CD38在制备CAR-T药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CD38在无需进行抗体封闭CD38抗原的基础上制备CAR

【技术实现步骤摘要】
CD38在制备CAR
‑
T药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药
，具体涉及CD38的用途，尤其涉及CD38在制备CAR
‑
T药物中的应用。

技术介绍

[0002]CD38被证实广泛表达于多种恶性血液瘤，因此靶向CD38的CAR
‑
T有望成为治疗CD38
+
血液瘤的有效措施。然而CD38作为大部分T细胞都表达的膜抗生物标记物，理论上很难成功制备CD38特异性CART细胞。
[0003]CD38和血液肿瘤是多种恶性血液肿瘤的潜在治疗靶点。据统计，90％的多发性骨髓瘤(MM)患者表达高水平CD38，并且CD38的表达与病人的生存期密切相关。除MM外，CD38也在急性髓性白血病(AML)，急性B淋巴细胞白血病(B
‑
ALL)等多种恶性血液癌症中高表达。目前针对CD38
+
hematologic malignancies的治疗主要依赖于抗CD38单克隆抗体，抗CD38抗体主要是通过抗体依赖细胞毒性和抗体依赖吞噬作用靶向CD38
+
恶性细胞。目前已有2款CD38单克隆治疗抗体(Daratumumab,isatuximab)获批上市，在临床上显示出了一定的治疗效果。但对于CD38
+
的恶性血液肿瘤依然需要开发更有效的治疗方式。
[0004]近年来，嵌合抗原受体T细胞疗法在恶性血液肿瘤治疗中取得了突破性的进展。CAR结构是将抗体中可以直接识别肿瘤抗原的可变单链区域scFv(抗原受体)、共刺激信号都嵌合到T细胞的激活信号通路CD3ζ链上。CART不受识别肿瘤细胞的MHC分子限制，可以直接识别肿瘤细胞表面抗原快速清除肿瘤细胞。CAR
‑
T治疗临床成功的关键之一在于选择合适的CAR靶向抗原，CAR分子的胞外域通常来源于单克隆抗体的抗原结合区，由于CD38广泛表达于多种恶性血液瘤，CD38可作为抗原特异性过继细胞治疗的潜在靶点。CD38在T细胞激活和分化过程中受到严格调控，人体CD38在早期T细胞前体和CD4
+
veCD8
+
ve双阳性胸腺细胞上高表达。在阴性选择过程中，CD38表达减少，成熟的单阳性T细胞表达低水平的CD38。然而，从外周血中分离的成熟T细胞在抗原活化或对多克隆刺激的反应中可以重新获得CD38表达。研究显示，CD38是一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD
+
)糖水解酶，其通过消耗细胞NAD
+
产生cADPR等二级信使来干扰T细胞内信号传导和代谢过程。CD38通常被报道在免疫系统和免疫反应中起抑制作用，过度刺激CD38会抑制抗肿瘤免疫联系并促进肿瘤发展。
[0005]因此需要探讨能否制备临床级别的CD38阴性的CD38
‑
targeted CART细胞和这些细胞抗肿瘤的可行性。

技术实现思路

[0006]有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术要解决的技术问题是提供CD38在制备CAR
‑
T药物中的应用。
[0007]本专利技术采用如下技术方案：
[0008]CD38在制备CAR
‑
T药物中的应用，特别是在无需进行抗体封闭CD38抗原的基础上制备CAR
‑
T药物。
CAR
‑
T细胞的CD4/CD8比值，图3F表示T细胞和CD38阴性的anti
‑
CD38 CAR
‑
T细胞亚型的变化，图3G
‑
图3I表示T细胞和CD38阴性的anti
‑
CD38 CAR
‑
T之间的细胞亚型分布。
具体实施方式
[0019]为了使专利技术实现的技术手段、创造特征、达成目的和功效易于明白了解，下结合具体图示，进一步阐述本专利技术。但本专利技术不仅限于以下实施的案例。
[0020]须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本专利技术所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本专利技术所揭示的
技术实现思路
得能涵盖的范围内。
[0021]实施例1：
[0022]第一步，本实施例中，CAR结构是由CD8衍生的链接和跨膜结构域，CD28和4
‑
1BB共刺激结构域，以及CD3
‑
zeta信号域一同组成，如图1A所示。实验中，共收集17例来源于健康供体或患者的T细胞，通过用编码CAR的慢病毒载体转导，生成识别CD38的CAR修饰T细胞(CART
‑
38)。如图1B所示，采用流式细胞术对转导后的T细胞表面的CAR表达量进行验证，CAR基因转导效率的中位数为59.63％
±
3.988％。如图1C所示，在培养7至13天后，细胞总数达到7至104倍的扩增，这表明靶向CD38的CART细胞可以在体外扩增培养。在培养过程中，如图1D所示，随着培养时间增加CD38
+
细胞逐渐减少。如图1E所示，在慢病毒转导次日(D1)CD38
+
细胞开始减少(27.2％
±
6.766％)，之后的培养中CD38阳性细胞比例持续下降，第五天时CD38阳性细胞基本消失(1.159％
±
0.348％)。在最终获得的CART
‑
38中CD38
+
比例极低(5.143％
±
2.415％)，如图1F所示。这些结果表明CD38
+
细胞受到CART
‑
38的攻击后凋亡，而CD38阴性T细胞在制备过程中被筛选保留，所以最终获得的CART
‑
38细胞为CD38阴性。
[0023]因此需要验证能否采用CD38阴性的CART细胞作为CD38
+
血液瘤的治疗策略，要验证这一猜想首先需要确定在没有CD38的情况下T细胞是否还具备免疫应答能力。
[0024]第二步，检验CART
‑
38细胞是否对CD38
+
肿瘤细胞具有特异性的识别。构建稳定表达CD38抗原的K562靶细胞，在经丝裂霉素处理后将靶细胞与CART细胞共培养，CD38
－
的K562细胞系作为对照组参考。如图2A所示，在CD38
+
靶细胞的刺激下，CART细胞可在短期内扩增，这说明CART
‑
38细胞能识别CD38
+
肿瘤细胞，并在CD38抗原刺激下扩增。为进一步评估CART细胞的特异性细胞毒性，将CART
‑
38分别与K562
‑
CD38细胞和K562细胞共孵育。如图2B所示，CART
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CD38在制备CAR
‑
T药物中的应用，其特征在于，在无需进行抗体封闭CD38抗原的基础上制备CAR
‑
T药物。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CAR
‑
T药物在制备抗肿瘤药物中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤是恶性血液肿瘤。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述恶性血液肿瘤是急性髓性...

【专利技术属性】
技术研发人员：余宙，叶晶，徐南，谭静雯，康立清，
申请(专利权)人：上海优卡迪生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：