高产溶血磷脂酶黑曲霉重组表达菌株的构建及应用制造技术

本发明专利技术公开了高表达溶血磷脂酶的黑曲霉重组菌株及其构建方法。一种构建重组黑曲霉表达菌的方法，构建包含溶血磷脂酶的重组表达盒，该重组表达盒为包含溶血磷脂酶基因序列、启动子、终止子、筛选标记、上下游同源序列等元件的基因片段。本发明专利技术通过基因工程的手段，构建了溶血磷脂酶的表达盒，并将其导入黑曲霉表达宿主菌，实现了溶血磷脂酶的高效分泌表达，获得了高表达溶血磷脂酶的菌株。高表达溶血磷脂酶的菌株液体发酵的上清液粗酶液表达水平可达2.88g/L，活性可达2345unit/ml，比酶活可达815unit/mg。达815unit/mg。达815unit/mg。

【技术实现步骤摘要】
高产溶血磷脂酶黑曲霉重组表达菌株的构建及应用


[0001]本专利技术属于基因工程育种领域，涉及一种高产溶血磷脂酶黑曲霉重组表达菌株的构建及应用。

技术介绍

[0002]溶血磷脂酶是一种可以高效降解溶血卵磷脂的生物催化剂。溶血卵磷脂存在于多种动植物中，包括玉米，小麦，大麦，人类等。其在玉米中的存量尤其较高。然而，由于溶血卵磷脂具有强烈的油水双亲性，其会在油水混合物中形成胶束，大大增加油水混合物的粘性，改变其流变性能，导致无法对其进行过滤、搅拌、混合、盐析、溶解等进程。而使用溶血磷脂酶可以高效而快速的降解溶血卵磷脂，使其失去构成胶束的能力，并且在特性的条件下形成絮状沉淀并析出。从而大大改善溶液的流变性。其在工业生产中具有广泛的应用。然而，由于其表达量相对较低，导致其价格较高，限制了其在工业界的推广。因此，开发一种能够大量生产溶血磷脂酶的方法成为工业界的迫切需求。
[0003]目前，被研究过的溶血磷脂酶非常少，比如来自黑曲霉的、线虫的、以及人类的溶血磷脂酶。而关注提高其工业化生产量的研究几乎没有。酶的生产来源主要是微生物发酵表达。然而，目前的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产溶血磷脂酶的黑曲霉重组表达菌株的构建方法，其特征在于，以黑曲霉为宿主细胞，将含有溶血磷脂酶基因的表达盒导入到宿主细胞得到；所述的溶血磷脂酶基因选自曲霉、酵母或毛霉属来源的溶血磷脂酶基因。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的溶血磷脂酶基因，为黑曲霉来源，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，以及与SEQ ID NO.1同源性达到90％及以上的其他序列；其核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，以及与SEQ ID NO.8同源性达到90％及以上的其他序列。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述的表达盒为包含溶血磷脂酶基因序列、启动子、与启动子3
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末端连接的调控序列、终止子、筛选标记和上下游同源序列的基因片段。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于所述的启动子选自黑曲霉内源启动子或外源启动子；所述的黑曲霉内源启动子为黑曲霉糖化酶启动子，中性淀粉酶启动子，酸性淀粉酶启动子或α
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葡萄糖苷酶启动子；所述的外源启动子为米曲霉中性淀粉酶启动子或米根酶糖化酶启动子；所述的启动子3
’
末端连接的调控序列为前导序列5
’
UT。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述的表达盒还包含信号肽序列，所述的信号肽序列选自有糖化酶信号肽、酸性淀粉酶信号肽、黑曲霉植酸酶信号肽或米曲霉TAKA淀粉酶信号肽，优选溶血磷脂酶基因序列本身编码的信号肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，以及与SEQ ID NO.2同源性达到90％及以上的其他序列。其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，以及与SEQ ID NO.9同源性达到90％及以上的其他序列。6.根据权利要求3...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵正阳，
申请(专利权)人：南京正扬生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：