一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法技术

本发明专利技术公开了一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，通过制备琼脂凝胶置于细胞培养板的孔底，并对琼脂凝胶进行酸化、漂洗及表面的阳离子活性处理，将待观察细胞接种于所得琼脂凝胶表面，在后续样品处理制备中，经过锇酸固定、漂洗后，用手术刀和显微镊切去含有细胞生长的琼脂凝胶块，转移至另一培养板中，进行后续脱水、渗透，并在胶囊型包埋板中进行样品包埋，随后进行常规的切片、染色及上机观察。该方法可以避免常规样品处理方式所造成的培养细胞原始生长位置的改变和超微结构变化，而使得对实验结果判断的谬造误；同时，对于培养细胞的原位电镜观察及研究相邻细胞间超微结构关系具有重要意义。间超微结构关系具有重要意义。间超微结构关系具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法。
[0002]
技术介绍

[0003]透射电子显微镜观察是目前唯一能够从形态学领域对细胞内部的超微结构进行观察、研究的手段。 通常地，培养的贴壁细胞的透射电镜观察，样品制备时需要先对细胞进行是酶消化法或机械刮取的方式并通过离心将细胞聚集成团，然后按照常规方法处理。 但酶消化或机械刮擦并离心收集细胞法存在很大的缺点：一是所观察细胞在外形、表面结构、内部超微结构形态均可能会发生极大变化，严重影响细胞超微结构的真实性和后期对观察结果分析判断的科学性；二是酶消化、机械刮并离心法破坏了细胞在培养生长状态下相邻细胞间的原始相互位置关系，对很多特定的科学研究具有极大的不利影响，如体外观察施万细胞与背根节神经元轴突共培养下的成髓鞘。
[0004]
技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术中存在问题或不足，本专利技术提供一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，能有效避免培养细胞样品的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，其特征在于，包括以下过程：S1、通过制备1~4%的琼脂凝胶置于细胞培养板或培养皿的孔底，并对所得琼脂凝胶进行酸化、漂洗及表面的阳离子活性处理；S2、将待观察细胞接种于所得琼脂凝胶表面；S3、对步骤S2所制备的样品进行后续处理，再经过锇酸固定、漂洗后，用手术刀和显微镊切去含有细胞生长的琼脂凝胶块，转移至另一培养板或培养皿中；S4、对步骤S3所制备的样品进行后续脱水、渗透，并在胶囊型包埋板中进行样品包埋；S5、随后进行常规的切片、染色及上机观察。2.根据权利要求1所述的一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括以下过程：S1
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1、称取1~4克琼脂粉盛放于洁净玻璃锥形瓶中，加入100ml 双蒸水，经微波炉加热充分溶解后配制1~4%琼脂溶液；S1
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2、吸取上述尚未凝固的1~4%琼脂热溶液，琼脂热溶液的温度为45~60℃，添加至无菌细胞培养板的培养孔或细胞培养皿，吸取琼脂溶液量以溶液覆盖孔底或皿底深度2mm；S1
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3、将上述盛有琼脂溶液的细胞培养板或细胞培养皿静置在平整的台面，室温下待溶液冷却凝固；S1
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4、吸取2%冰醋酸至上述细胞培板或细胞培养皿中凝固的琼脂凝胶表面，室温下酸化处理3小时；S1
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5、弃去冰醋酸溶液，加入0.1mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS）静置漂洗10分钟，弃去洗液；S1
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6、重复上述漂洗环节3次，弃去漂洗液，自然晾干；S1
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7、在上述晾干的琼脂凝胶表面，加入 0.25%胰蛋白酶溶液进行琼脂凝胶表面的阳离子活性处理，室温静置2小时，或4℃过夜；S1
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8、弃去胰蛋白酶溶液，加入PBS漂洗10分钟；S1
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9、弃去上述漂洗液，重复漂洗2次，弃去漂洗液，室温自然晾干琼脂凝胶备用；S1
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10、将上述晾干的琼脂凝胶备在超净台内进行紫外辐照灭菌。3.根据权利要求1所述的一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括以下过程：S2
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1、将待接种细胞，用培养该细胞所用的完全培养基调整成所需的细胞密度，制备待接种细胞的细胞悬液；S2
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2、吸取上述细胞密度的细胞悬液，添加至含有步骤S1所制备的琼脂凝胶的细胞培养板或细胞培养皿中，将步骤S2
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1中所制备的具有细胞悬液的细胞培养板或细胞培养皿放置在37℃、饱和湿度、含5% C02的细胞培养箱中静置培养12~24h。4.根据权利要求1所述的一种透射电镜观察用原位体外培养细胞的样品处理方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括以下过程：S3

【专利技术属性】
技术研发人员：朱昌来，贺小琴，刘小曼，刘芳，王莹洁，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：