抗体效力测定制造技术

本发明专利技术提供一种用于测量抗体效力的基于细胞的测定。与表面结合的抗原与所述抗体接触，所述抗体又与报告细胞接触。还设想了组合物和试剂盒。物和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗体效力测定
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年4月18日提交的美国临时申请第62/835,960号的权益，该临时申请的内容全文以引用方式并入本文。
[0003]以ASCII文本文件提交序列表
[0004]以下提交的以ASCII文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式(CRF)(文件名：146392046740SeqList.txt，记录日期：2020年4月17日，大小：1,112字节)。


[0005]本专利技术提供用于分析多肽(例如，抗体或免疫粘附素)效力的方法。还设想了组合物和试剂盒。

技术介绍

[0006]最佳抗体效力测定应准确、精确并且用户友好，周转时间短且适合自动化和高吞吐量缩放。有几种反映ADCP和相关作用机制的传统生物测定，例如基于PBMC的方法、基于FACS的方法和分泌细胞因子的ELISA。遗憾的是，这些测定中的许多测定产生差异很大的结果且/或耗时。本文所述的新型效力测定使用利用反映ADCP活性的报告细胞的基于细胞的方法，并且可用于检测抗体
‑
抗原结合相互作用。
[0007]本文引用的所有参考文献(包括专利申请及公布)全部以引用的方式并入。

