通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用。本发明专利技术以强抗菌株Y3334cDNA为模板扩增LeTLP1基因全长片，将线性化载体pCAMBIA1300

【技术实现步骤摘要】
通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用。

技术介绍

[0002]近年来随着全球气候变暖的加剧，全国大部分香菇主产区尤其是湖北、浙江等地暴发了受到木霉菌感染的菌棒腐烂病，对香菇产业的健康发展造成了极大的危害。尤其是香菇菌丝越夏及转色阶段，更容易受到木霉菌的侵染，受到高温的影响是导致香菇菌丝对杂菌抗性能力降低的最主要原因之一。因此，鉴定香菇对木霉的抗性，筛选出高抗香菇菌种，对于香菇的生产是非常重要的。
[0003]然而，现有技术关于香菇对木霉抗性的研究只处于表观描述阶段，没有任何的有效的抗性测定和验证方法，妨碍了香菇对木霉抗性的定性定量研究，阻碍了优秀品种的选育。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法及应用。
[0005]本专利技术的目的是提供一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法，包括本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用香菇DNA和载体pCAMBIA1300
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g构建LeTLP1过表达载体pCAMBIA1300
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OE
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LeTLP1；将pCAMBIA1300
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OE
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LeTLP1转化入农杆菌中，挑取单个阳性克隆备用；转化：香菇菌株菌丝在培养基上活化后，浸入活化好的含pCAMBIA1300
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OE
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LeTLP1农杆菌菌液；将香菇菌株菌丝接种至含有AS的共培养固体培养基Co
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IM上，共培养；之后，将菌丝块从共培养培养基挑取下来，用灭菌的蒸馏水清洗菌块，浸泡在含头孢噻肟霉素的无菌水中；之后将菌丝块吸干表面水分，转移至含有潮霉素和头孢噻肟霉素的MYG固体培养基上，25℃培养7
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12d；鉴定和筛选：挑取有潮霉素抗性的菌株进行鉴定，筛选出的阳性菌株为能超表达香菇LeTLP1基因的菌株，该菌株对深绿木霉的抗性提高。2.根据权利要求1所述的通过超表达香菇TLP基因提高香菇对深绿木霉抗性的方法，其特征在于，构建LeTLP1过表达载体具体包括如下步骤：第一步：以香菇的DNA为模板，以O
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LeTLP1
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F和O
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LeTLP1
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R为引物，对LeTLP1基因全长片段进行扩增；以香菇的DNA为模板，以O
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Legpd Promotor
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F和O
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Legpd Promotor
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R为引物，对香菇Legpd启动子片段进行扩增；O
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LeTLP1
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F核苷酸序列如下：ccacctcaaacttcggaattcTCAGGGGCAAAATGTAACAGCATA；O
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LeTLP1
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R核苷酸序列如下：ccattgactgcttgaatATGATGAAGAATTCTATCATTATCTCTGC；O
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Legpd Promotor
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F核苷酸序列如下：catATTCAAGCAGTCAATGGATTGGA；O
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Legpd Promotor
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R核苷酸序列如下：tctagaggatccccgggtaccCGAAGTTTGAGGTGGTTGCG；第二步：电泳检测并回收Legpd启动子片段和LeTLP1基因全长片段；第三步：用限制性内切酶Kpn
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I和EcoR
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I对载体pCAMBIA1300
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g进行双酶切，并将线性化载体的pCAMBIA1300
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g、Legpd启动子片...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓龙，边银丙，肖阳，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：