏杆菌(Escherichia)(例如大肠杆菌(Escherichia coli))。
[0005]通常，细菌多糖用复合培养基中的分批培养、补料分批培养或连续培养产生。
[0006]需要稳健和有效的纯化工艺，其能用于发酵后大规模产生细菌多糖。
[0007]大部分过程包括沉淀荚膜多糖的步骤(如醇沉淀或阳离子洗涤剂处理)。后续从上清分离沉淀物(如通过离心)和再溶解是费力的，其可能引起多糖损失，从而降低收率。
[0008]此外，大部分纯化工艺需要数个步骤，涉及许多昂贵、劳动密集型且有技术要求的操作，如层析和多个膜分离。这些工艺中的杂质去除在许多劳动密集型且昂贵的步骤中展开。由于可溶性蛋白的物理和化学性质，蛋白水平是遇到的最大问题。
[0009]因此，需要简化的纯化工艺以减少细菌裂解物中的可溶性蛋白水平并消除目前纯化工艺的低效以产生适合纳入疫苗的大大纯化的细菌多糖。
[0010]附图简要说明
[0011]图1是多糖纯化的流程图。
[0012]图2是2％w/v明矾(alum)，在多个时间点，pH对蛋白去除和肺炎链球菌血清型8发酵液净度的影响。在1小时(左柱)、4小时(中间柱)、24小时(右柱)之后。
[0013]图3是pH 3.5，在多个时间点，％明矾对蛋白去除和肺炎链球菌血清型8发酵液净度的影响。1.0％明矾(左柱)、2.0％明矾(中间柱)、3.0％明矾(右柱)。
[0014]图4是肺炎链球菌血清型33F发酵液的酸滴定。
[0015]图5是肺炎链球菌血清型33F在pH 3.5的明矾絮凝。
[0016]图6是加热对肺炎链球菌血清型22F絮凝的发酵液粒径的影响。对于该实验，絮凝温度保持在室温(RT)(较小粒径分布曲线(峰值(peack)在9.8μm))和或45℃(较大粒径分布曲线(峰值在65μm))。
[0017]1.细菌多糖的纯化工艺
[0018]1.1起始材料
[0019]本专利技术方法能用于从溶液纯化细菌多糖，所述溶液包含所述多糖及污染物。
pneumoniae)。细菌荚膜多糖来源优选是选自血清型1、2、3、4、5、6A、6B、6C、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15A、15B、15C、16F、17F、18C、19A、19F、20、22F、23A、23B、23F、24B、24F、29、31、33F、34、35B、35F、38、72和73的肺炎链球菌血清型。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是选自以下血清型的肺炎链球菌血清型：1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15A、15B、15C、16F、17F、18C、19A、19F、20、22F、23A、23B、23F、24F、29、31、33F、35B、35F、38、72和73。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是选自以下血清型的肺炎链球菌血清型：8、10A、11A、12F、15B、22F和33F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型1。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型2。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型3。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型4。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型5。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型6A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型6B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型6C。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型7F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型8。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型9V。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型9N。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型10A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型11A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型12F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型14。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型15A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型15B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型15C。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型16F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型17F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型18C。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型19A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型19F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型20。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型20A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型20B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型22F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型23A。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型23B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型23F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型24B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型24F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型29。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型31。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型33F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型34。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型35B。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型35F。在一个实施方案中，所述细菌荚膜多糖来源是肺炎链球菌血清型38。在一个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从溶液纯化细菌多糖的方法，所述溶液包含所述多糖以及污染物，其中所述方法包括絮凝步骤。2.如权利要求1所述的方法，其中絮凝剂包含选自铝、铁、钙和镁的多价阳离子。3.如权利要求1所述的方法，其中絮凝剂包含选自以下的物质：明矾(如钾明矾、钠明矾或铵明矾)、氯化羟铝、硫酸铝、氧化钙、氢氧化钙、硫酸铁(II)(硫酸亚铁)、氯化铁(III)(三氯化铁)、聚丙烯酰胺、改性聚丙烯酰胺、聚DADMAC、聚乙烯亚胺(PEI)、铝酸钠和硅酸钠。4.如权利要求1所述的方法，其中絮凝剂选自明矾(如钾明矾、钠明矾或铵明矾)、氯化羟铝、硫酸铝、氧化钙、氢氧化钙、硫酸铁(II)(硫酸亚铁)、氯化铁(III)(三氯化铁)、聚丙烯酰胺、改性聚丙烯酰胺、聚DADMAC、铝酸钠和硅酸钠。5.如权利要求1
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4中任一项所述的方法，其中絮凝剂浓度是约0.1
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约20％(w/v)。6.如权利要求1
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5中任一项所述的方法，其中所述溶液维持一些时间以允许絮状物在下游加工前沉淀。7.如权利要求6所述的方法，其中所述絮凝步骤在酸性pH进行。8.如权利要求6
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7中任一项所述的方法，其中沉淀步骤，若存在，在约4℃
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约30℃的温度进行。9.如权利要求6
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7中任一项所述的方法，其中沉淀步骤，若存在，在约30℃
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约95℃的温度进行。10.如权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中絮凝后，通过倾析、沉积、过滤或离心使悬液澄清。11.如权利要求10所述的方法，其中过滤含有多糖的溶液。12.如权利要求11所述的方法，其中所述过滤是深层过滤。13.如权利要求11
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【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：