技术实现思路

[0008]在一些方面，本专利技术提供一种用于确定多肽的活性的方法，其中所述多肽结合靶抗原并且所述多肽包含Fc受体结合结构域，所述方法包括a)使固定化靶抗原与多肽制剂接触以形成抗原
‑
多肽复合物，b)使所述抗原<br/>‑
多肽复合物与吞噬细胞接触，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由Fcγ受体的活化作出应答；其中报告子的表达指示多肽的活性。
[0009]在一些方面，本专利技术提供一种用于定量多肽制剂的效力的方法，其中所述多肽结合靶抗原，所述方法包括a)使多个固定化靶抗原群体与不同浓度的所述多肽制剂接触以形成抗原
‑
多肽复合物，b)使所述抗原
‑
多肽复合物与吞噬细胞接触，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由所述Fcγ受体的活化作出应答，c)测量报告子的表达，和d)确定所述多肽制剂的EC
50
并将所述多肽制剂的EC
50
与已知效力的所述多肽的参考标准品的EC
50
进行比较。在一些实施例中,所述方法进一步包括使用针对参考标准品的多参数逻辑拟合，基于多肽制剂的EC50计算效力。在一些实施例中，多参数逻辑拟合是3参数、4参数或5参数逻辑拟合。在一些实施例中，参考标准品的EC
50
与多肽制剂的EC
50
同时确定。
[0010]在上述方面的一些实施例中，报告子是荧光素酶或荧光蛋白。在一些实施例中，荧
光素酶是萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶或纳米荧光素酶。在一些实施例中，对借由Fcγ受体的活化作出应答的应答元件是NFκB应答元件、NFAT应答元件、AP
‑
1应答元件或ERK应答转录因子(例如Elk1)。
[0011]在上述方面的一些实施例中，吞噬细胞是单核细胞。在一些实施例中，吞噬细胞来自细胞系。在一些实施例中，细胞系是THP
‑
1细胞系或U
‑
937细胞系。在一些实施例中，Fcγ受体是FcγRI(CD64)或FcγRIIa(CD32a)或FcγRIII(CD16)。在一些实施例中，吞噬细胞被工程设计成过表达Fcγ受体。在一些实施例中，吞噬细胞被工程设计成过表达FcγRIIa。在一些实施例中，吞噬细胞不表达FcγRIII。
[0012]在上述方面的一些实施例中，靶抗原是β淀粉样蛋白(Aβ)或CD20。在一些实施例中，靶抗原是β淀粉样蛋白(Aβ)。在一些实施例中，Aβ是人Aβ。在一些实施例中，Aβ包含单体和/或寡聚Aβ。在一些实施例中，人Aβ是Aβ1
‑
40或Aβ1
‑
42。在一些实施例中，多肽包含全长Fc结构域或Fc结构域的FcR结合片段。在一些实施例中，多肽特异性结合Aβ。在一些实施例中，多肽是抗体或免疫粘附素。在一些实施例中，多肽在克雷奈珠单抗中。
[0013]在上述方面的一些实施例中，靶抗原被固定在表面上。在一些实施例中，表面是板。在一些实施例中，板是多孔板。在一些实施例中，抗原在其N末端或附近、在其C末端或附近、或在其N末端或附近并且在其C末端或附近固定到所述表面。在一些实施例中，使用生物素
‑
链霉亲和素系统将靶抗原固定在表面上。在一些实施例中，靶抗原与生物素结合，并且表面包含结合的链霉亲和素。在一些实施例中，靶抗原在其N末端或附近、在其C末端或附近、或在其N末端或附近并且在其C末端或附近与生物素结合。
[0014]在上述方面的一些实施例中，在抗原
‑
多肽复合物与吞噬细胞接触后约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、12小时、16小时、20小时、24小时或大于24小时中的任何一者或多者之后检测报告子。
[0015]在一些方面,本专利技术提供一种用于确定多肽制剂的效力的试剂盒，其中所述多肽结合靶抗原并包含Fc受体结合结构域，所述试剂盒包含固定化靶抗原和吞噬细胞，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由所述Fcγ受体的活化作出应答，其中所述报告子的表达指示所述多肽的效力。
[0016]在一些方面,本专利技术提供一种用于定量多肽制剂的效力的试剂盒，其中所述多肽结合靶抗原并包含Fc受体结合结构域，所述试剂盒包含固定化靶抗原、吞噬细胞和参考标准品，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由所述Fcγ受体的活化作出应答，其中所述报告子的表达指示所述多肽的效力；且其中所述参考标准品包括已知效力的所述多肽的制剂。
[0017]在试剂盒的一些实施例中，报告子是荧光素酶或荧光蛋白。在一些实施例中，荧光素酶是萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶或纳米荧光素酶。在一些实施例中，对借由Fcγ受体的活化作出应答的应答元件是NFκB应答元件、NFAT应答元件、AP
‑
1应答元件或ERK应答转录因子(例如Elk1)。
[0018]在试剂盒的一些实施例中，吞噬细胞是单核细胞。在一些实施例中，吞噬细胞来自细胞系。在一些实施例中，细胞系是THP
‑
1细胞系或U
‑
937细胞系。在一些实施例中，Fcγ受体是FcγRI(CD64)或FcγRIIa(CD32a)或FcγRIII(CD16)。在一些实施例中，吞噬细胞被工程设计成过表达Fcγ受体。在一些实施例中，吞噬细胞被工程设计成过表达FcγRIIa。在一
些实施例中，吞噬细胞不表达FcγRIII。
[0019]在试剂盒的一些实施例中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于确定多肽的活性的方法，其中所述多肽结合靶抗原并且所述多肽包含Fc受体结合结构域，所述方法包括a)使固定化靶抗原与所述多肽制剂接触以形成抗原
‑
多肽复合物，b)使所述抗原
‑
多肽复合物与吞噬细胞接触，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由所述Fcγ受体的活化作出应答；其中所述报告子的表达指示所述多肽的活性。2.一种用于定量多肽制剂的效力的方法，其中所述多肽结合靶抗原，所述方法包括a)将多个固定化靶抗原群体与不同浓度的所述多肽制剂接触以形成抗原
‑
多肽复合物，b)使所述抗原
‑
多肽复合物与吞噬细胞接触，其中所述吞噬细胞包含Fcγ受体和编码可操作连结到应答元件的报告子的核酸，所述应答元件对借由所述Fcγ受体的活化作出应答；c)测量报告子的表达，以及d)确定所述多肽制剂的EC
50
，并将所述多肽制剂的所述EC
50
与已知效力的所述多肽的参考标准品的EC
50
进行比较。3.根据权利要求2所述的方法，其进一步包括使用针对所述参考标准品的多参数逻辑拟合，基于所述多肽制剂的所述EC
50
计算所述效力。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述多参数逻辑拟合是3参数、4参数或5参数逻辑拟合。5.根据权利要求2
‑
4中任一项所述的方法，其中所述参考标准品的所述EC
50
与所述多肽制剂的所述EC
50
同时确定。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中所述报告子是荧光素酶或荧光蛋白。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述荧光素酶是萤火虫荧光素酶、海肾荧光素酶或纳米荧光素酶。8.根据权利要求1
‑
7中任一项所述的方法，其中对借由所述Fcγ受体的活化作出应答的所述应答元件是NFκB应答元件、NFAT应答元件、AP
‑
1应答元件或ERK应答转录因子。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的方法，其中所述吞噬细胞是单核细胞。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的方法，其中所述吞噬细胞来自细胞系。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述细胞系是THP
‑
1细胞系或U
‑
937细胞系。12.根据权利要求1
‑
11中任一项所述的方法，其中所述Fcγ受体是FcγRI(CD64)或FcγRIIa(CD32a)或FcγRIII(CD16)。13.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的方法，其中所述吞噬细胞被工程设计成过表达Fcγ受体。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述吞噬细胞被工程设计成过表达FcγRIIa。15.根据权利要求1
‑
14中任一项所述的方法，其中所述吞噬细胞不表达FcγRIII。16.根据权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中所述靶抗原是β
‑
淀粉样蛋白(Aβ)或CD20。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述靶抗原是β
‑
淀粉样蛋白(Aβ)。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述Aβ是人Aβ。19.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述Aβ包括单体和/或寡聚Aβ。20.根据权利要求17所述的方法，其中所述人Aβ是Aβ1
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40或Aβ1
‑
42。21.根据权利要求1
‑
20中任一项所述的方法，其中所述多肽包含全长Fc结构域、或Fc结构域的FcR结合片段。22.根据权利要求1
‑
21中任一项所述的方法，其中所述多肽特异性结合Aβ。23.根据权利要求1
‑
22中任一项所述的方法，其中所述多肽是抗体或免疫粘附素。24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述多肽在克雷奈珠单抗(crenezumab)中。25.根据权利要求1
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24中任一项所述的方法，其中所述靶抗原固定在表面上。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述表面是板。27.根据权利要求26所述的方法，其中所述板是多孔板。28.根据权利要求25
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27中任一项所述的方法，其中所述抗原在其N末端或附近、在其C末端或附近、或在其N末端或附近和在其C末端或附近固定到所述表面。29.根据权利要求25
‑
28中任一项所述的方法，其中使用生物素
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【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：基因泰克公司，
类型：发明
国别省市：