针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，该试剂盒包括细胞检测组件

【技术实现步骤摘要】
针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程和抗体检测
，涉及针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]重症肌无力(MG)是一种由针对神经肌肉接头蛋白的抗体(Ab)引起的自身免疫性疾病，病症是波动性肌肉无力和易疲劳。MG全球患病率为(150～250)/百万，预估年发病率为(4～10)/百万。我国MG发病率约为0.68/10万，女性发病率略高；住院死亡率为14.69
‰
，主要死亡原因包括呼吸衰竭、肺部感染等。
[0003]在约85％MG患者中可检测到针对肌肉乙酰胆碱受体(AChR)的抗体。已知肌肉AChR由五个同源亚基组成，在胎儿或失神经肌肉中为(α1)2、β1、δ、γ，在成人肌肉中为(α1)2、β1、δ、ε(如图12所示)。每个亚基都有一个高度结构化的细胞外结构域(ECD)，四个跨膜结构域和部分结构化的细胞内结构域。自身抗体靶向AChR亚基的ECD，其异质性较强，可在同一患者中发现针对AChR五个单亚基的自身抗体。据报道，约50％的AChR自身抗体与α单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括细胞检测组件，所述细胞检测组件的制备包括以下步骤：S1：获取AChR单亚基的目的基因；S2：将步骤S1得到的AChR单亚基目的基因分别与荧光标记载体连接，构建得到真核表达质粒；S3：将步骤S2得到的真核表达质粒分别转染细胞，得到含荧光标记的AChR单亚基抗原的转染细胞，即细胞检测组件。2.如权利要求1所述的针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述AChR单亚基分别为α1、β1、δ、ε、γ，载体为pCMV6
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AC
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GFP。3.如权利要求2所述的针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述S1包括以下步骤：(1)从肝脏细胞系中提取的总RNA为模板反转录得到cDNA；(2)通过NCBI检索关键词CHRNA1、CHRNB1、CHRND、CHRNE、CHRNG，分别得到人AChR单亚基α1、β1、δ、ε、γ目的基因对应的mRNA转录本，根据选定的mRNA转录本的CDS设计相应的上游引物和下游引物，PCR扩增步骤(1)得到的cDNA得到相应的人AChR亚基α1、β1、δ、ε、γ目的基因；(3)将步骤(2)得到的PCR产物进行纯化，得到纯化后的人AChR单亚基α1、β1、δ、ε、γ目的基因；并将纯化后的α1、β1、δ、ε、γ目的基因进行双酶切。4.如权利要求3所述的针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述步骤(2)α1的上游引物为ATTGCGATCGCCATGGAGCCCTGGCCT，下游引物为CGACGCGTTCCTTGCTGATTTAATTCAATGAGTCGACC；β1的上游引物为ATTGCGATCGCCATGACCCCAGGGGCT，下游引物为CGACGCGTAGGAAAGGGGTCTGGAGG；δ的上游引物为ATTGCGATCGCCATGGAGGGGCCAGTG，下游引物为CGACGCGTGATGAAGCGCTTGTCCTGC；ε的上游引物为ATTGCGATCGCCATGGCAAGGGCTCCG，下游引物为CGACGCGTAGGCTGGATACACGGCGCGTA；γ的上游引物为ATTGCGATCGCCATGCATGGGGGCCAGG，下游引物为CGACGCGTGTCTGGTGAGGGCAGGTA。5.如权利要求2所述的针对AChR单亚基抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述S2包括以下步骤：(1)将pCMV6
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AC
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GFP载体进行双酶切、胶回收得到纯化的pCMV6

【专利技术属性】
技术研发人员：高峰，周淑贤，贺笑笑，纪莹，张迎娜，吕杰，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：